.1 .•.^: .ti(r^ ^ '^'^■j^ if^- ^ .^ m ß<.4 ■ >v r^k--'^ -•c^'-'C^ if*- / '^ .S^iC ZEITSCHRIFT FÜR WISSENSCHAFTLICHE MIKROSKOPIE UND FÜR MIKROSKOPISCHE TECHNIK BEGRÜNDET ^'ON \V. .1. BEHEENö Unter besonderer Mitwirkung von Prot'. Dr. Paul Schietferdecker und Prof. Dr. E. Soininerfelilt in Bonn ni Tübingen herausgegeben von Prof. Dr. EKNST KÜSTER in Halle a. S. Ba7td XXV (Jahrgang 1908) Mit (J9 Textabbildungen und 5 T a 1" e I n LEIPZIG Verlag- von S. Hirzel 1908 Alle Recbte vorbehalten. 19^ 1 11 li a 1 1 s Y e r z e i c h n i s. I. Abhandlungen. Seite Artom, C, Über ein \'ei-faliren, die beschälten Eier von Ascaris uieg-. mit jedem .gewünschten Konservierungsmittel zu fixieren . . 3 r.ödecker, C. F., Celloidin-Entkalkungs- und Entkiesekmgs-Methode 21 liraus, H., Das neue orthomorphe Stereoskop von v. Rohr -Köhler und seine Anwendung in der Rekonstruktionsteclmik . . . 282 Rreckner, A., Zur doppelten Einbettung in Celloidin und Paraffin . 29 Cavazza, L. E., Kicerche sperimentali: (Jontributo allu studio dei Tannini 13 Dantschakolf, W., Zur Herstellung der ( 'elloi'dinserien ' 32 Engel, Ein Kreuztisch mit automatischer Einstellung 60 Fischel, A., l'ber eine vitale und spezifische Nervenfärbung . . . 154 Fleiscbmauu, L., Eine einfache Methode zur Darstellung der organi- schen Bestandteile des Zahnschmelzes 31 G Funek, Ch. , Dispositifs permettant Biltz , W. , Einige Versuche über ultramikroskopische Löslichkeits- bestimmung 73 Björkenheim, E. A., Zur Kenntnis der Schleimhaut im Uterovaginal- kanal des Weibes in den verschiedenen Altersperioden . . . 233 Böhm, A., u. Oppel, A., Taschenbuch der mikroskopischen Technik 321 Brand, F., Weitere Bemerkungen über Porphyridium cruentum (Ag.) Naeg 511 Brefeld, O., Die Kultur der Pilze und die Anwendung der Kultur- methoden für die verschiedenen Formen der Pilze nebst Bei- trägen zur vergleichenden Morphologie der Pilze und der natürlichen Wertschätzung ihrer zugehörigen Fruchtformen . 248 Brückner, F., Une modification pratique du procede de Romanowsky, pour le sang et le treponeme 472 Brugsch , Th. , u. Schlittenhelm , A. , Lehrbuch klinischer Unter- suchungsmethoden für Studierende und Ärzte 321 Buard, G., Recherche de l'indol dans les cultures microbiennes . . 361 Yl luhaltsverzeiehnis. Soite Bucliholz , W. , Zur kulturellen Untersclieiiluns- der Typhus-Pjir;i- tyi)hus-Kolibakterien uutereinjinder li'd Butterfleld, E. E., Über die ungranulierten A'orstufen der Myelocyten und ihre Bildung in Milz. Leber und Lymphdrüsen. [Ein Bei- trag zur Histogenese der niyeloidcn Umwandlung bei Leukämie und Anämie] "214 Buxtoii, B. H., u. Teagiie. ().. iJber Ausflockung von Kolloiden. . 258 Cajal y Ramön, S.. L'appareil reticulaire de (.iOLO[-Hoi,MORi:x colore par le nitrate d'argent 1(>4 Carreras, R., L'impregnazione urgentica associnta all'uso della piridina per la colorazione del tessuto nervoso 47o Cepede, Cas. , öur une nnuvelle cuvette ä coloration ä rainures mobilem .■!2(; ("laussen, P. , Über Entwickhing und Befruchtung bei .Saprolegnia monoica 251 Curreri , G. . Ricerche intorno alla natura delle spine collatorali dei pridungamenti dendritici delle cellule nervöse 334 J)eineka. D., Das Nervensystem von Ascaris 210 DieiilatV', L., et Herijin, A., Histogenese de lUs maxillaire inferieur 331 Bisse, J., Über die Bildung des Knochengewebes 4^)4 Docters vau Leeuwen -Roi.jnvaan, AV. u. .7., Über die Spermato- genese der Moose , speziell mit Berücksichtigung der Zentro- somen- und Reduktionsteilungsfragen 254 — , — , Über das Färben der jüngsten Zellwände in A'egetations- punkten 3G3 Dogiel, V.. Catenata, eine neue Mesozoengrujjpe 213 Donau, J., Über den Nachweis von Gold, Silber und den Platin- metallen durch die Phosphorsalzperle 129 Dremv, H. , Dermatohistologische Technik iler UxxAschen Färbe- methode für den Praktiker 4it5 DUrkeu. B., Die Tracheenkiemenmuskulatur der Ephemerideu unter Berücksichtigung der Morphologie des Insektenflügels ... 81 Duesberg, J., Sur l'existence de mitochondries dans Iduf et lembryon d'Apis mellifica 2()1 Dumauski, A., Ultramikroskopische Untersuchungen des Eisen- hydroxydhydrosols 258 Eisenberg, Ph., Studien zur Ektoplasmatheorie. I. Iber die Kapsel- bildung beim Milzbrandbazillus 507 — , — , Über Fetteinschlüsse bei Bakterien, l'aibchemische Unter- suchungen 502 Eisler. E., Deckel und Brutpflege bei Spirorbis .' . . 87 Engelniaun, M. , Untersuchungen üüer die elastischen Fasern der Lymphknoten von Pferd , Kind, Schwein und Ilund und über die an ihnen ablaufenden Alters Veränderungen 217 Federici, F., L'ether sulphurique comme liquide intermediaire pour l'inclusion ä la parafflne et l'inclusion nn'xte h la celloidine et paraffine 200 Inhaltsverzeichnis. VII Seite Fehrs ii. Sachs -Müke. Beitrag /au- Züchtung und Isolierung von Anaörobiern 359 Fraeukel, E., Über den Uterus senilis, insbesondere das Verhalten der Arterien in demselben 107 Gage, S. Ph., The luethod of raaking raodels from sheets of blotting paper 74 Gates. R. R. , Pollen development in hybrids of Oenothera lata ;k 0. Lamarcklana and its relation to rautation 256 Gerini, C. , Quelques recherches sur les premieres phases de deve- loppement des neurofibrilles primitives chez l'embryon du poulet 498 Goldschmidt, R. , Das Nervensystem von Ascaris lumbricoides und megalocephala 479 Gottberg, M., Methoden zur Darstellung von Spirochäten und Try- panosomen in Organschnitten 238 Gow, J. E., Embryogeny of Arisaema triphyllum 254 — , — , Morphology of Spathyema foetida 25G Grohs. W., Die Primitivrinne der Fluß-Seeschwalbe [Sterna hirundo L.] 107 Grochmalicki, J., Über die Linsenregeneration bei Knochenfischen . 23(1 Griiber, G. B. , Über die Beziehung von Milz und Knochenmark zu- einander. Ein Beitrag zur Bedeutung der Milz bei Leukämie o4G Guieysse, A., Platine oscillante de Nachet pour la microphoto- graphie stereoscopique 71 — , — , Etüde des organes digestifs chez le scorpion 328 Guilllermond, A. , Contribution ä l'etude cytologique des Bacillus endospores 35G Guiliiermond. A. , et Mawas, Characteres histo-chimiques des gra- nulations des Mastzellen et rapport de ces corps avec la volutine des protistes 330 Hager, H., Das Mikroskop und seine Anwendung 70 Hamburger. C. Das Männchen von Lacinularia socialis Ehrbg, . . 80 Hammar, J. A., Zur Kenntnis der Teleostierthymus 497 Harrison, F. C, Eine neue Geißelfärbung für Pseudomonas radicicola 357 Hata, J., Über eine einfache Methode zur aerobischen Kultivierung der Anaeroben, mit besonderer Berücksichtigung ihrer Toxin- produktion 247 Heidinger, W., Die Entwicklung der Sexualorgane bei Vaucheria 253 Heinemann, P. G., Ein Ersatz für Kartoffeln als Kulturboden. . . 3.58 Heinzerling, O., Der Bau der Diatomeenschale mit besonderer Be- rücksichtigung der ergastischen Gebilde und der Beziehung des Baues zur Systematik 125 Heuderson, L. J., a. Webster, H. B., The preservation of neutrality in culture media with the aid of phosphates 359 Heuderson, W. D., Zur Kenntnis der Spermatogenese von Dytiscus marginalis L., nebst einigen Bemerkungen über den Nucleolus 83 Hermau, M., Sur la coloration du bacille tuberculeux 118 Herxheimer, G., Zur Pathologie der Gitterfasern der Leber. Zugleich ein Beitrag zur Frage der sogenannten .,Stauungscirrho3e" . 347 VllI Inhaltsvei'zeichnis. Seite Herxheiiiier, G., ii. Gierlicli, N., Studien über die Neurofibrillen im Zentralnervensystem. Entwicklung und normales Verhalten. Veränderungen unter pathologischen Bedingungen .... 105 Herzojo;, A., Mikrophotographischer Atlas der technisch wichtigen Faserstoffe. Handbuch der mikroskopischen Untersuchungs- raethoden für Textil-, Papier-, Seiler-, Stopf- und Kürsten- materialien 322 Herzog, F., Über das Vorkommen von Blutkörperchensehatten im Blutstrom und über den Bau der roten Blutkörperchen . . . 214 Heß, E., Das mikroskopische Aussehen von gehärtetem und über- sättigtem Stahl 366 Hocke, M., Beiträge zur vergleichenden Histologie des Pankreas der wichtigsten Haussäugetiere (^Hund, Katze, Schwein, Schaf, Ziege, Rind, Pferd) mit besonderer Berücksichtigung des „Aus- führenden Apparates" und der „Pankreas -Inseln'' 350 Hoirmann, R. W., Über die Morphologie und die Funktion der Kau- werkzeuge und über das Kopfnervensystem von Tomocerus plumbeus L. 3. Beitrag zur Kenntnis der CoUembolen . . . 202 — , — . Beitrag zur Färbung und Morphologie des Streptococcus mucosus 240 Hofsten, N. v., Studien über Turbellarien aus dem Berner Uberlantl 85 Hüne, Antiformin zur Anreicherung der Tuberkelbazillen im Auswurf, Stuhl, Urin usw 509 linmisch, K. B. , Untersuchungen über die mechanisch wirkenden Papillen der Mundhöhle der Haussäugetiere 342 Janicki, C. v. . Über die Embryonalentwicklung von Taenia serrata GoEZE 87 — , — , Über den Hau von Araphilina liguloidea Diesing 211 Jurewitsch, W., Kartoffelnährbouillon zur Züchtung der Tuberkel- bazillen 358 Kallius, E. , ('her die P^ntfernung der Gallerthülle des Amphibien- laiches 500 Karsten, G., Die Entwicklung der Zygoten von Spirogyra jugalis . 251 Kassianow, N., Untersuchungen über das Nervensystem der Alcyo- naria 481 Katz, L., Zur mikroskopischen Untersuciiung des inneren Ohres . . 109 Kaiiffman, C. H. , A contribution to the physiology of the Sapro- legniaceae with special reference to the variations of the sexual Organs 365 Klinge, E., Die inneren Irisschichten der Haussäugetiere 352 Klopstock, M., u. Kowarsky, A., Praktikum der klinischen, chemisch- mikroskopischen und bakteriologischen Untersuchungsmethoden 320 Koch , A. , Jahresbericht über die Fortschritte in der Lehre von den Gärungsorganismen 501 Köhler, A., Untersuchungen über das Ovarium der Hemipteren . . 81 Kohl, F. G. , Die Hefepilze, ihre Organisation, Physiologie, Biologie und Systematik, sowie ihre Bedeutung als Gärungsorganisraen 250 Inhaltsver/.oiclmis. IX Seite Krauß, F., Über die Genese des Chordaknorpels der Urodelon und die Natur des Chordaf^ewehes 4 Liefmann, H., Ein einfaches Verfahren zur Züchtung und Isolierung anaerober Keime 121 Loewit, M., Über die Membran und die Innenkörper der Säugetier- erythrocyten. Ein Beitrag zur Entstehung und zum Unter- gange der roten Blutkörperchen 88 Lorleberg, O., Untersuchungen über den feineren Bau des Nerven- systems der Ascidien 208 Lubenau, C, Weiteres über das Koffeinanreicherungsverfahren zum Nachweise von Typhusbakterien in Stuhl und Wasser . . . 242 — , — , Der Eigelbnährboden als Ersatz des Serums zur Kultur von Diphtherie- und Tuberkelbazillen 243 Mandelbaum, N., Eine vitale Färbung der Spirochaete pallida. . . 115 Marchand, Über die natürliche Fixierung von Blutpräparaten . . . 328 Marino. F., Methode pour isoler les anaerobies 121 ■^ Tnhaltsverzeiclinis. Seite Marpinann, G. , Wie sammelt man rezente Meerwassercliatoraeen auf dem Festlande'? 12(5 — , — , Über Befunde von Benzoesäure in Pinguicula vulgaris . . . 127 Marshall, W. S., Contributions towards the Embryology and Anu- tomy of Polistes pallipes. 2. The early History of tlic cellular Elements of the Ovary o28 Martini, E., Über Subcuticula und Seitenfelder einiger Nematoden 11 85 Masur. A., Beiträge zur Histologie und Entwicklungsgeschichte der Schmelzpulpa 220 Meikle.joliu , S. .T, , On the development of the plexiform nerve mechanism of the alimentary canal 338 Mencl, E., Über die Histologie und Histogenese der sogenannten l'unktsubstanz Leydigs in dem Bauchstrange der Hirudineen 32(j Mei'tou, H., Über den feineren Bau der Ganglienzellen aus dem Zentralnervensj'stem von Tethys leporina Clv 20(5 Meves, F., Die Chondriosomen als Träger erbhcher Anlagen. Cyto- logische Studien am Hühnerembryo 484 Meves, F., u. Duesberg, J. . Die Spermatozytenteilungen bei der Hornisse (Vespa crabro L.) 475 Meyer, A., Der Zellkern der Bakterien 11(3 Mez, C, Der Hausschwamm und die übrigen holzzerstörenden Pilze der menschlichen Wolinungen. Ihre Erkennung, Bedeutung und Bekämpfung 248 Michailow, S., Die Nerven des Endocardiums 228 ^, — , Zur Frage über den feineren Bau des intrakardialen Nerven- systems der Säugetiere 337 — , — , Die Neurofibrillen der sympathischen ( Janglienzellen bei Säuge- tieren 341 — , — , Die feinere Struktur der sympathischen Ganglien der Harn- blase bei den Säugetieren 499 Mie. G., Die optischen Eigenschaften kolloidaler Goldlcisungen . . . 131 Moliscli, H., Über einige angeblich leuchtende Pilze 36(5 Moll, J. W., Die Fortschritte der mikroskopischen Technik seit 1870 122 Mottrani. V. H., Grannies of mammalian liver cells 346 Mücke, M., Zur Kenntnis der Eientwieklung und Befruchtung von Achlya polyandra de Bary 252 Mügge, O., Über einige Demonstrationsversuche an Leucit, Kryolith, Perowskit, Gadolinit, Quarz und Quarzglas mit dem Leiimaxn- schen P^rhitzungsmikroskop 307 Mühlens, P. , u. Lohe, Über Ziiclitungsversuche der Spirochaete pallida 508 Müller, H. , Untersuchungen über Eibildung bei (Tadonemiden und Oodoniden 2o5 Nakao, A., Der Nachweis des Tuberkelbazillus im Sputum .... 510 Nathan, M. , La cellule de Kupffer (cellule endotheliale des capil- laires veineux du foie), ses reactions experimentales et jiatho- logiques. I. La cellule de Kupffer h l'ctat normal .... 347 luhaltsverzoirlinis. XI Seite Nathan, M. , La cellule de Kupffer (cellule endotheliale des capil- laires veineux du foie), ses reactions experimentales et patho- logiques 348 Nemec, B., Über die Natur des Bakterienprotoplasten 511 Ncstler, A. , Die hautreizende Wirkung der Priraula niollis Hook. und Fr. Arendsii Fax 364 — . — , Über „hautreizende" Fflanzen 364 Neiimanu, G. , Über die Untersuchung von Typhusstuhl mittels Ma- lachitgrünnährboden 245 Nichols, M. L., The developraent of the poUen of Sarracenia . . . 254 Nießen, M. v. , Der Syphilisbazillus. Seine Geschichte, Literatur, Kultur und spezifische Fathogenität für Tiere und Menschen 51() Nirenstein , E. , Über den Ursprung und die Entwicklung der Gift- drüsen von Salamandra maculosa nebst einem Beitrage zur Morphologie des Sekretes 4'J7 Nouotte, M. , et Demanche, R. , Dosage de Findol dans les cul- tures microbiennes . 361 — . — , — , — , Snr la recherche de Findol dans les cultures micro- biennes 361 Nowikotf, 31., Über die Kückensinnesorgane der Flacophoren nebst einigen Bemerkungen über die Schale derselben 85 — , — , Über den Bau des Medianauges der Ostracoden 476 — . — , Beobachtungen über die Vermehrung der Knorpelzellen, nebst einigen Bemerkungen über die Struktur der hyalinen Knorpel- substanz 491 Nxisbaum, J. , Weitere Regenerationsstudien an Folychäten. Über die Regeneration von Nereis diversicolor (0. F. MtJLLEK) . . 205 Ochs, A,, Die intrauterine Entwicklung des Hamsters bis zum Beginn der Herzbildung 223 Oes, A., Über die Autolyse der Mitose 127 Ognew, S. J. , Materialien zur Histologie des BiDDEUschen Organs der Kröten 224 Olive, F. W. , Sexual cell fusions and vegetative nuclear divisions in the rusts 366 Ortmaun , AV. , Zur Embryonalentwicklung des Leberegels | Fasciola hepaticaj 478 Ostwald, W., Der Werdegang einer Wissenschaft 322 Fadlewsky, L. , Eine neue Anwendungsmethode des Malachitgrün- agars zum Nachweis von Bazillen der Typhusgruppe . . . 508 Teabody, F., u. Pratl, J. , Über den Wert von Malachitgrünnähr- böden zur Diiferenzierung von Typhus- und Kolonbazillen. Be- schreibung einer neuen Methode zur Isolierung von Typhus- bazillen aus dem Stuhl 119 Perez, Ch. , et Gendre, E., Frocede de coloration de la nevroglie chez les Ichthyobdelles 327 Perroucito, A., Die Regeneration der Nerven 97 l*esker, D. J., Zur Lehre von der Histogenese der Neurofibrillen . 232 Xn Inhaltsverzeichnis. Seite Pesta, O,, Die Metamorphose von Mytilicola intestinalis Steuer . . 83 Petermaun, W., Zur Kenntnis der frühen Entwicklungsvorgänge am Ei des Igels [Erinaceus europaeus L.| vor Ausbildung der Medullarrinne lt>7 Petersen, O. V. C. E., Beiträge zur mikroskopischen Anatomie der Vesicula seminalis des Menschen und einiger Säugetiere . . 97 Philiptschenko, J., Beiträge zur Kenntnis der Apterygoten. 1. über die exkretorischen und phagocytären Organe von Ctenolepisma lineata F 84 Pöschl, V., Einführung in die Kolloidchemie 324: Pollitzer, H, , Beiträge zur Morphologie und Biologie di-r ueutru- philen Leukocyten 89 Popott", M. , Eibildung bei Paludina vivipara und Chromidien l)ei Pa- ludina und Helix 204 — , — , Die Gametenbildung und die Konjugation von Carchesium polypinum L 205 Porodko, Th., Reicht die Durchsichtigkeit der durch Glaswolle tiltrierten Agarlösungen für die üblichen bakteriologischen Zwecke aus? 240 Pringsheim, E. jun. , Über die Herstellung von Gelbfiltern und ihre Verwendung zu Versuchen mit lichtreizbaren Organismen . . 474 Prym, O., Zur Blutentnahme aus dem Kaninchenohr 217 Eachmanott', A. W. , Die Neurofibrillen und die chromatophile Sub- stanz in den Nervenzellen 102 Raciborski, M., Einige Chemomorphosen des Aspergillus niger . . 257 Read, E. A. , Contribution to the knowledge of the olfactory appa- ratus in dog, cat and man 354 Recueil de l'Institut botanique (Universite de Bruxelles) public par L. EiiRERA 365 Reicheuow, E. , Die Rückbildungserscheinungen am Anurendarm während der Metamorphose und ihre Bedeutung für die Zell- forschung 485 Reichensi)erger, A., Zur Kenntnis des (xenus Ophiopsita Forh. . . 204 — , — , Die Drüsengebilde der Ophiuren 483 Reichert, K., Beobachtung der Geißeln von Bakterien im unge- färbten Zustande mit Hilfe des Spiegelkondensors 237 Rodenwaldt, Eine Vereinfachung der NissL sehen Färbung und ilire Anwendung bei Beri-Beri 332 Rohland, P. , Die Tone als semipermeable Wände und Mittel zur Klärung von Fabrik- und Abwässern 13(» Rosani, A., Einfache Art der Mikrobenfärbung 117 Rosenblatt, St., Beitrag zur Gram -Färbung 239 Rosenhauch, E., Über die Entwicklung der Schleimzelle 7G Rotarski, Th., f'bersehene Angaben betreffs flüssiger Kristalle . . 3(j9 Rothe, Über die Verwendung verschiedener Zuckernäiirböden zur Differentialdiagnose der Gonokokken 121 Rothfeld, J. , Über das Verhalten der elastischen Elemente in den kaverntisen Körpern der Sexualorgane 222 lnhaltsvcrzeichnif<. XIII Seite Uubaschkiii , W. . Über das erste Auftreten und die Migration der Keimzellen bei Vögelembryonen 2oti Hiizicka, Tl., Depressionszustände und Kegulationsvorgänge bei dem Bact. anthracis 360 Saling, Th. , Zur Kenntnis der Entwicklung der Keimdrüsen von Tenebrio molitor L 79 Salonioii, E. . Zur Unterscheidung der Streptokokken durch kohlen- hydrathaltige Nährböden 241 Schafifer, J. , Zur Histologie der Unterkieferspeicheldrüsen bei Insek- tivoren 227 Schepotieff, A., Die Echinoderiden 209 — , — , Über den feineren Bau der Gordiuslarven 210 Schmidt, E. , Über die Stützsubstanz der Leber im normalen und pathologischen Zustande 224 Schmidt, P., Über Jagendstadien der roten Blutkörperchen. . . . 491 Schmitt-Marcel, W., Über Pseudo-Hermaphroditismus bei Rana temp. 500 Schoorl, N., Beiträge zur mikrochemischen Analyse 72 Schreiber, L., u. Schneider, P., Eine Methode zur Darstellung von Pigmenten und ihrer farblosen Vorstufen mit besonderer Be- rücksichtigung des Augen- und Hautpigments 495 Schridde . H. , Die Entwicklungsgeschichte des menschlichen Speise- röhrenepitheles und ihre Bedeutung für die Metaplasielehre . 223 Schuberg, A., Untersuchungen über Zellverbindungen. II. Teil . . 77 — , — , Beiträge zur vergleichenden Anatomie und zur Entwicklungs- geschichte der Lederhaut der Amphibien 495 Schumann, P., Beiträge zur vergleichenden Histologie des Enddarmes und des Übersranices des Mitteldarmes in den Enddarm der ■■fi' Haussäufiretiere 348 '■in Seiffert, G. , Vorrichtung zur qualitativen und quantitativen Gas- bestimmung bei gasentwickelnden anaeroben Bakterien . . . 359 Selensky, W. , Untersuchungen über die sogenannten Urnen der Sipunculiden 481 Senft, E. , Über das Vorkommen von „Physcion" (Hesse) = „Pa- rietin" (Thomsox, Zopf) in den Flechten und über den mikrochemischen Nachweis desselben 255 Shikinani, J., Beiträge zur mikroskopischen Anatomie der Gallenblase 350 Siedentopf, H. , Über künstlichen Dichroismus von blauem Steinsalz 130 Sinefl", A., Ein vereinfachter Thermostat 76 Sivanow, N., Acanthobdella peledina Grube, 1851 327 Sonnenbrodt, Die Wachstumsperiode der Oocyte des Huhnes . . . 501 Srdinko, (). V., Beiträge zur Kenntnis der Nebenniere der Knochen- fische: Über die erste Anlage der Stannius sehen Körperchen der Lophobranchier 225 Stamer, A., Untersuchungen über die Fragmentation und Segmenta- tion des Herzmuskels 92 Standfuß, R., Vergleichend-histologische Studien an den Malpighi- schen Körperchen der Niere der Wirbeltiere 95 XIV Inhaltsverzeichnis. Seite Stauflfacher, H., Zur Kenntnis der Phylloxera vastatrix 84 Stein, R., Die Plattenkultur der Streptobazillen des Ulcus molie . . 242 Sterzinger, J. , Über das Leuchtvermögen von Aiuphiura squaiuata SARS 207 Stockhausen, F., Ökologie, „Anhäufungen" nach Beijerixck. Bei- träge zur natürlichen lieinzucht der Mikroorganismen . . . 114 Stoerk, O., u. Haberer, H. v., Beitrag zur Morphologie des Neben- nierenmarkes 497 Swellengrebel, N. H., Erwiderung auf die Arbeit des Herrn Dr. Höl- LiKG „Spirillum giganteum und Spirochaeta Balbianii" . . . IIG Sykes, M. G., Nuclear division in Funkia 254 Szily, A. V., Über das Entstehen eines fibrillären Ötützgewebes im Embryo und dessen Verhältnis zur Glaskörperfrage .... 351 Szyinonowicz, Ladisl. , u. Krause, Rud. , Lehrbuch der Histologie und der mikroskopischen Anatomie mit besonderer Berück- sichtigung des menschlichen Körpers einschließlich der mikro- skopischen Technik 320 Takahashi , K. , Some conditions which determine the length of the internodes found on the nerve fibers of the leopard frog. Rana pipiens 333 Takayasu, R., Über die Beziehungen zwischen anatomischen Glome- rulusveränderungen und Nierenfunktion bei experimentellen Nephritiden it4 Thonia, R. , Über die netzförmige Anordnung der quergestreiften Muskelfasern 329 Thulin, J., Studien über den Zusammenliang granulärer, interstitieller Zellen mit den i\Luskelfasern 49G Trautmann, A. , Beiträge zur vergleichenden Histologie des Dünn- darmes der Haussäugetiere 349 Triucas, L., Nuovo metodo di colorazione per le spore, per i granuli metacromatici ed in sostituzione al metodo di Gram .... 118 Tröster, C, Eine neue Mikroskopierlampe 75 Ude, J., Beiträge zur Anatomie und Histologie der Süßwassertricladen 211 Verzär, F., Über die Anordnung der glatten Muskelzellen im Amnion des Hühnchens 94 Vial, F., Über Verwendbarkeit chemisch reiner Malachitgrünpräparate als Nährbodenzusatz bei der Untersuchung von Typhusstühlen 244 Viefhaus, Th., Die Entwicklung der Ringelnatter [Tropidonotus natrix Boie] nach Ausbildung der Falterform bis zur Er- hebung des Proamnios 109 Vorländer, D., Über durchsichtig klare, kristallinische Flüssigkeiten 3G8 Walter, F. H., Zur Kenntnis der peripheren markhaltigen Nervenfasern 339 Wassilieff, A., Die Spermatogenese von Blatta germanica .... 207 Weidanz, O., Zur Technik der sterilen Filtration 240 Weidenreich, F., Beiträge zur Kenntnis der granulierten Leukocyten. 5. Fortsetzung der Studien über das Blut und die blutbilden- den und -zerstörenden Organe 489 Inluiltsverzeiclmis. XV Seite Weygaudt, C, Beiträge zur Kenntnis der Spermatogenese bei I'lagio- stoma GiRAKDi 209 Widmaiiu, E., Über den feineren Bau der Augen einiger Spinnen . 476 AVilson, G. J., The nerves and nerve-endings in the membrana tyinpani 228 AVirtz. R., Eine einfache Art der Sporenfiirbung 2;]i> Wislicenus, H. , Über die faserähnlicli gewachsene Tonerde i^Faser- tonerde) und ihre Oberflächenwirkung 257 AVisselingh, C. v., Über die Karyokinese bei Oedogonium. Sechster Beitrag zur Kenntnis der Karyokinese 124 — , — , i'ber den King und die Zellwand bei Oedogonium .... 12(> Wolfruni, M. , Beiträge zur Anatomie und Histologie der Aderhaut beim ^Menschen und bei höheren Wirbeltieren 218 Wossidlo, E., Experimentelle Untersuchungen über Veränderungen der Nis8L sehen Granula bei Lumbalanästhesie 332 Wunderer, H., Über Terminalkörperchen der Anamnien 229 A'amada, K., Ein Beitrag zu den Untersuchungsmethoden über Erj- throzytenformen 485 Yamamoto, J., Eine Silberimprägnationsmethode zur Unterscheidung von Lepra- und Tuberkelbazillen 50(j — , — , Über das Verhalten des ^lilzlirandbazillus bei der Silber- imprägnation 507 Yamanouchi, Sh., Sporogenesis in Nephrodium 250 — , — , Spermatogenesis, Oogenesis and Fertilization in Nephrodium . 251 Young, R. Th., The Histogenesis of Cysticercus pisiformis .... 478 Zettnow, E., Über Swellengrebels Chromatinbänder in Spirillum volutans 239 Verzeichnis der Mitarbeiter an Band XXV. Prof. Dr. H. Ambroiin in Jena, Dr. C. Artom in Cagliari. Dr. Fr. Bödecker in Berlin. Prof. Dr. Braus in Heidelberg. Dr. A. Breckner in Kiel. Prof. L. E. Cavazza in Bologna. Dr. W. Dantschakoff in Moskau. Prof. Dr. P. Eisler in tLille a. S. Dr. Engel in Düsseldorf. XVI Verzeichnis der Mitarbeiter an Band XX\'. Prof. Dr. A. Fiscbel in Prag. Dr. L. Fleischmann in Wien. Ch. Funck in Nancy. Dr. P. Gälesescu in Bukarest. Herzog Gandolfi in Bergen. Prof. Dr. W. Gebhardt in Halle a. S. Dr. E. Giltay in Wageningen (Holland,!. Dr. H. Hahn in München. Prof. Dr. H. J. Hamburger in Groningen. Prof. Fr. C. C. Hansen in Kopenhagen. Prof. Dr. M. Heidenhain in Tübingen. 0. Heimstädt in Wien. Prof. Dr. H. L. Heusuer in Gießen. Dr. M. Hofraaun in Meran (Tirol). Prof. Dr. H. Hoyer in Krakau. Dr. W. V. Iguatowsky in Gießen. Dr. L. W. Ssobolew in St. Petersburg. Prof. Dr. J. Koenigsberger in Freiburg i. Br. Prof. Dr. R. Krause in Berlin. Prof. Dr. E. Küster in Halle a. S. Prof. J. Lendvai in M;iramarossziget. Dr. 0. Levy in Leipzig. Dr. B. Lunghetti in Bologna. Dr. L. Materna in Graz. Dr. 0. Meyer in Halle a. S. Dr. L. Neumayer in München. Prof. Dr. B. Rawitz in Berlin. Dr. W. Reideraeister in Halle a. S. Dr. P. Röthig in Charlottenburg. G. Sainmont in Lüttich. Dr. W. Schefler in Berlin. Prof. Dr. P. Schielferdecker in Bonn. Dr. E. Schoebel in Neapel. Dr. H. Siedentopf in Jena. Prof. Dr. E. Sommerfeldt in Tübingen. II. V. Winiwarter in Lüttich. Dr. M. Wolff in Bromberg. Dr. H. Wunderer in Lienz (Tirol). Dr. A. Zimmermann in Budapest. Band 1\\. Heft 1. [Aus dem Physiologischen Laboratorium der Universität Groningen.] Injektionen mit Eiweiß- und Seriimtusclie zu milvroskopischen Zwecken. Von Prof. Dr. H. J. Hamburger nacli Versuchen in Gemeinschaft mit den Herren Stiid. med. J. F. de Beer und G. A. Kalverkami). „Die großen Vorteile kaltflüssiger mikroskopischer Injektions- massen gegenüber den warmflüssigen sind so einleuchtend, daß heute sämtliche Lehrbücher der Histologie, neben den alten Verfahren mit Erwärmung, diese neueren Massen aufgenommen haben. Viele Prä- parate, namentlich histologische Strukturen, vertragen das Einlegen in Wasser und die Erwärmung nicht, und wo man gezwungen ist, feine Kanülen zu verwenden , sind die warmflüssigen Massen über- haupt äußerst unbequem, da sie in der Kanüle sehr leicht erstarren," Mit diesen Worten fängt Otto Grosser^ eine Arbeit an, in der er als kalte Lijektionsmasse eine Suspension von Tusche in Hühnereiweißlösung empfiehlt, statt der von K. Taguchi" vor- geschlagenen Aufschwemmung von Tusche in Wasser, welche Auf- schwemmung nach Grosser den Nachteil hat, daß sie aus isolierten Körnchen besteht, die wenn auch nicht aus den kleineren, so doch ^) Grosser, 0., Mikroskopische Injektionen mit Eiweißtusche (Diese Zeitschr. Bd. XVII, 1900, p. 178). ^) Taguchi, K., Über kalte Injektionen mit japanischer Tusche (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. XXXI, 1888, p. 565). Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXV, 1, 1 2 Hamburger: Injektionen mit Eiweiß- und Serumtusche. XXV, 1. aus den etwas größeren Gefäßen leicht herausfallen , und beim Schneiden über die Schnittfläche verstreut werden können. Es lag daher nahe , nach einem Bindemittel für die Körnchen zu suchen, und als solches ist schon gewöhnliches flüssiges Hühnereiweiß ganz besonders geeignet, da es sich aucli gut fixieren läßt. Angeregt durch die von Grosser erzielten Resultate, wünschten auch wir dies Verfahren anzuwenden und rieben , wie das auch bereits Taguchi für seine wässerige Masse vorgeschlagen hatte , ein Stück Stangentusche mit dem filtrierten Hühnereiweiß auf einer matten Glasplatte an. Es möchte jedoch nicht gelingen eine geeignete leicht- flüssige Masse zu bekommen ; selbst in einer gut verschlossenen Flasche trat innerhalb 24 Stunden vollständige Verfestigung ein und be- reits während des Reibens bildete sich eine Membran an der Ober- fläclie. Wahrscheinlich lag das an der Tusche, von der bekanntlich viele Qualitäten im Handel vorkommen; aber es gelang uns nicht, Besseres zu bekommen. Es wurde nun versucht diese Schwierigkeiten zu umgehen , in- dem wir die Eiweißlösung mit käuflicher Tuschelösung ver- setzten. Hierzu wurde die GtJNTHER-WAGNERSche flüssige Perltusche gebraucht, und zwar im Verhältnis zur Eiweißlösung von 1:1. Es bildete sieb eine dünnflüssige Masse , . welche unter dem Mikroskop lediglich aus sehr feinen in Broavn scher Molekularbewegung verkehrenden Partikelchen zu bestehen sich erwies. Die Fixierung erfolgte mittels Sublimat -Formol. Nach Durch- färbung mit Alauncochenille und Einbettung in Paraffin wurden sehr schöne Präparate erhalten, in denen die Blutgefäße mit einer voll- kommen homogenen schwarzen Masse gefüllt waren. Wurde also nach dieser Methode der obengenannten Beschwerde aus dem Wege gegangen, so gewährte sie auch noch den Vorteil, daß sie schneller zum Ziel führte, denn man braucht keine Tusche abzureiben. Noch in einer anderen Richtung haben wir die Methode er- leichtert, indem wir nämlich das Hühnereiweiß durch eine natürliche Flüssigkeit, das Blutserum, ersetzten. Vermischung von 3 Vol. Serum mit 2 Vol. flüssiger Perltusche ergab vorzügliche Resultate. Das Blutserum braucht nicht von derselben Tierspecies zu stammen. Für die Injektionen von Meerschweinchen und von Kanin- chen benutzten wir mit Erfolg Pferdeserum und Rinderserum. Es sind diese Sera leicht zu gewinnen, indem man die aus dem Kuchen gepreßte Flüssigkeit abhebt. XXV, 1. Artora: ^'e^f;Uu•en, beschalte Eier von Ascarls mcg. zu fixieren. 3 Die Fixation mittels Subliniat-Formol erfolgte in derselben Weise wie oben. Sowohl mit Durchtarbung wie mit Einzelfärbnng wurden schöne Präparate erhalten. Vorläufig- wurden Nieren und Leber mikroskopisch untersucht. Die Injektionsmasse drang auch in Haut, Muskeln und Gehirn ein. Versuche, um mit Suspensionen von Karminkörnclien in Serum kalte Injektionen zu erzielen, scheiterten, da die Karminpartikelchen zusammenklebten. Vielleicht lassen sich aber Gemische von gelöstem Karrain oder anders gefärbten Flüssigkeiten mit Serum bereiten, die gute Resultate geben. [Eingegangen am 17. März 1908.] [Aus dem Zoologischen Institut Würzburg.] Über ein Verfahren, die beschälten Eier von Ascaris meg. mit jedem gewünschten Konservierungsmittel zu fixieren. Von Dr. Cesare Artom, Assistent am Zoologischen Institut in CagUari. Während meines kurzen Aufenthalts in dem Laboratorium des Zoologischen Instituts zu Würzburg hatte ich Gelegenheit, die ersten Entwicklungsstadien des Eies von Ascaris meg. mit einer neuen Methode zu untersuchen, welche mir von Prof. Boveri vorgeschlagen wurde. Für die wertvollen Ratschläge , die ich von ihm erhalten habe, bin ich sehr dankbar. Bekanntlich besitzen die abgelegten Ascaris -Eier eine äußerst resistente Schale (Perivitelliuhülle). Sie sind aus diesem Grunde gegen äußere f]inflüsse sehr wenig empfindlich. Es ist schon von früheren Untersuchern angegeben worden, daß sich die Eier in den gebräuchlichsten Konservierungsmitteln (Sublimat, Pikrinsäure, Osmiumsäure usw.) längere oder kürzere Zeit weiter entwickeln. 1* 4 Artom: Verfahren, beschalte Eier von Ascaris meg. zu fixieren. XXV, 1. Ich selbst habe Eier von Asearis meg. in FLEMMixcscher Flüssig- keit bis zu beweglichen Würmchen gezüchtet. Die bis jetzt be- kannten Mittel, die Eier rasch nnd also gerade in dem gewünschten Stadium zu fixieren , sind die Mischungen von Alkohol und Eisessig, nach dem Vorschlag von Erlanger (5) gewöhnlich in dem Verhältnis von 4 Teilen Alkohol (96 Prozent) und einem Teil Eisessig verwendet. Wenn nun auch dieses Verfahren für gewisse Zwecke, so vor allem für die Untersuchung der Embryonalentwick- lung sehr befriedigende Resultate liefert , so ist es doch für das Studium der feinsten cytologischen Verhältnisse nicht vollkommen ausreichend. Eine dem lebenden Zustand ohne Zweifel viel näher kommende Fixierung gibt das von Boveri ([4] p. 6.3) benützte Gemisch von 20 Teilen Alkohol (70 Prozent) und einem Teil Eisessig. Allein hier macht sich wieder der Nachteil bemerkbar , daß dieses Gemisch die Eischalen nicht sofort durchdringt , so daß einerseits die Eier sich häufig über das gewünschte Stadium hinaus entwickeln, anderseits die Möglichkeit nicht völlig ausgeschlossen erscheint, daß zunächst das Reagens in so verdünntem Zustand mit dem Ei in Berührung kommt, daß vor der Abtötung pathologische Verände- rungen Platz greifen. So hat erst kürzlich R. Fick ([6] p. 94) den Verdacht ausgesprochen, daß die zuerst von Boveri (1, 2) eingehend beschriebenen fingerförmigen Fortsätze der Blastomerenkerne patlio- logische Bildungen sein könnten. Wenn sich auch diese Vermutung- schön durch eingehenderes Studium der bisher über diese Frage veröffentlichten Arbeiten als sicher irrtümlich erkennen läßt , so ist doch hinsichtlich feinerer Verhältnisse die Mangelhaftigkeit und Ein- seitigkeit der bis jetzt anwendbaren Fixierungsmittel nicht zu ver- kennen. Über manche Fragen , so nach der Struktur der Zentren, nacli dem Verhältnis des Archiplasmas zu dem übrigen Protoplasma, nach der Struktur der Chromosomen, nach der Entstehung und dem Bau des Ruhekerns usw. , bestehen zwischen den verschiedenen Au- toren nicht unerhebliche Widersprüche, w^elche eine Kontrolle durch die sonst bewährten Methoden sehr wäinschenswert erscheinen lassen. Erst wenn diese Methoden sich hier verwerten lassen , kann das Ei von Asearis mit vollem Recht als eines der günstigsten Objekte für die Zellenforschung bezeichnet werden. Aber noch ein anderer Punkt verdient Beachtung. Nachdem man sich lange Zeit damit begnügen konnte, für den Kern eine spezifische Färbung zu besitzen, macht sich immer mehr das Bedürfnis geltend, auch andere Zellbestandteile durch besondere Färbung sichtbar zu machen, und XXV, 1. Artom: Voifaliron, bescliiilte Eior von Ascaris lueg'. zu fixieren. 5 diese komplizierteren Fiirbungsmetlioden erfordern gewölinlieli eine ganz bestimmte Vorbehandlung', welche für das Ascaris-Ei nicht anwendbar ist. Schon die sehr einfache Frage, von welcher Natur die im Ascaris-Ei enthaltenen Dotterkörner sind, konnte bisher nicht geprüft werden. Ist es nun die wunderbare Unempfindlichkeit des im Freien sich entwickelnden Ascaris-Eies, durch welche die bisher mangel- hafte Konservierungsfälligkeit bedingt war, so bildet gerade diese Unemplindlichkeit auch die Grundlage für die Möglichkeit , die be- stehenden Schwierigkeiten zu überwinden. Die P^igenschaft, die bei dem eingeschlagenen Verfahren benützt wird , ist die große Re- sistenz gegen Kälte. Ich habe Ascaris-Eier auf — 6^ C. abgekühlt ; sobald sie wieder in Zimmertemperatur zurückversetzt wurden, entwickelten sie sich ohne jede Störung weiter. Damit ist die Möglichkeit gegeben, große Massen von lebenden Eiern mit dem Gefriermikrotom zu schneiden , wobei an vielen Eiern ohne jede Deformation des Inhalts die Eischale durchgeschnitten oder an- geschnitten wird und nun jedes Härtungsmittel sofort mit der leben- den Eizelle in Berührung kommt. Die Art des Vorgehens war dabei die folgende : Mehrere Uteri wurden so lange in Kochsalzlösung belassen, bis die meisten Eier das gewünschte Stadium zeigten. Nun wurden sie in möglichst kompakten Haufen auf den Gefriertisch des Jung sehen Kohlen- säure-Gefriermikrotoms (Modell C) gebracht. Die Höhe eines solchen Haufens wurde auf etwa 0'5 cm bemessen. Das Zuströmen der CO2 wurde so reguliert , daß möglichst geringe Kälte zur An- wendung kam. Welchen Temperaturen die Eier hierbei ausgesetzt waren, habe ich allerdings nicht festgestellt. Doch habe ich mehr- mals die untersten auf den Objekttisch angefrorenen Eier nach dem Zurückbringen in normale Temperatur sich ungestört weiterent- wickeln sehen. Ist die Eierraasse mit der umgebenden Kochsalzlösung zu einem Block erstarrt , so ist es sehr leicht , dünne Schnitte zu machen ; ja es lassen sich weit dünnere Schnitte erzielen , als sie für unsere Zwecke nötig und sogar wünschenswert sind. Es stellte sich näm- lich heraus, daß wirklich zerschnittene Eier, auch wenn sie noch in gefrorenem Zustand in die Fixierungsliüssigkeit gebracht werden, in ihren feineren Strukturen sehr erheblich geschädigt sind. In Betracht kommen nur solche Eier, bei denen die Schale ein klein wenig angeschnitten ist. Und zwar ist es , wie ich glaube. 6 Artom: Verfahren, beschalte Eier von Ascaris meg. zu fixieren. XXV, 1. nicht einmal nötig , daß ein wirkliches Loch entsteht , sondern es scheint zu genügen , wenn nur die äußersten Schichten der Schale, welche oft'enbar die allein widerstandsfähigen sind , angeschnitten werden. unter diesen Umständen war es viel vorteilhafter, die Schnitte nicht zu dünn herzustellen. Eine Dicke von 30 /< bewährte sich am besten. Die auf dem vorher stark abgekühlten Messer liegenden Schnitte wurden gewöhnlich in noch gefrorenem Zustand in die Fixierungsflüssigkeit übertragen. — Ich benutzte Sublimat-Essig- säure, Pikriu-P^ssigsäure, Formol-Alkohol und vor allem das starke Gemisch von Flemming. — Betrachtet man die in das Konservierungsmittel übertragenen Schnitte mit dem Mikroskop, so erkennt man , daß zahlreiche Eier schon nach ganz kurzer Zeit von demselben ergriffen werden. Besonders in Flemming scher Flüssig- keit, tritt dies infolge der Schwärzung der Dotterköruer sehr deut- lich hervor. Bisher habe ich mich fast ausschließlich mit der Aveiteren Ver- arbeitung dieses Chrom-Osmium-Essigsäure-Materials be- scliäftigt. Man kann die Eier sowohl in t o t o untersuchen, als auch in Paraffin einbetten und in Schnitte zerlegen. Die ganzen Eier müssen wegen der überall zerstreuten, intensiv gescliwärzten Dotter- körner vor dem Studium gebleicht werden. Dies geschah durch mehrtägiges Verweilen in Terpentinöl, welclies die Körner voll- ständig auflöst. Es kann sonach keinem Zweifel unterliegen, daß diese Gebilde aus Fett bestehen (vgl. Flemming [7]). Zur Färbung solcher in Flemming scher Flüssigkeit konservierter Totalpräparate wendete ich Boraxkarmin und sehr verdünntes DELAFiELoscbes Hämatoxylin mit vorzüglichem Erfolg an. Zur Herstellung der Paraffinschnitte benutzte ich die von Bo- VERi (3) vorgeschlagene Methode, große Mengen von Eiern, nachdem sie in TOprozentigen Alkohol übergeführt waren, in eine dünne Membran (abgCAVorfene Hautfetzen von Cryptobr anchus) ein- zuwickeln. Über die Resultate der erzielten Fixierungen soll au anderer Stelle berichtet werden. Hier sei nur ein Punkt noch erwähnt. Es liegt der Gedanke nahe , daß sich das beschriebene Verfahren auch für eutwicklungsphysiologische Zwecke verwenden ließe. Schneidet man gefrorene Eier, die sich auf dem Zweizellen-Stadium befinden, so ereignet es sich nicht selten , daß eine Blastomere von ihrer Partnerin abgetrennt wird. Ließe sich ein Medium finden , das die XXV, 1. Artom: Verfahren, beschalte Eier von Ascaris mcg. zu fixieren. 7 in der Eischale enthaltene Flüssigkeit zu vertreten vermag, so wäre man imstande , die Entwicklung solcher isolierter Blastomeren zu verfolgen, was bekanntlich für das Ascaris -Ei von großem Interesse wäre. — Zitierte Literatur. 1) BovERi, Th., über Ditferenzierung- der Zellkerne während der Furchung des Eies von Ascaris megalocephala (Anat. Anz. Bd. XI, 1887). 2) Derselbe, Zellen -Studien, Heft 2, 1888. 3) Derselbe, Über das Verhalten der Centrosomen bei der Befruchtung des Seeigel-Eies (Verh. d. Phys.-med. Ges. zu Würzburg, N. F., Bd. XXIX, 1895). 4) Derselbe, Zellen -Studien, Heft 4, 1900. 5) EKLANGE5, R. v., über die Befruchtung und erste Teilung des Ascaris- Eies (Arch. f. raikrosk. Anat. Bd. XLIX, 1897). G) FiCK, R., Vererbungsfragen, Reduktions- und Chromosomenhypothesen, Bastard-Regeln (Ergebn. d. Anatomie u. Entwicklungsgesch. Bd. XVI, 190Gj. 7) Flemming, W., Weiteres über die Entfärbung osmierten Fettes in Ter- pentin und anderen Substanzen (Zeitschr. f. wiss. Mikrosk. u. f. mikrosk. Technik Bd. VI, 1889). [Eingegangen am 20. März 1908.] 8 Zimmermann: Über Anwendung d. Methode v. Bielscllo\vskJ^ XXV, 1. [Aus dem Histologischen Institut der Universität in Wien. Vorstand: Hofrat Prof. v. Ebner.] Über die Anwendung der Methode von Bielscliowsky zur Darstellung der Bindegewebstibrillen. Von Dr. A. Ziiuiiiermauu in Budapest. Die Verwertbarkeit der Bielschowsky sehen Methode zum Nach- weis von kollagenen Fibrillen durch Imprägnation haben bereits mehrere hervorgehoben. Jene Eigenschaft der Methode, welche Bielschowsky (1) seinerzeit als einen Fehler empfunden hat, daß sich nämlich mit ihrer Hilfe außer den Neurofibrillen , um deren Darstellung es sich ihrem Entdecker handelte, vielfach auch Binde- gewebsfasern färben , schien zur Darstellung des bindegewebigen Gerüstes einzelner Organe geeignet zu sein. Bei der Methode, welche Bielschowsky ursprünglich verwendete , färben sich nämlich außer den Neurofibrillen die leimgebenden und auch die elastischen Fasern ; um nervöse und bindegewebige Gebilde voneinander besser unter- scheiden zu können , modifizierte Bielschowsky (2) bald seine Me- thode. Später hat Max Wulff (7) mit ihrer Hilfe fibrilläre Struk- turen in der Leber des Frosches imprägniert. Maresch (4) gelang es durch dieselbe Methode das Biudegewebegerüst der menschlichen Leber sehr vollkommen darzustellen. Studnicka (5) hat ebenfalls vollständige Imprägnationen der bindegewebigen Grundsubstanz der Haut, der Speicheldrüsen , Thyreoidea , Thymus , Nebennieren , der Sehnerven usw. erhalten. Levi (3) gelang es mit der Bielschowsky- schen Methode die fibrilläre Grundsubstanz in hyalinen Knorpeln nachweisen. Die von Bielschow^sky zur Darstellung der Neurofibrillen an- gegebene Silbermethode ist nach Wolff (6) die folgende : Die höch- stens 2 mm dicken Stücke w-erden in 6- bis lOprozentigem neutralen Formol fixiert, dann in destilliertem Wasser gut ausgewasclien und XXV, 1. Zimmermann: Ühor Anwendung d. Methode v. Bielschowsky. 9 kommen zur Vorversilberunj? auf wenigstens 2 Tage in eine 2pro- zentigc llöilensteinlösuug ; dann werden sie einige Minuten lang aus- gewaschen und auf eine lialbe bis mehrere Stunden in eine frische aramoniakalische Silberlösung gelegt, welche man erhält, indem man zu einer lOprozentigen Lösung von Höllenstein unter Umschütteln tropfen- weise 40prozentige Natronlauge setzt, bis keine Fällung mehr statt- findet und dann auf gleiche Weise das Präzipitat in möglichst wenig Ammoniak nahezu löst, filtriert und mit destilliertem Wasser auf das 4- bis öfache verdünnt (die Lösung hält sich nur einige Stunden lang). Nach Auswaschen wird das Präparat zur Reduktion in 4- bis öprozentiges Formol, je nacli der Dicke, auf eine bis 6 Stunden ge- legt und nachher durch Xylol in Paraffin von 40 bis 50^ überführt. Die mit Eiweiß aufgeklebten Schnitte kommen zur Fixierung des Silberbildes auf eine bis 2 Stunden in eine etwa ein- bis O'öpromil- lige, am besten durch Lithiumkarbonat zu neutralisierende wässerige Lösung von Goldchlorid und nach Abspülen auf 5 bis 15 Minuten in ein öprozentiges Fixiernatronbad, dann werden sie 6 bis 12 Stunden lang in Leitungswasser ausgewaschen und in Balsam geschafft. Man kann auch die Stücke nach dem Fixieren in Formol und dem Aus- waschen mit dem Gefriermikrotom schneiden oder in Paraffin bringen, dann ist die Vorversilberung der Gefrierschnitte oder der mit Eiweiß aufgeklebten Paraffinschnitte die nämliche, dauert aber im letzteren Falle 7 Tage ; ebenso sind die weiteren Prozeduren gleich. Maresch (4) hat die von Bielschowsky auf diese Weise an- gegebene Methode für andere Organe zum Zweck der Darstellung der feinsten Bindegewebsfasern etwas modifiziert. So empfiehlt er zur Vorversilberung der Gefrierschnitte oder Paraffinsclmitte in der 2prozentigen Silbernitratlösung nur 12 bis 24 Stunden (Bielschowsky 7 Tage), auch in der ammoniakalischen Silberlösung läßt er sie kürzere Zeit : 2 bis 30 Minuten, je nach der Dicke der Schnitte (Bielschowsky eine halbe bis mehrere Stunden) , endlich soll nach Maresch das Goldbad auch nur etwa 10 Minuten auf die imprägnierten Schnitte einwirken (bei Bielschowsky eine bis 2 Stunden). Aus den in Paraffin eingebetteten Schnitten soll die Befreiung vom Einbettuugsmittel erst am Ende nach der Vergoldung und nach der Herausnahme aus dem Fixiernatron erfolgen, bis dahin behandelt Maresch die Schnitte nicht am Objektträger , sondern ähnlich , wie man bei Celloidinschnitten verfährt. Studnicka (5) gibt an, daß zur Bielschowsky sehen Methode die Fixierung der Objekte eine beliebige sein kann ; er hat voll- 10 Zimmermann: Über Anwendung' d. Methode v. Bielschowsky. XX Y, 1. kommen gute Resultate an mit Alkohol, mit Formol, mit 4prozentiger Salpetersäure, mit der Müller sehen, Flemming sehen, PEREXYischen, P. MAYERSchen, Kleinenberg sehen Flüssigkeit usw. erzielt. Etwas weniger gute Resultate gibt Sublimat. Das Einbetten kann nach Studnicka sowohl im Paraffin, als auch in Celloidin geschehen. Zur Vorversilberung nimmt er eine Sprozentige Lösung von Silber- nitrat und behält die Schnitte in derselben in der Regel bis 4 Tage. Aus der ammoniakalischen Lösung überführt Studnicka die Schnitte nach kurzem Abspülen in Wasser in eine lOprozentige Formollösung und nach 5 Minuten , nachdem sie wieder kurz ausgewaschen wur- den , in eine ^/^prozentige Goldchloridlösung. Das darauffolgende öprozeutige Fixiernatronbad soll nach Studnicka auf einige Sekunden einwirken. Eine weitere Modifikation der Bielschowsky sehen Methode gibt Levi (3) an. Zur Fixierung ist nach Levi das Formol am wenig- sten geeignet, denn es soll die Objekte zur Quellung bringen. Dem- gegenüber geben die Flemming sehen und Zenker sehen Flüssigkeiten ausgezeichnete Resultate. Zur Paraffineinbettung empfiehlt Levi das HEiDENHAiNsehe Verfahren mit Schwefelkohlenstoff. Kach dem Ver- silbern läßt er zur Reduktion die 5prozentige Formollösung nur 5 bis 10 Minuten einwirken, ebenso nach dem Goldbad das Fixiernatron gleichfalls durch 10 bis 15 Minuten. Aus dem Angeführten ist es ersiclitlich, daß die zur Imprägna- tion der Bindegewebsfasern empfohlenen Modifikationen der Biel- schowsky' sehen Methode teils die Konzentration der verwendeten Mittel, teils die Dauer der Anwendung dieser Stoffe betreffen. Zum Gelingen der Imprägnation ist aber beides von größter Wichtigkeit. Auf Anregung von Prof. Schafper habe ich an mehreren Ob- jekten Versuche angestellt zur Darstellung der Bindegewebsfibrillen mit der Bielschowsky sehen Methode. Anfangs hielt ich mich strenge an die von Maresch angegebenen Vorschriften, bekam aber sehr blasse, undeutliche Bilder. Später ließ ich zum Vorversilbern die 2prozentige Höllensteinlösung etwas länger, mindestens 48 Stunden, einwirken , ebenso verlängerte ich etwas die Zeit der eigentlichen Versilberung, sowie die des Goldbades und des Fixiernatronbades und bekam mit diesen kleinen Abänderungen sehr zufriedenstellende Resultate. Zur Imprägnation gelangten durchweg in Formol fixierte Objekte, welche längere Zeit in Alkohol gelegen sind. Levis Behauptung, daß in Forraol fixiertes Material nicht geeignet wäre zur Bielschowsky- XXV, 1. Zimiucrmann: ('her Anwendung d. Methode v. Rielscliowsky. 1 1 scheu Methode , trift't nicht zu , denn man bekommt auch hier sehr schöne Bilder mit dieser Methode, Auch bringt neutrale Formalin- lösuug- leimgebende Fasern nicht zur Quellung. Nachdem durch Auswaschen die Fixierungsflüssigkeit entfernt worden war , wurde das Objekt in Alkohol gehärtet und dann in Paraffin eingebettet. Aus den 5 f.i dünnen Paraffinschnitten, welche am Objektträger aufgetragen wurden, entfernte ich das Einbettungs- mittel, im Gegensatz zu Maresch, noch vor der weiteren Behand- lung mit Xylol. Die vom Paraffin befreiten 5 /t dünnen Schnitte kommen auf 48 Stunden in eine 2prozentige Höllensteinlösuug zur Vorversilberung und von hier nach Abspülen mit Wasser in die nach Bielschowskys Angaben immer frisch bereitete animoniakalische Silberlösung. Bei der Bereitung dieser Lösung ist die größte Vorsicht notwendig, man soll es ja nicht versäumen nach der Zugabe eines jeden Tropfen Ammoniaks das Gefäß zu schütteln, denn Überfluß von Ammoniak richtet die ganze Imprägnation zugrunde 5 deswegen ist es auch zweckmäßig, um zu vermeiden, daß freies Ammoniak zurückbleibe, eine kleine Menge des von der 40prozentigen Natronlauge gefällten Silbersalzes ungelöst zu lassen. Nach dem Filtrieren wird diese Solution noch mit destilliertem Wasser vierfach diluiert. In der ammouiakalischen Silberlösung bleiben die Schnitte eine halbe Stunde. Während dieser Zeit nehmen die bisher weißen oder gelblichen Schnitte eine gelblich braune Farbe au. Sie werden nun in destilliertem Wasser wieder flüchtig abgespült und kommen zur Reduktion in eine öprozentige Formollösuug auf eine halbe Stunde. Die Schnitte werden hier bald dunkelbraun und man kann sich schon jetzt überzeugen, wie die Imprägnation ausgefallen ist. Gar oft bemerkt man, daß sich die Kerne schwärzen , während die Imprägnation der Fibrillen mißlungen ist, aber dafür sind jene und das Zellplasma so scharf, wie bei Färbung mit Hämatoxylin. Aus der Formollösung kommen die Schnitte, nachdem sie mit Brunnenwasser kurz ausgewaschen wurden, zur Fixierung des Silber- bildes auf eine Stunde in eine 1:1000 Goldchloridlösung, in der sich ihre gelblich braune Farbe in eine graue umwandelt. Nach Abspülen mit Brunnenwasser gibt man die Schnitte in eine öprozen- tige Lösung von Fixiernatrou (Natriumhyposulfat), um das etwa nicht reduzierte Silber aus den Schnitten zu entfernen. Aus dem Fixier- natronbad trägt man die Objekte zum gründlichen Auswaschen auf mehrere Stunden (6 bis 12 Stunden) in Brunnenwasser, welches 12 Zimmermann: Über Anwemlun«,^ d. Methode v. Bielsehowsk}\ XXV, 1. mehrmals gewechselt werden kann. Dann folgt Entwässern mit Alkohol, Aufhellen in Xylol und Einschließen in Kanadabalsam. An gelungenen Präparaten erscheinen die kollagenen Fibrillen intensiv schwarz, die Zellen und Kerne violett, während bei miß- lungener Imprägnation die Kerne sich schwärzen und auch das Zell- plasma scharf hervortritt. Im ersteren Falle ist die Imprägnation der Fibrillen vollkommen und meistens auch gleichmäßig. Ich stellte meine Versuche bei der Thymus des Kalbes und des Maulwurfes, dann bei Speicheldrüsen und Lymphfollikeln an. Besonders scharf tritt das Retikulum in den lymphadenoiden Organen hervor, aber auch sehr vollkommen und instruktiv zeigt diese Methode die Binde- gewebsfasern in der Thymus und der Speicheldrüse. Stellenweise macht sie sogar die Fettzellenmembranen sichtbar. Außer den Binde- gewebsfibrillen sind auch die übrigen Gewebsbestandteile in hinläng- licher Deutlichkeit zu unterscheiden, so daß es in der Regel nicht notwendig erscheint, die Imprägnation mit einer anderen Färbung zu kombinieren , doch kann man immerhin , wenn z. B. die Kerne nicht durchweg gleichmäßig zur Anschauung kommen, die gründlich ausgewaschenen Schnitte, wie es Maresch empfiehlt, noch nachträg- lich mit Kernfarbstoffen nachbehandeln, aber, wie bereits darauf hingewiesen wurde, scheint in den meisten Fällen eine Nachfärbung überflüssig zu sein. Aus den Versuchen geht hervor, daß die BiELscHOwsKvsche Methode zur Darstellung der Bindegewebsfibrillen sehr gut brauchbar ist, man kann sie an verschiedenen Organen verwenden, bei welchen man durch sie über die feinste Verteilung des Bindegewebes orien- tiert wird; aus diesen Gründen verdient die BiELscHowsKYSche Methode bei derartigen histologischen Untersuchungen eine besondere Beachtung. Die Methode ist verhältnismäßig nicht schwer aus- zuführen, man kann sich bald in sie einarbeiten und bekommt bei Befolgung der schon von Wulff hervorgehobenen peinlichsten Rein- lichkeit höchst zufriedenstellende Resultate. Literatur. 1) BiELSCHOWSKY , Die Silberimprägnation der Neurotibrillen (Journ. f. Psycho!, u. Neurologie Bd. III, 1904). 2) BiELSCHOWSKY, Die Darstellung der Achsenzylinder peripherisclier Nerven- fasern usw. (Journ, f. Psychol. u. Neurologie Bd. IV, 1905). 3) Levi, Della colorazione elettiva dal connetivo col raetodo Bielschowsky (Mon. Zool. Ital. t. XVIII, 1907). XXV, 1. C.-ivazza: Contiibuto allo studio dei Tannini. 13 4) Maresch, Über Gitterfjisern der Leber und die Verwendbarkeit der Methode Biklschowskys zur Darstellung feinster Bindegewebsfibrillen (Zentralbl. f. allgem. Pathol. u. pathol. Anat. Bd. XVI, 1905). 5) Studxicka, Über die Anwendung der Methode von Bielschowsky zur Imprägnation von Bindegewebsfibrillen, besonders im Knochen, Dentin und Hyalinknorpel (Zeitschr. f. wiss. Mikrosk. Bd. XXIII, 1907). (3) WoLFF, Neue Beiträge zur Kenntnis des Neurons (Biolog. Zentralbl. Bd. XXV, 1905). 7) WoLFF, Über die fibrillären Strukturen in der Leber des Frosches (Anat. Anz. Bd. XXVI, 1905). Wien, am 31. März 1908. [Eingegangen am 10. April 1908.] Ricerche sperimentali :' Contributo allo studio dei Taiiniiii. [Nota P r e 1 i m i n a r e.] Di Luigi Ermaiiiio Cavazza in Bologna. Una delle piu gravi lacuiie delia fitochimica sta uella deficenza di uozioni sulla costituzioue e siil significato fisiologico di un vasto gruppo di sostanze organicbe diffuse uelle piante : i tannini. Questi sono cosi universalmente abbondanti nei ritidomi caulinari e radicali degli alberi, da render manifesta la loro importauza uella genesi e uel funziouameuto dei felloderma^] non solo per ragioni ecologiche^ ma piii ancora nelle migrazioni diosmoticbe dei glucosi. E per questo che si trovauo tannini anche nelle foglie. ^) Cosicche, tutti gli alberi avendo felloderma, se tutti i fellodermi contengono tannino o derivato fenolico equivalente, ogni albero ha tannino. Del resto e facile osservarlo per es. in querce, castani, olmi, acacie e affini, ontani, tamarischi, pioppi gelsi, melograni, cotogni, mandorli, peri e affini, prugni e affini, peschi; abeti e altre conifere; senza contare molti arbusti, filicinee, muschi, alghe, funghi, ecc, V. F. Czapek, Biochemie der Pflanzen. 14 Cavazza: Contributo allo studio dei Tannini. XXV, 1, Di piü; i tannini si rinvengono spesso in cellule o gnippi di celhile nei peridermi corticaii delle radici, nelle celhile delimitanti i vasi legnosi, ed in quelle costituenti i fasci liberiani. Non basta ; i tannini sono frequentissirai nei frntti , cosi nel pericarpo, come nel mesocarpo e nell' endocarpo ; per es. castagne^ melograne, sorbe, mele, pere, uva, ecc. Infine Fenocianina della vite ed i pigmenti azziirri fantocianina) e rossi (eritrofilla) cosi comuni nei fiori delle plante erbacee sono dovuti proprio a derivati fenolici piü complessi , ma analoghi ai tannini. Perclie , dunque , delle sostanze cosi diffuse e che adempiono certo a importanti fuuzioni fisiologiche sono ancora cosi poco note? Ognuno sa che , affinehe Tanalisi organica dia risultati atten- dibili, si deve operare su niateriale chimicamente puro. Ora cio e agevole per le sostanze che cristallizzano e fondono o volatilizzano ; ma non lo e pei tannini che si ossidano, si scindono, danno com- posti fioccosi, colloidali, instabili. Ciö non toglie che alcuni tannati sopportino la filtrazione (nikeltannati ecc). Nonostante queste ditficolta, persuaso che il problema meritava la piü viva attenzione , diedi principio , due anni or sono , ad una Serie metodica di ricerche sperimentali , incominciando dalla com- parazione dei diversi reagenti coi differenti acidi tannici. Alla fine dei 1906 avevo gia riassunto i risultati delle prove piü significanti, rilevando, fra Taltro, la frequenza di riduzioni, e di composti complessi piü o meno idrolizzabili per es. il ferritannato potassico color porpora che, trattato con acido acetico, libera il tannato ferrico. Talvolta questi composti sembrano miscugli. Intanto le nozioni acquisite sull'argomento mi permisero di perfezionare il m e t o d o d i e s t r a z i o n e : Estrarre dei tannino puro non si puo con nessun solvente, se non si procede ad ulteriori purilicazioni. Occorreva perö estrarlo il meno impuro possibile. Per far ciö il miglior solvente rai parve quello che avesse efficacia minore sulle sostanze oleose, proteiche e aromatiche concomitauti. Dunque non alcool, non etere acquoso ; ma acqua ripetutamente distillata. 1) Nessuna delle analisi di castagne ricordate negli Atti dei VI Con- gresso di chlni. appl. vol. V, pag. 409, accenna a questo tannino. Eppure nella farina e nel frutto rimondato e inciso di lievi scaltitture la reazione non lascia dubbio alcuno. Poi bastava ricordare che Rochleder l'aveva notato fino dal 1867. XXV, 1. Cavazzji: Contributo allo studio dei Tannini. 15 L'estrazione vuol fatta in ambiente privo di ossigeno, sia in recipienti a cliiusiira ermetica, sia nel vuoto, sia in gas inerte (azoto, anidrica carbonica , ecc). Per evitare scissioni occorre compiere tutta l'operazione in poche ore, usando l'acqua a 80^ per raggiungere il dnplice efietto di atfrettare l'estrazione e di insolubilizzare le pro- teine coagnlandole ; oltre alla distruzione delle tannasi. Con acqua distillata, deossigenata, senza tracce di ammoniaca, e fuori del contatto dell'aria, sono riuscito ad ottenere diversi tan- nini , fra cui 1' aeido ampelotannico , in uno stato brillantemente micaceo. La prima tappa era raggiunta. Ho provato anclie ad estrarre il prodotto di ossidaxione coui- pleta^, con risultato diverso, ma costante ; e dall'acido ampelotan- nico ebbi un liquido intensamente rosso, che per evaporazione lascia della laraeile splendenti di color rubino. Mi restava a trovare nn metodo per purificare gli estratti tan- nici. Cercai dapprima di formare qualche composto ben definito, cristallino e stabile ; e siccome quelli noti non servivano all' uopo mi rivolsi alla ricerca di niiovi composti. In poche settimane ero riuscito ad ottenere addirittura una nuova serie di composti tannici con diversi metalli. Ne posso, con sicurezza, enumerare gia dieci: tallitanuati, cesitannati, rubiditannati, stronzitannati, va- naditannati, toritannati, cobaltannati, nikeltannati, uraniltannati, arsen- tannati , ' ed i sali doppi come selentannati potassici , cobaltannati potassici, ecc " II plurale di qnesti composti sta ad indicare che ciascuno va moltiplicato pel numero dei diversi acidi tannici ; e la cifra risul- tante dk un'idea della vastitä di questa miniera ancora intatta. Pur concedendo che tali composti non risolvano il problema ^) Questa ossidazione atmosferica e ben diversa dalla ossidazione in soluz. alcalina ; ciö e inerente alla coniugazione, o meno, dei doppi legami. -) Contrariamente a ciö che avviene per gli altri tannati, quelli nikel-cobaltici non si ottengono nel modo solito, ma agendo a caldo sul- l'idrato. Lavando prolungatamente il precipitato sino a reaz. tannica negativa, e trattandolo con ac. acetico, sul tannato scomposto ha luogo la reazione. Eguale verifica si ha pei comp, complessi come arsentannato e ferritannato potassico. Basta scomporli cautamente con ac. acetico per avere la dimustrazione immediata e convincente della loro coraposizione. Un'altra reazione facile, elegante si ha trattando l'acetato di Pb con tan- nino e potassa. Si ottiene, dopo aver agitato, una viva colorazione rosa carmino. 16 Caviizza: Contributo allo studio dei Tannini. XXV, 1. della purificazione ; essi , come vedremo, sono ancora piü utili col servire da reattivi differenziatori , permettendo di identificare molti tamiini nei tessuti stessi, senza aualisi , senza estrazione , cioe senza pericolo di iuquinamenti e di ossidazione. La purificazione dei tannini, e bene dirlo francamente, e difficile, ma con certi mezzi di laboratorio, riesce. Non con alcool amilico, non con la dialisi che e soltanto iin mezzo ansiliare ; il metodo di purificazione che va meglio e quello per successive evaporazioni. II che si puo fare con varie modalita : lo uso a questo scopo , ampie bacinelle circolari di por- cellana o di cristallo perfettamente pulite , ove verso accuratamente un po' deUa soluzione tannica. Per una purificazione rigorosa oc- corre operare in arabiente caldo e secco (per affrettare 1' evapora- zione) facendo le nianipohizioni entro un largo recipiente pieno di anidr. carbonica mantenuta a secchezza. Ma il metodo migliore consiste nel far passare una corrente con- tinua di azoto (o altro gas inerte) secco e caldo, sopra una serie di bacinelle chiuse in apposite concamerazioni, fino ad evaporazione completa.^ Eliminando sisteraaticaraente le cristallizzazioni periferiche e quelle centrali ove si depositano le poche sostanze inquinanti fornite di un diverso grado di cristallizzabilita, e ripetendo 5 o 6 volte r operazione, si puo spingere la purificazione al massimo liniite. " Ora che sappiamo ottenere un tannino puro possiamo chiederci che cosa e chimicamente. "Sotto il nome di tannino va compreso un complesso di so- tanze unicaraente composte di tre eleraenti (C, H, 0) , e che hanno uno piü nuelei fenolici con almeno un carbonile ". Dunque 1' ossatura costitutiva di un tannino e questa : / CO' \. / ^) Si costruisce un apparecoliio a circuito tubolaro che attraversi le concamerazioni, e dentro al quale il gas, continuaiuente ripristinato da esiccatori, circoli per l'aspirazione interna prodotta nella regione riscaldata, e circoli sempre nel senso voluto, uiediante una valvola automatiea. -) Ho insistito su questi due punti sapendo che, in tal genere di studi, vale assai piii, anche la sola enunciazione di un nuovo metodo, che non la etitottuazione manuale di moltc analisi. XXV. 1. Cavazza: Contributo allo studio dei Tannini. 17 Allo stato attnale delle cognizioni non si puo neppur parlare di una classificazione completa. Pero quella rudimentale che pre- sento mi lia servito non poco ad appianare diverse difficoltä. I gruppo. — Derivafi carbossilfenolici. I qnali a seconda che hanno CL un multiplo di 7 si distinguono in ,' mononiicleare — ac. gullico i binucleare — ac. digallici e tamiini tijjicP p ' trinucleare — ac. seqiiojtannico {C^^ H„q O^q) tetranucleare — ecc. Si conoscono tannini ad elevata poHnuclearitä come l'ac. nuphartannico (650 H^q ög,). II gruppo. — Derivafi carbossilfenolici in cui C ha un numero non multiplo di 7. in gruppo. — Derivati carhonilfenolici. Auch' essi a seconda del numero dei nuclei fenolici si dividono in mononucleare — p \ binucleare — ac. caffetannico (Nierenstein) ^ trinucleare — ecc. Ciascuna classe comprende due otticamente attivi = con atomo di C asimmetrico. [ levogira Ordixi : Forme l destrogira ö^ ottic. inatt. ^ senza C asimmetrico. La distinzione fra tannini glucosidi e non glucosidi interessa piü la tisiologia che la chimica ; perche i primi vanno considerati come eteri salini, nei quaU, se vogliamo conoscere la costituzione dell'ac. tannico, questo deve venir liberato da ogni legame. OH H OH H OH I 1) 0H< >-C*-< >0H OH H — C:0 OH CeH„0,-0 -'H H Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXV, 1. 18 Cavazza: Contributo allo studio dei Tannini. XXV, 1. Corae si scorge facilmente le classi di grau liuiga piü impor- tanti souo le biuucleari, aiiclie perche i tamiiui polinncleari possono scindersi e ricondursi a binucleari e perfiuo monouiicleari. Parallelo alla binnclearita sta il fatto che generalinente il tau- iiiuo fimziona da acido bibasico dando sali amorfi. Ad ogui modo i piinti da cliiarirsi sono ancora molti, moltis- sime le iucertezze. Le quali, se spiegano e scusauo qualcbe iuevi- tabile eqiiivoco od errore, d' altra parte impediscono di studiare con successo , le diverse sostaiize di analoga derivazioue beuzoica , come i poliglucosidi dell' aciclo eUctgico, i ciii prodotti di ossidazione sono cosi simili a quelli dell' ac. gallico. •'• Neil' accennare ai miovi composti, se dovessi soltanto trascri- vere, nonche commentare , le uote sperimentali che via registravano i risultati acquisiti di ogni esperienza ; mi dilungherei di troppo ; d' altra parte qiiello che per ora piü importa e la nozioue certa deir esistenza di ben cUeci mtovi tannati trascurando i secondari e meno appariscenti come qiielli col Mg metallico, e senza dire che ve ne poträ essere qualche altro specialmente col metalli delle terre rare {Ce., Tb. ecc.)- Vediamo piuttosto qualche differenziazione do- V u t a a q u e s t i composti, in vista di a }) p 1 i c a z i o n i m i c r o - tecniche. Pei diversi tannini i sali ferrici danno una colorazione unifor- meraente violaceo-verdognola scura, che serve ottimameute in ricerche sommarie e preliminari , ma e una pessima differenziatrice. Ecco invece che cosa si ottiene col carb. di TaUio: -|- ac. castanotannico = delicata eoloraz. paglierina -|- ac. caffetannico = soluzione verde smeraldo -f- ac. pelargotannico^ = lieve precipitato jalino Tl \ -f- ac. qnercitannico = densa flocculazione caseosa -)- ac, patoquercitanu. (galle) = soluz. giallo vivo e poco prec. rosso -|- ac. ampelotannico = precip. bruno col nitrato di n r a n i 1 e ^) Ancora i)iü problematici sono i ßohafeni. Per ora Tac. ellagico lo riteniamo la bianidride dell'ac. digallico. '^) Chiamerei cosi il tannino che lio trovato (e diffusamente) nei gerani. XXV, 1. Cavazza: Contributo allo studio dei Tannini. 19 -j- ac. castanotannico = viva colorazione ruggine -j- ac. caffetanuico =^ denso precip. nocciola -|- ac. pelargotaunico = precip. giallo-rosso U / -|" ac. quercitaumco = soluzione giallo briina con poco dep. rosso -|- ac. patoquercitannico ^ precip. denso neutro -[- ac. ampelotauuico = colorazione mattoue Da nn atteuto esame apparira manifesta la diifereuziazione ; ma bisognerebbe avere inuauzi agli occhi la scliiera eloquente dei tubi da saggio , per farsi una giusta idea delle diifereuze di colorito e dello stato prevalente di soluzione o precipitato. Anche 1' idrato di stronzio , da notevoli differenziamenti e da un bei composto rosso coli' ac. castanotannico ; e il nitrato di Torio con Facido pelargotannico produce un' abbondante lattescenza. Ciascuno , poi , di questi precipitati (o soluzioni) puö venire individuato e riconosciuto con ulteriori reazioni. Cosi ad es. un uraniltannato non puö venir confuso con nessun altro bastando trat- tarne una parte con vauadato ammonico e un' altra con ferrocianuro potassico , per avere nel primo caso una colorazione indaco , e nel secondo un colore rosso poi'pora dovuto all' uranio. Di piü; si possono ditferenziare non soltantc acidi tannici di diverse plante ; ma vi e modo perfino di diversificare per es. nella quercia il tannino fisiologico dal tannino patogenico , e cio non con un solo reattivo ma con almeno tre {Tl, Sr, TJ). Ora dovrei far qualche cenno sui densi cesitcmnatl notevolmente fusibili a caldo, sui chiari nibidltaiumti auch' essi ossidantisi forte- mente all' aria, sui ioritaiuicdi gelatinosi e caratteristici, e sui diversi sali complessi come il selentännato potassico solubile in ac. ossalico e identiticabile con vanadato ammonico , il cobaltannato potassico assai ossidabile, ed altri analoglii ; ma ora che questa serie di nuovi composti sta modestamente per entrare nel regno della Cbimica, non mi resta che augurare che vengauo ripresi allo studio con piü vasti mezzi ; onde ritrarne ogni utile possibile e, almeno, piu precise nozioni intorno a un gruppo di sostanze di alto Interesse cbimico e fisio- logico, quali sono i tannini. Perclie non rimanesse uessuna via intentata , e per studiare tutti i lati della questione^ in vista della differenziazione aggiungo ^) Poiche non ho trascurato la parte pratica, dimostrando l'influenza dei tannini nel terreno non solo per disgregazioni e idrolisi litologiche, 2* 20 Ca V a z z a : Contributo allo studio dei Tannini. XXV, 1. di aver fatte ricerclie spettroscopicbe coi mezzi gentilmeiite fornitimi dal Prof. P. G. Costaxzo, che cordialmente ringrazio. Per le sostanze spettrofore si potrebbero avere preziosi risultati specialmente ab- biuando lo spettroscopio al m i c r o s e o p i o , e giovandosi dell' am- piezza delle cellule idioblastiche e della finitezza del microtomo, per fare ricerche istospettroscopicbe. Non pei tannini che non m' hanno dato spettri per assorbimento differenziati, ma per altre sostanze, questo metodo non e trascurabile. Invece, quello clie, neUa ricerca microchimica dei tannini, troverä una splendida applicazione e il colorito indaco scurissimo che si ha con la formazione del vanaditannato. Ho giji fatte ripetute prove anche con sezioni di radici di vite colorate con soluzioni diluite di clornro di vanadio e coufrontandole con altre trattate col Fe Cl.^ si notano diversi vantaggi, qnali una maggior prontezza e intensitä di colorazione tale da permettere i piü forti ingrandimenti, un rilievo perfetto dei tannini snbcuticolari e di quelli dei fasci librosi , insomma un complesso di caratteri che assicurano al vanadio uno dei primi posti tra i piü delicati reagenti del tannino. ^ ma ancora nella coiupleta scissione del fosfato ferrico di nota e deplorata insülubilitä. ^) Si obbietterä che il vanadio e costoso, ed e un duplieato del ferro. Ebbene non e vero. 100 cm^ di soluz. opportunamente diluita di cloruro di vanadio si hanno con pochi centesimi. Pure con pochi centesimi si ha un litro di soluzione acquosa di vanadato ammonico , che in certi casi serve ancor meglio per essere incolora. II vanadato ammonico e insupera- bile nei casi di competizione e coesistenza di altri acidi, i quali se non fossero neutralizzati, impedirebbero la reaz. ferrica. II vanadio poi diver- sifica dal ferro: infatti, coiue le radici di vite si colorano in nero-indaco col vanadio e in viola-verdognolo col ferro , cosi le ripiegature subcuti- colari delle castagne col ferro si colorano in nero-violaceo , col vanadio in verde-celeste. Allora, si obbietterä, nel caso delle castagne serve meglio il ferro! E vero, ma pel tannino del caife, della vite, dei pomi ed altre frutta e di altre piante e senza fallo assai prefei-ibile il vanadio. Ma il parlare di "meglio" e di " preferibile " non e giä un dimostrare che il vanadio non e un duplieato del ferro? Bologna, 28 febbraio 1908. [Eingegangen am ß. April 1908.] XXV, 1. Bödecker: Celloidin-Entkalkungs- u. Entkieselungs-Methode. 21 Celloicliii-Entkalkungs- und Entkieselungs- Metliocle. Von Dr. C. Francis Bödecker in Berlin. Hierzu eine Textabbildung und eine Tafel (Tab. 1). Die Entkalkmig oder Entkieselimg von Objekten, welche wenig- organische Substanz enthalten , bietet verschiedentliche Schwierig- keiten. Will man einen solchen Prozeß vornehmen , so sinken die Reste der organischen Masse zusammen oder werden in der Ent- kalkungs- oder Entkieselungsflüssigkeit vollständig auseinandergerissen und verstreut. Es ist daher fast unmöglich die feineren Strukturen dieser organischen Substanz zu untersuchen. Dieser Umstand ver- anlaßte mich eine Methode zu ersinnen, welche auch das geringste Quantum organischer Masse von der anorganischen trennt ; zur ge- naueren Untersuchung fertigstellt, dabei aber Lage und Form des zu untersuchenden Objekts unverändert läßt. Eine vorläufige Mit- teilung dieser Methode erschien bereits in dieser Zeitschrift. -"^ Das Prinzip der Celloidin-Entkalkungs- oder Eutkiesehmgsmethode beruht darauf, daß, sobald die Säure die anorganischen Substanzen löst, das Celloidin au deren Platz tritt und die feinen organischen Strukturen so unterstützt, daß sie weder zusammensinken, noch aus- eiuandergerissen und weggewaschen werden können. Bei gewöhn- licher Entkalkung wird das Objekt in die Säurelösung gelegt und dann und wann kontrolliert. Jedoch Avird bei der leisesten Be- wegung des Gefäßes eine Strömung in der Flüssigkeit verursacht, durch die alle organischen Teile abreißen und als feines Sediment zu Boden sinken. Dies ist natürlich nur der Fall, wenn das Objekt ein geringes Quantum (5 bis 10 Prozent) organische Substanz ent- hält, welche ganz fein verteilt ist. Beim Knochengewebe z. B. ist 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XXII, 1905, p. 190. 22 Bödecker: Celloidin-Entkalkungs- u. Entkieselungs-Methode. XXV, 1. diese Methode überflüssig, da der Prozentsatz der übrig bleibenden organischen Substanz ein großer ist und eine einheitliche Masse bildet. Das zu entkalkende oder zu entkieselnde Objekt muß gut fixiert und ständig feucht gehalten sein. Letztere Mahnung wird überflüssig erscheinen, jedoch sind schon viele Ergebnisse von Unter- suchungen veröffentlicht worden , die an ausgetrockneten Objekten vorgenommen waren. Die Untersuchenden schienen gedacht zu haben, daß eine Austrocknung ausgeschlossen sei, da nur wenig organische Masse vorhanden war, welche in größeren Mengen anorganischer Substanz eingebettet war. Als Fixierflüssigkeit nehme man eine, die keine Säure enthält, da sonst die Entkalkung schon bei der Fixation anfängt. Formaliu, Quecksilberchlorid oder absoluter Alkohol leisten gute Dienste. Das fixierte Objekt wird gründlich entwässert und in eine dünne Celloidin- lösung gebracht. Danach wird es in die Entkalkungslösung gelegt, welche aus einer Celloidinlösung mit Zusatz von 10 Prozent Salpeter- säure besteht. Die Bereitung dieser Lösung wird folgendermaßen vorgenommen : Um 50 cc saueres Celloidin herzustellen nimmt man 5 cc Salpetersäure, welche mit 20 cc Äther und absoluten Alkohol vollständig untermischt unter stetem Umrühren tropfenweise zu 30 cc Celloidin zugesetzt wird. Ist die Säure ungenügend verdünnt, oder die Celloidinlösung zu dick, so wird das Celloidin teilweise gegerbt und kann nicht wieder zum Lösen gebracht werden. Es ist manch- mal vorteilhaft, die Säure noch stärker mit Alkohol und Äther zu verdünnen , um das Niederschlagen des Celloidius zu verhindern. Sollte sich jedoch in solchem Fall die entstandene Lösung als zu dünn erweisen , so ist es ein leichtes , dieselbe durch Verdunstung wieder zu verdicken. Die Konsistenz dieser Lösung soll ungefähr der der gewöhnlichen dicken Celloidinlösung entsprechen und soll in diesem Zustand permanent gehalten werden. Wird die Lösung zu dünn, so sinken die organischen Strukturen zu Boden ; ist dagegen das Celloidin zu dick, so kann die Säure nicht frei genug durch das Gewebe zirkulieren , wodurch die Entkalkung zum Stillstand kommt. Um nun Objekte in einer permanent normalen Lösung zu entkalken, müssen die Gefäße, in denen der Prozeß vor sich gehen soll, einen möglichst luftdichten Verschluß haben. Die gewöhnlichen Glasschalen mit aufgeschlitfenem Deckel leisten nicht genügende Dienste, da die Ätherdämpfe den Deckel in die Höhe treiben und das Celloidin ungehindert austrocknet. Dies kann verhindert werden, indem man eine gewöhnliche Uhrfeder (von einem Wecker) in die XXV, 1. Bödeckcr: Celloidin-Entkalkungs- u. Entkieselungs-Methocle. 23 Form, wie sie in nebenstehender Figur angegeben ist, biegt, so daß sie den Deckel fest auf das Gefäß preßt. Hierdurcli verhindert man das Entweichen des Alkohols und Äthers und somit das Austrocknen des Celloidins. Trotz alledem ist es immerhin eine wohlangebrachte Vorsicht , dann und wann zu kontrollieren , ob das Celloidin nicht doch zu dick geworden ist. Ist dieses trotz aller Vorsichtsmaß- regeln erstarrt , so ist es nicht möglich durch einfaches Zusetzen von Alkohol und Äther die normale Konsistenz herzustellen. In diesem Fall ist es nötig das Stück Celloidin um das Präparat herum samt denselben auszuschneiden und von neuem in saueres Celloidin einzulegen. Auf den Teil der Methode, welcher die Entkieselung behandelt, behalte ich mir vor später zurückzukommen, da meine Experimente in dieser Richtung noch nicht vollständig sind. Die Zeitdauer der Entkalkung variiert je nach der Größe des zu entkalkenden Stückes. Es ist ratsam die Objekte möglichst klein zu benutzen, da sich sonst die Zeit der Fertigstellung bis auf 2 Monate erstrecken kann. Auch kommt es darauf an , wie groß der Pro- zentsatz der zu entkalkenden anorganischen Substanz ist. Ein Objekt mit verhältnismäßig wenig anorganischer Substanz entkalkt sich lang- samer als eines, das einen größeren Prozentsatz davon enthält. Im ersten Augenblick mag diese Behauptung widersinnig erscheinen, aber sie erklärt sich leicht, da bei vorwiegender organischer Masse eine leichte Zirkulation der Säure vorhindert wird. Dies ist z. B. der Fall bei der Entkalkung eines Stückchens Zahnbeins und -Schmelzes. Hier entkalkt sich der Schmelz viel schneller als das Zahnbein. Da- 24 Bödecker: Celloidin-Entkalkungs- u. Entkieselungs-Metbode. XXV, 1. lier ist es ratsam, bei Schmelzimtersucbimgen möglichst wenig- Zahn- bein an dem Präparat haften zu lassen, Objekte von einem halben Millimeter Stärke können bereits in einer AVoche entkalkt sein. Ist nur wenig organische Masse vorhanden, so ist es leicht, das Ende der Entkalkung zu erkennen, da in diesem Fall das Objekt ziemlich durchsichtig wird , wenn die Entkalkung beendet ist. Ist jedoch mehr organische Masse vorhanden, so muß die Fertigstellung durch Versuche geprüft werden. Eine solche Prüfung, um die vollständige Entkalkung festzustellen, kann folgendermaßen vorgenommen werden. Nachdem das Celloidin vollständig erstarrt ist, kann man sich durch Durchstechung mittels einer feinen Nadel überzeugen, ob das Prä- parat bereits die nötige Weichheit aufweist. Ist dies der Fall, so ist es zur Weiterbehandlung fertig; ist es dagegen noch zu hart, so muß es auf oben erwähnte Weise aufs neue in frischem saueren Celloidin eingebettet werden. Als ratsam möchte ich jedoch diese Prüfung nicht darstellen, da man das zu untersuchende Objekt durch den Stich verletzen und untauglich macheu kann, muß jedoch er- klären, daß es vorläufig weiter keine direkt empfehlenswerte, unfehl- bare Art der Prüfung gibt. Das Erhärten des Celloidins war früher eine langwierige Sache, da, wenn es zu eilig betrieben wird, sich Luftblasen in dem Celloidin entwickeln, welche später störend wirken. Ein anderes Verfahren läßt sich, dank Herrn Prof. Dr. Willixger vom hiesigen Zahnärzt- lichen Institute, innerhalb 24 Stunden ohne jede Blasenentwicklung vornehmen. Man setzt die das Präparat enthaltende Glasdose, sowie eine Schale mit Chloroform unter eine luftdicht abschließende Glas- glocke. Nun entziehen die Chloroformdämpfe innerhalb 12 bis 24 Stunden den Alkohol-Äther und man erhält das Celloidin in a-oII- ständig gleichmäßig erhärteten Zustand. Sodann wird das Präparat ausgeschnitten , wobei man darauf achten muß , daß es überall von einer 3 bis 4 mm dicken Celloidinschicht umgeben bleibt. In manchen Fällen empfiehlt es sich sogar, ein wenig gewöhnliches, dickes Cel- loidin an die untere Seite des Blockes, d. h. an die Seite, an welcher das Präparat in Berührung mit dem Boden des Gefäßes gelegen hat, anzufügen. Darauf muß der Block 10 Minuten an der Luft trocknen, ehe man zur Weiterbehandlung übergeht. Bei meinen ersten Versuchen habe ich Celloidinschnitte angefertigt, die ich aber nicht feiner als 25 bis 30 i^ erlangen konnte. Die Ursache dieses Ergebnisses glaube icli darin zu sehen, daß wahrscheinlicli die Ein- wirkung der Säure das Celloidin beeinflußt hat. Auch erwies sich XXV, 1. Bödecker: Cello'ülin-Entkiilkungs- u. Entkieselungs-Methode. 25 diese Säureauwesenheit für das Mikrotommesser als schädlich. Ein dritter Nachteil war , daß das Celloidin alle zur Färbung des Prä- parates angewandten Farben in sich aufnahm. Daher bettete ich fortan die Blöcke in Paraffin ein und erlangte dadurch tadellos dünne Schnitte und konnte außerdem auch im fertigen Präparat das Celloidin gänzlich entfernen. Vor dieser Einbettung jedoch muß eine Neutralisation "der Säure und dazu eine gründliche Entwässerung vorgenommen werden. Der Block wird erst in TOprozentigen Alkohol eingelegt, Avorin er mindestens 6 Stunden verbleibt. Die Abkürzung dieser Zeit ruft eine starke Schrumpfung des Celloidins hervor. Nachdem dann der Block für 2 Stunden in 40prozentigem Alkohol gelegen hat, wird er in eine öprozentige wässerige Alaunlösung gebracht, in welcher er 12 Stunden bleibt. Zuerst entstellt eine Wolkenbildung im Celloidin, welche sich aber meistens wieder vollständig verzieht. Tritt diese Rückbildung jedoch nicht ein, so weist das darauf hin, daß die vor- herige Behandlung zu rasch vorgenommen war. Nachdem die Neu- tralisation der Säure vollendet ist, nimmt man eine 12stündige Wäs- serung des Blockes , am besten in fließendem Wasser , vor. Der Block wird dann durch steigenden Alkohol bis zu 70 Prozent ge- bracht, wo man ihn lange Zeit aufbewahren kann, falls Zeitmangel die weitere Untersuchung verhindert. Ehe jedoch die Säure gänz- lich entfernt ist, darf man die Behandlung für längere Zeit nicht aussetzen, da durch die Verdunstung des Alkohol-Äthers die Kon- zentration der Säure sehr schnell zunimmt. Darum muß das Präparat, sobald das Celloidin sich verhärtet hat, möglichst schnell durch die bezeichneten Flüssigkeiten gebracht werden , um der schädlichen Wirkung der konzentrierten Säure zu entgehen. Eine durchaus vollständige Entwässerung durch absoluten Alkohol ist ausgeschlossen, da dieser das Celloidin langsam auflöst. Nichts- destoweniger kann man den Block kurze Zeit (eine halbe Stunde) in 96prozentigen Alkohol legen und darauf für 10 Minuten in absoluten Alkohol. Ist der Block sehr klein, oder ist der Celloidinrand um das Präparat sehr schmal , so muß die Zeit verkürzt werden , da sonst die Gefahr nahe liegt, daß das Celloidin aufgelöst wird. Um auch den letzten Piest des Wassers zu entfernen , habe ich ver- schiedene Methoden versucht. Das Kreosot, wie es von Pavlow^ ^) Pavlow, W., Kreosot als wasserentziehendes Mittel (Diese Zeitschr. Bd. XXII, 1905, p. 186). 26 Böclecker: Celloidin-Entkalkungs- u. Entkieselungs-Methode. XXV, 1. benutzt wird, leistet gute Dienste, doch habe ich es wegen seines •unangenehmen Geruches nicht weiter verwandt. Kai-bolsäure oder Anilin haben genügende Wasserentziehungskraft, um den Block gänz- lich zu entwässern. Die Karbolsäure muß in der Form von absolut wasserfreien Kristallen durch Hitze geschmolzen werden und dann mit "-/.^ ihres Volumens Chloroform verdünnt werden. Diese Lösung wird wie das Anilin verwendet , auf welches ich weiter unten zu- rückkomme. Nachdem der Block kurze Zeit in absolutem Alkohol verweilt hat, legt man ihn in wasserhelles Anilin, welches mehrere Male ge- wechselt werden muß, d. h. so lange, bis der Block gänzlich durch- sichtig geworden ist. Darauf wird das Anilin durch Zusatz von Chloroform verdünnt, in welcher Flüssigkeit dann das Präparat wieder mehrere Stunden liegen muß. Schließlich kommt der Block in reines Chloroform, welches ebenfalls öfters gewechselt wird. Ist das Anilin durch Chloroform nicht genügend ausgewaschen, so färbt sich das Celloidin ganz dunkel, doch ist dieses, meines Erachteus nach, kein besonderer Nachteil. Jetzt wird der Block in der gewöhnlichen Weise erst mit Chloroform und Paraffin, dann mit weichem und endlich mit hartem Paraffin durchtränkt und eingebettet. Als Löse- mittel für Paraffin leistet Chloroform erheblich bessere Dienste als Xylol, da letzteres das Celloidin nicht in demselben Maße zu härten imstande ist wie ersteres. Überführt man einen Celloidin- block vom Anilin ins Xylol, so ist es fast unmöglich denselben zu schneiden. Ehe ich nun zur Weiterbehandlung der Schnitte übergehe, möchte ich noch ein paar Worte über das übrigbleibende sauere Celloidin sagen. Da das Celloidin ein ziemlich kostspieliges Mittel ist, geht man wohl nicht gern verschwenderisch damit um. Für jedes Prä- parat von 2 mm Dicke und 5 mm Länge und Breite sind ungefähr 20 bis 30 cc Entkalkungsflüssigkeit nötig. Ist die Entkalkung voll- endet, so ist das zum größten Teil übriggebliebene Celloidin von Säure und Kalksalzen durchtränkt. Da es in diesem Zustand natür- lich vorerst nicht wieder für denselben Prozeß benutzbar ist , muß es gründlich ausgewaschen werden. Man schneidet daher das Celloidin in feine Stücke und legt es für 24 Stunden, eventuell auch für länger, in TOprozentigen Alkohol. Bei weiterer Behandlung verfährt man ähnlich wie bei Präparaten , indem man es der Reihe nach durch 40prozentigen Alkohol, Alaunlösung, fließendes Wasser und Ent- wässerung gehen läßt. Nur muß die Dauer des Aufenthalts in den XXV, 1. Bödecker: Celloidin-Entkalkiuiii's- u. Entkieselungs-Methode. 27 verschiedenen Lösungen selir in die Länge gezogen werden. Nach- dem das Celloidin kurz durch OOprozentigen Alkohol gegangen ist, breitet man es an. einer staubfreien Stelle aus , um den Rest des Wassers ausdunsten zu lassen. Hierdurch dunkelt es ein wenig nach, was jedoch nicht verhindert, daß es sich wieder zu Eutkalkungs- zwecken verwenden läßt, nur ist die Schnittfähigkeit dieses Celloidins nicht so gut, wie die des ungebrauchten. Ersteres kann auch darum nicht mehr für die Methode des gewöhnlichen Celloidinschnittes in Betracht kommen. Da es jedoch für Entkalkungszwecke zulässig ist, kann ein in solches Celloidin gelegtes Objekt, falls es später auch in Paraffin gebettet wird, wieder in normaler Weise gebraucht werden. Das Schneiden des Paraftiublocks , in dem der Celloidinblock enthalten ist, geschieht in der gewöhnlichen Weise, das Aufkleben der Schnitte jedoch am besten durch die sogenannte „Japanische Aufklebemethode". Nachdem der Objektträger mit den aufgeklebten Schnitten Xylol und Alkohol passiert hat, ist es nötig, das Celloidin vorsichtig in absoluten Alkohol und Äther zu lösen, was 3 bis 4 Mi- nuten in Anspruch nimmt. Von diesem Punkt an ist die Weiter- behandlung die gewöhnliche. Das Präparat kann mit jeder beliebigen Färbungsmethode be- handelt werden. Als besonders empfehlenswert nenne ich die Heidenhain sehe Eisenhämatoxylin-Färbung, die sich bei meinen Unter- suchungen gut bewährt hat. Eine kurze Zusammenfassung der Celloidin- Entkalkungsmethode findet mau in der folgenden Tabelle : Arbeitstabelle. Bemerkung. Flüssigkeiten. Zeitdauer. Nach Fixierung passiert das Prä- parat folgende Flüssigkeiten: Alkohol, 40prozentiger 1 Stunde. n '*-' ;i 12 n 9fi 1/ „ absol. 12 Stunden. Äther und absoluter Al- kohol 1 Stunde. Dünnes Celloidin 12 Stunden. Säuerliches Celloidin 1 Woche bis 2 Monate. 28 Bödecker: Celloidin-Entkalkungs- ii. Entkieselungs-Methode. XXV, 1. Bemerkung. Nachdem die Entkalkung voll- zogen ist, wird ein Block aus- geschnitten in der Weise, daß man einen 3 mm breiten Rand Celloidin um das Präparat her- um mitsamt demselben heraus- hebt. Der Block geht nun wei- ter durch: Flüssigkeiten. Zeitdauer. Das Anilin oder Karbolsäure und Chloroform muß mehrere Male gewechselt werden , so lange bis das Präparat durchsichtig erscheint. Dann wird dem vorhandenen Vo- lumen ein gleiches Quantum Chloroform zugesetzt. Endlich in reines Chloroform. Auf den Paraffinofen. Im Paraffinofen. Alkohol, TOprozentiger 6 Stunden. « 40 „ öproz. wässerige Alaun- lösung 2 „ 12 „ Fließendes Wasser 12 „ Alkohol, 40prozentiger 1 Stunde. . 70 „ 30 Minuten. . 96 „ „ absol. 30 „ 10 „ Karbolsäure - Kristalle , Vs und Chloroform ^/g J oder \ 12bis24Stun den. Anilin ' Chloroform zugesetzt 6 Stunden. Chloroform 12 „ Chloroform und Paraffin p: C5 Phosphorsäure : er CD cr 2. INS o er 2. CT o er •^ cc g: o r S B t<5 fC, 5 CT g- ? ^ s 5 § " 2 C6 P_ C5 -! >^ ^ '^ ^ ?, g5 9 tO :^ 1 i " : 1 5- 1— o re 95 CT o 55 o CD P ct. i? 7- » 1-^ _ O ES! 1 1 s ^ i- '^ Si g 5 S 4^ N = 1 5^ S3 5- 2 o o Ct> SS CT o ? ? ^ CT ^ 5= ^ »-^ 0-« E^- 1 i « s s- P- 3 p: O 2. i i ^ ■ C5 03 er o -^ P CD CD P C5 »1 =.. ? 5 i 1 ^' i ^ : 1 - ^g 1^1 h-' INS > B o- er CD_ CT o er Ä. o '-• o ^ B ^ ö 2. « £- § B, S ^- ii Ins c£> SS- i i « ^ & & 3 CD o CT o s. S^ - s s ^ CD &S r C5 C5 g. ? § 2 1. i i " g 1 1 05 CT C6_ o » 2 C ^ B ö cc &5 Ol V C5 O p: g O a o p o »-s ■^ Ö 3 S« CD P S S^ ^ ri ^ CD 1— 1 _ CO > B er 2. ö et- dl o 5?. g'l §■ 1 o es p= i^ CT er S P Ü» CD «= j' P Ö ^ P: ° tO CO S2- S B „ c « » ü 3 S p. 3 Ins O 2. CT 2 p ^ 1 C Ins C» P CT 7^ C5 C5 ^ o o 2 p: - tO H- -. ^ er t^ CD % i ^ 7^ CS C5 XXV, 1. Reidemeister: Einfluß von Säure- usw. Zusatz des Agars. 51 bei 100° auf 2 Prozent Agar, 1 cc N. Oxalsäure bei 100° auf 2 Prozent Agar). Auch wurde durch Versuche im Reagenzglase fest- gestellt, daß Salpetersäure, Schwefelsäure, Salzsäure, Oxalsäure und Weinsäure den Agar zu spalten vermögen ; dagegen konnte das Auf- treten von Zucker nach Y2 stündigem Kochen eines Agar, der nur 2 Prozent Agar in 100 cc destillierten Wassers enthielt, nicht fest- gestellt werden. Demnach beruht wohl die verallgemeinernde An- gabe von Friedberger (14) : „Die Herstellung zuckerfreien Nähragars gelingt nicht, da beim Kochen des Agar-Agars, das bekanntlich ein Kohlehydrat ist, stets geringe Mengen Zucker abgespalten werden", auf einer irrigen Auslegung einer Notiz von Beyerinck (15) [„das Fleischagar erzeugt, ceteris paribus, viel mehr Gas wie Fleischgelatine, offenbar durch Zuckerbildung aus dem Agar infolge Präparation"]. Untersuchungen über die Reaktionsgeschwindigkeit und Art des Zuckers wurden nicht angestellt. Zum Schluß sei es mir auch an dieser Stelle gestattet, Herrn Privatdozent Dr. Küster für die Anregung zu der Arbeit und Herrn Prof. Dr. NoLL für die Erlaubnis, die Arbeit im botanischen Institut anzufertigen, besten Dank auszusprechen. Literaturverzeichnis. 1) Schutz, A rapid metbod of making nutrient Agar-Agar (Bull, of the Hopkin's Hospital III, no. 24, p. 92). JoKOTE, Über die Darstellung von Nähragar (Zentralbl. f. Bakterie!. Abt. 1, Bd. XXV, 1899, p. 379). Jacobi, Kleine Beiträge zur bakteriologischen Methodik (Zentralbl. f. Bakteriol. Abt. 1, Bd. III, 1888, p. 538). Karlinski, Vorrichtung zum Filtrieren vollständig klaren Agar-Agars (Zentralbl. f. Bakteriol. Abt. 1, Bd. VIII, 1890, p. 643). Heim, Die Neuerungen der bakteriologischen Untersuchungsmethodik seit 1887 (Zentralbl. f. Bakteriol. Abt. 1, Bd. X, 1891, p. 361, 393). Unna, Der Dampf trichter (Zentralbl. f. Bakteriol. Abt. 1, Bd. IX, 1891, p. 749). Paui-, Die Anwendung des Sandes zum schnellen Filtrieren des Nähr- agars (Münchn. med. Wochenschr. Jahrg. XLVIII, No. 3). Drigalski, Ein Schnellfilter für Agarlösungen (Zentralbl. f. Bakteriol. Abt. 1, Bd. XLI, 1906, p. 298). Haegler, Zur Agarbereitung (Zentralbl. f. Bakteriol. Abt. 1, Bd. XVII, 1895, p. 558). 4* 52 Reidemeister: Einfluß von Säure- usw. Zusatz des Agars. XXV, 1. Fränkel, A. , Bakteriologische Mitteilungen (Zeitschr. f. klin. Med. Bd. X, 1886, H. 5 u. 6). 2) London, Schnelle und leichte Methode zur Bereitung von Nähragar (Zentralbl. f. Bakteriol. Abt. 1, Bd. XXI, 1897, p. 686). Freudenreich, Zur Bereitung des Agar-Agars (Zentralbl. f. Bakteriol. Abt. 1, Bd. III, 1888, p. 797). VERBECK de ÄIeyer, über die Bereitung des Nähragars (Zentralbl. f. Bakteriol. Abt. 1, Bd. IX, 1891, p. 163). Walbaum, Zur Methodik der bakteriologischen Wasseruntersuchung, mit Angaben über die Bereitung des Nähragars (Zentralbl. f. Bak- teriol. Abt. 1, Bd. XXX, 1901, p. 790). Cache, Über die Frage der bakteriologischen Technik (Zentralbl. f. Bakteriol. Abt. 1, Ref. Bd. XXXVII, 1906, Originalreferat). 3) Drigalski, Ein Schnellfilter für Agarlösungen (Zentralbl. f. Bakteriol. Abt. 1, Bd. XLI, 1906, p. 298). 4) Schultz, Zur Frage der Bereitung einiger Nährsubstrate (Zentralbl. f. Bakteriol. Abt. 1, Bd. X, 1891, p. 52). 5) TiscHUTKiN, Eine vereinfachte Methode der Bereitung von Fleisch- Pepton-Agar (Wratsch 1890, No. 8). 6) ScHOTTELius, Einige Neuerungen an bakteriologischen Apparaten (Zentralbl. f. Bakteriol. Abt. 1, Bd. II, 1887, p. 97). 7) Cache, Über die Frage der bakteriologischen Technik (Zentralbl. f. Bakteriol. Abt. 1, Ref. Bd. XXXVII, 1906, p. 47; Originalreferat). 8) Günther, Einführung in das Studium der Bakteriologie. 5. Aufl. Migula, Kompendium der bakteriologischen Wasseruntersuchung. Heim, Lehrbuch der bakteriologischen Untersuchung und Diagnostik. Küster, Kultur der Mikroorganismen. 9) VON der Heide , Gelatinöse Lösungen und Verflüssigungspunkt der Nährgelatine (Arch. f. Hyg. Bd. XXXI, 1897, p. 82). 10) GaehtCtENS, Einfluß hoher Temperaturen auf den Schmelzpunkt der Nährgelatine (Arch. f. Hyg. Bd. LH, 1905, p. 239). 11) Hutchinsoh, über Form und Bau der Kolonien niederer Pilze (Centralbl, f. Bakteriol. Abt. 2, Bd. XVII, 1907, p. 65). 12) Rohrbeck, Zur Lösung der Desinfektionsfrage mit Wasserdampf (Zentralbl. f. Bakteriol. Abt. 1, Bd. VI, 1889, p. 493). 13) KÜSTER, Kultur der Mikroorganismen, p. 36. 14) Friedberger, Die allgemeinen Methoden der Bakteriologie (Handbuch d. pathog. Mikroorganismen Bd. I, p. 446). 15) Beyringk, Emulsions- und Sedimentfiguren bei beweglichen Bakterien (Zentralbl. f. Bakteriol. Abt. 2, Bd. III, 1897, p. 41). 16) Küster, Kultur der Mikroorganismen, p. 38 u. 89. [Eingegangen am 29. April 1908.] XXV, 1. Funck: Dispositifs permettant d'utiliser tout le trancliant etc. 53 Dispositifs permettant dutiliser tout le tranchant des rasoirs ä microtome. Par Ch. Funck de Nancy. Avec 4 figures. II arrive souvent dans les laboratoires oü Ton s'occupe de microscopie , d'etre ennuye par les stries des coupes , stries dues aux ebrecbiires du rasoir. Eii anatomie pathologique surtout, ces causes d'ennui peiivent arriver frequemment , vu le grand nombre de coupes de toute sorte qu'un Service si etendu est susceptible de faire. Un rasoir deteriore de la sorte demande beaucoup de temps et de patience pour etre remis ä neuf, et si jamais on a la mal- chance de voir s'abimer le rasoir de reserve (celui que prudemment on avait mis de cote pour les coupes fines de morceaux plus tendres), on est completement arrete dans son travail. — Or, ä moins de ressources particulieres , les petits rasoirs que l'on a sous la main ont une lame assez courte ; eile ne peut etre enserree que par ses deux extremites sur le support, dont les deux mäcboires ont un ecarte- ment limite et invariable. Donc, faute d'uu deplacement lateral, on ne dispose que d'une etendue limitee pour la coupe des morceaux. C'est la necessite qui nous a ainsi force a trouver des dispositifs simples et ä la portee de tous, permettant d'utiliser, selon les mo- ments , la partie moyenne de la lame ou les deux parties laterales jusqu'ici inoccupees, soit tantöt pour les coupes exigeant toutes les precautions, soit tantöt pour les morceaux laissant craindre les ebre- chures. — II serait ä desirer que les constructeurs de microtomes s'inspirent des lignes qui vont suivre pour joindre a tous leurs micro- tomes un pareil dispositif. Cela permettrait j\ tous les micrographes de ne pas subir de fächeux retards dans leurs travaux 5 car pendant qu'on repasse son rasoir sur le cuir pour les endroits qu'on utilise, les autres parties ebrechees se trouvent ainsi forcement remises ä 54 Funck: Dispositifs permettant d'utiliser tout le tranchant etc. XXV, 1. neuf peu ä peu, saus qu'ou ait ä deplorer du temps perdu, pour- tant si precieux. Dans ce qui suit, on verra la descriptiou de deux dispositifs qui realisent les desiderata exprimes ci-dessus. L'un est relative- ment simple, aussi moius parfait, mais ne demande aucun cbangement h faire au microtome meme, ce qui peut avoir son importance. Le second dispositif resulte d'une modificatiou faite k la glissiere du Support ä rasoir, et dans le cas present, ä la glissiere du microtome MiNOT (constructeur E. Cogit & Cie.^ Paris). II pourrait ueaumoius etre construit avec quelques modifications pour d'autres, car presque tous les microtomes fixent d'une fagon analogue leur support ä rasoir sur le socle en fönte. A. Mächoires supplementaires, permettant d'utiliser une plus grande partie du tranchant du rasoir. Le dispositif tres simple consiste essentiellement en une mächoire pareille a celle du microtome sur lequel on veut l'adapter. Cette mächoire servira ä enserrer l'extremite libre de la lame du rasoir. Son originalite n'allant du reste qu'ä oftrir cet unique avau- tage de permettre seulemeut l'utilisation de la partie jusque-lä iuaccessible du rasoir, allant du milieu vers l'extremite libre de la lame. Supposons qu'on ait l'babitude, a moins que la construction du rasoir ne l'exige elle-meme , de tourner le manche du rasoir vers soi, au moment de fixer celui-ci sur le support. Dans ce cas, pour vouloir se servir de la partie autrefois inutilisable mentiounee plus haut, on doit attirer le manche vers soi. L'extremite libre du rasoir n'atteindra plus la mächoire opposee. Pour fixer alors la lame, on intercalera entre l'extremite du rasoir et la mächoire fixe la nouvelle mächoire (fig. 1, a). On fixe celle-ci elle-meme solidement par le prolongement P (fig. 1, a) qui se trouve ä son cote oppose, pro- longement ayant en coupe une forme analogue au rasoir et s'engageant comme celui-ci entre les mors de la mächoire fixe. Pour que la mächoire supplementaire offre son maximum de resistance au rasoir, eile doit etre appliquee etroitement contre la mächoire fixe , avant de serrer la vis de cette deruiere. Si le rasoir, de par sa forme, exige qu'on tourne le manche du cote oppose, cette mächoire mobile ne servira plus. II en faudra XXV, 1. Fiinck: Dispositifs permettant d'utiliser tout le trancUant etc. 55 iiue aiitre, analogue et symetrique, pour ce c6t6, non representee sur la tig. 1, Comme il arrive souvent clans les laboratoires, d'avoir de ces rasoirs iiou „reversibles", les coustructeiirs devront toujours fournir les deux mächoires supplementaires et symetriques. Certains Supports u'out pas la tige transversale siiperieure T (fig. 1, a). Dans ce cus, il sera commode et moins coüteiix de fabriquer en une seule piece les deux mächoires , reliees l'une ä l'autre par leurs bases, comme le montre la fig. 1, 6. On voit donc, que par cet arrangemeut, on poiirra utiliser une plus grande partie du trancliant, mais cela seulement vers l'extremite /? opposee au manche. La coustruction simple de cet appareil ne necessite aucune modification au microtome meme, et peut rendre souvent quelques Services 5 mais il fallait trouver mieux, car la partie du rasoir atteuant au manche est encore in- accessible. Au lieu de vouloir transformer les mächoires actuelles, l'une restant fixe , l'autre pouvant se rapprocher ou s'eloigner de la mächoire fixe , realisant ainsi les couditions de la machoire supple- meutaire, mais avec cet avantage d'etre percee , ce qui permettrait de retourner le rasoir pour utiliser la partie de la lame situee vers le manche, uous avons pense ecarter cette disposition dissymetrique et peu pratique dans son fonctionnemeut, en modifiant la glissiere du Support. 56 Funck: Dispositifs permettant d'utiliser tout le tranchant etc. XXV, 1. B. Glissiere - Support permettant d'utiliser tout le tranchant du rasoir. Cette glissiere, comme le fait prevoir le titre, est uu auxiliaire precieux pour la coufection de coupes irreprochables. L'ancienne mauiere de faire consistait ä ne permettre au Support a rasoir qu'un mouvement ä direction invariable, qui fait rapprocher ou eloigner le rasoir du morceau k couper (fig. 2). C'est le mouvement antero-posterieur par rapport ix ce morceau et, 2. a moins de cas rares (bloc a couper tres volumineux et epais) on ne s'en sert jamais. Le n u V e a u dispositif consiste a pouvoir deplacer laterale- ment le support devant le morceau k couper (voir figg. 3 et 4 la fleche x) , l'ancienne disposition a direction antero-posterieure ayant ete conservee en meme temps, pour toute l'etendue de ce deplacement lateral. II fallait presenter devant le morceau les parties du rasoir jusque-lä, inutilisables situees de part et d'autres de son milieu. Le maximum de ce deplacement est donc indique par le double de la distance qui existe entre le bord du plus grand plateau porte-objet et la partie interne de la mächoire fixe. XXY, 1. Funck: Dispositifs permettant d'utiliser tout le tranchant etc. 57 Descriptioii de la glissiere : Les figures 3 et 4 montrent nettement ce dont il s'agit. La description en sera doiic courte. Sur la figure 3 011 voit les trois pieces indispensables qiii entrent dans la Constitution de la nouvelle glissiere. — Une plaque rectangu- laire Ä, ayant le long de ses plus grands cotes deux rebords {R et R')^ est pereee d'un trou rectangulaire dont le plus grand axe indique la direction du nouveau deplacement lateral (voir la fleche x). Cet orifice laisse passer la tige de la vis de calage F, dont la tete prend point d'appui derriere la plaque Ä. La longueur de cette tete (voir le poiutille de la fig. 3) est teile que dans n'importe quel endroit de la course de la vis, eile trouve toujours un point d'appui süffisant. 3. Cette vis servira ä fixer solidement le support ä rasoir, comme le faisait l'ancienne vis de calage. Le support lui-meme sera guide dans ses mouvements par la piece B (fig. 3 et 4), sur laquelle il repose; les deux petits rebords r et r' (fig. 4) l'y fixeront ample- ment. La plaque B sera guidee elle-meme pour le mouvement dit lateral par les deux rebords R et R' de la plaque J., entre lesquels eile sera placee. La longueur de la plaque A est egale ä celle de la plaque -ß, plus la double distance allaut du plateau porte-objet ä la machoire. Les deux rebords R et R' egalent en longueur la plaque i?, moins la double distance mentionuee plus haut. Le mode d'emploi et le fonctionnement n'ont plus guere besoin d'etre expliques. L'inspection de la figure 4 indique 58 Funck: Dispositifs permettant d'utiliser tout le tranchant etc. XXV, 1. suffisamment comment ou se sert de cette nouvelle disposition. D'ime part, Ton pourra effectuer le deplacement lateral par rapport au morceau jx couper (voir la fleche x, fig. 4) , eu glissant le support dans cette directioii jusqu'ä l'eudroit voulu. Les deux rebords y et r' du support eutraiueront la plaque B] celle-ci, eugainee elle-meme par les deux rebords R et R' de la plaque Ä , aura ainsi une direction rigoureusement parallele a Faxe lougitudinal de cette plaque, La vis de calage F, retenue et entrainee par la barre transversale T du support, ainsi que par la fente F de la plaque B, effectuera tous les mouvemeuts que lui ferout subir les deux pieces, dont le deplace- ment lateral est concomittant. L'espace rectangulaire creuse dans la plaque Ä est tel qu'il ne genera pas la tige de la vis dans ce deplacement. L'ancien dispositif a ete cependant conserve. Ainsi ou voit que, dans n'importe quel point de la course dite laterale du support, on pourra toujours etfectuer, selon les besoins, le deplacement dit antero-posterieur. C'est a cet effet, que la fente F de la plaque B est allongee dans cette direction, que la largeur du trou rectangu- laire de la plaque A egale la longueur de la fente F^ pour que la tige de la vis trouve toujours un espace libre, entrainee qu'elle sera par le support. La tete de la vis est egalement allougee dans ce XXV, 1. Funck: Dispositifs permettant d'utiliser tout le tranchant etc. 59 seiis , plus lougue cependaut que la largeur du trou rectang-ulaire, de Sorte que, meme a Textremite de la course dite antero-posterieure, eile aura ses deux extremites engagees sous la plaque Ä. La plaque B avec son support, arrivee ä l'extremite de sa course laterale , trouve toujours une base solide , vu la longueur de la plaque Ä, autrement il pourrait se faire des deformations sous la forte pressioii exercee par Ifi vis au moment du serrage. Cette meme plaque -B, arrivee a la flu de sa course, se trouvera au meme niveau que l'extremite des deux rebords R et R' permettant ainsi, meme daus cette position, le deplacemeut antero-posterieur du support. — Toutes les pieces ont ete calculees pour l'efFort qu'elles ont a subir ; les deformations ue sont pas a craindre. Le tout forme im ensemble barmonieux , qui ne prend guere plus de place sur les microtomes actuels que l'ancienne glissiere, En somme , deux mouvements sont permis par ce Systeme : le plus importaut est le deplacement lateral dans les limites necessaires indiquees plus haut; puis le deplacement dit antero-posterieur, le seul possible autrefois. Ces deplacements se fönt dans deux directions parfaitemeut perpendiculaires l'une ä Tautre , sans subir aucune de- viation, par suite de Tadaptation exacte de toutes les pieces. On voit donc, que par deux dispositifs tres simples, on parvient ä satisfaire amplement ses exigences de parfait technicien vis-a-vis des coupes ä obtenir. Nous avons fabrique les deux systemes; ils nous donuent des resultats entierement satisfaisants. II n'y a pas ä douter que les constructeurs ue se trouvent incites a l'adopter, uuiquemeut pour les avantages qu'ils procureront k leurs clients. D'autre part, nous ne doutons pas que quelque ingenieux micrographe ne se tire lui-meme d'afFaires d'ici-hi, j\ moins qu'il ne l'ait dejä fait par un autre dispositif, dont Texistence nous serait incounue. Resume: Yu la necessite d'un deplacement lateral du rasoir ä micro- tome devant le morceau ä couper, deux systemes peuvent etre employes: Systeme A: Mächoires mobiles, supplementaires , une pour chaque cote, au besoin les deux formant une seule piece; k fixer sur le cöte interne de la mfichoire fixe. Resultat: Utilisation seulement de l'extremite libre de la lame du rasoir. Systeme B: Glissiere-support, deplacant ä volonte le support ä rasoir dans deux directions perpendiculaires l'une ä l'autre : 1) Deplacement lateral devant le bloc ä couper. 2) Deplacement antero-posterieur par 60 Engel: Ein Kreuztisch mit automatischer Einstelhmg. XXV, 1. rapport au morceau, possible h chaque point du deplaceraent lateral. Resultat: Utilisation de tout le tranchant de la lame du rasoir. PossibiHte pour un point quelconque de la lame (ä part las points de fixation ex- tremes), d'occuper tous les points d'une aire rectangulaire, dont l'etendue peut etre calculee selon les besoins. [Eingegangen am 29. April 1908.] [Aus der Akademischen Klinik für Kinderheilkunde in Düsseldorf. Direktor: Prof. Dr. Schlossmann.] Ein Kreuztisch mit automatischer EinsteUung. Von Dr. Engel, Oberarzt der Klinik. Hierzu eine Textabbildung. Die Durchmusterung mikroskopischer Präparate in lückenloser Reihenfolge der Gesichtsfelder ist eine so mühevolle Arbeit, daß wohl jeder Versuch der technischen Erleichterung auf Beifall rechnen kann. Besonders beim Auszählen von Blutpräparaten oder bei der Durchmusterung von Schnitten nach vereinzelten Bazillen , dürfte es willkommen sein, eine Einrichtung zu besitzen, welche das Auslassen vereinzelter Präparatstellen durch eine mechanische Eiurichtimg, wenigstens bis zu einem hohen Grade, verhindert. — Der gewöhn- liche Gang der Dinge bei Arbeiten der genannten Art ist wohl der, daß man den Kreuztisch um eine Gesichtsfeidbreite nach oben oder unten verschiebt und dann durch langsame Drehung der Horizontal- schraube eine Gesichtsfeldreihe am Auge vorübergleiten läßt. Hier- bei muß der Beobachter einen Teil seiner Aufmerksamkeit darauf richten, daß die Bewegung wirklich immer nur einer Gesichtsfeld- breite entspricht, und daß er nicht etwa versehentlich über das Ziel hinausschießt. So muß er also seine Aufmerksamkeit teilen in das Bestreben, die gesuchten Details zu finden oder zu zählen und XXV, 1. Engel: Ein Kreuztisch mit automatischer Einstellung. 61 die Verscliiebuug so zu regulieren , daß ihm wirklich keine Stelle des Präparates entgeht. Die letztere Aufgabe dem Beobachter zu ersparen und ihm gleichzeitig eine Garantie an die Hand zu geben, daß er wirklich alles durchmustert habe, beabsichtigt die nun zu schildernde Ein- richtung. Das Prinzip besteht darin, daß die Bewegung der Hori- zontalschraube nicht durch das Augenmaß reguliert wird , sondern durch eine automatische Einrichtung, welche einmal eingestellt, immer nur wieder dieselbe Verschiebung, und zwar durch einen leichten Fiugerdruck ermöglicht. Zu diesem Zweck ist au einem gewöhn- lichen Kreuztisch die Einrichtung zur Bewegung der Präparate in seitlicher Richtung außer der Spindelschraube mit einem Zahnrad ausgestattet, welches auf der Gewindespindel sitzt und mit 50 Zähnen versehen ist. An dem Zahnrad wiederum ist ein Hebel mit einer federnden Sperrklinke befestigt (s. Abbildung). Diese Sperrvorrich- tung hat 2 Zähne, welche je nach der Einstellung mittels derselben Hebelbewegung die Drehung des Zahnrads nach vorn oder rück- wärts bewerkstelligen. Die Bewegung des Hebels wird durch eine Anschlagschraube reguUert, wodurch soviel Zähne eingestellt werden können, als zur Verschiebung erwünscht wird. Die Benutzung der ganzen Einrichtung gestaltet sich nun derart, daß man mit Hilfe der Sperrschraube die Bewegung des Hebels so reguliert , daß etwa "/., eines Gesichtsfeldes durch eine einmalige Bewegung weiter geschoben werden. Die Einschränkung der Be- wegung auf -/o empfiehlt sich wegen der unscharfen Zeichnung der Gesichtsfeldränder. Ist nun unter ganz automatischer Hin- und Her- 62 Heusner: Ein Objekttisch mit auswechselbaren Tischplatten. XXV, 1. bewegung des Hebels eine Horizontalreihe besichtigt, so wird mittels der Schraube für die hierzu senkrecht stehende Richtung wiederum eine Verschiebung des ganzen Präparats um '-^/g Gesichtsfeldbreite in diesem Sinne vorgenommen, und man beginnt die Horizontalbewegung wieder nach Umschaltung der Sperrklinke. Auf diese Weise ist der Beobachter in den Stand gesetzt, seine Aufmerksamkeit gänzlich ungeteilt dem Objekt zuwenden zu können. Der Kreuztisch ist übrigens jederzeit dadurch , daß man die Sperrklinke in die Mittelstellung bringt, in der üblichen Art zu verwenden. Die Firma E. Leitz in Wetzlar, von der auch die Zeichnung stammt, hat die Herstellung des Kreuztisches übernommen. [Eingegangen am 6. Februar 1908.] Über einen Objekttiscli mit auswechselbaren Tischplatten. Von Hans L. Heusner in Gieiäen. Hierzu eine Textabbildung. Die Tische der normalen Mikroskope werden meistenteils mit einer Platte aus mattem Hartgummi bedeckt. Legt mau auf diese ein schwach gefärbtes Präparat, so verschwindet dasselbe vollständig für das Auge , da sich die Konturen auf dem dunklen Untergrund nicht oder nur schwach ablieben. Es wäre daher oftmals wünschens- wert die dunkle Tischplatte gegen eine solche anderer Färbung auswechseln zu können. Unter gewöhnlichen Verhältnissen ist dieses jedoch nicht durchführbar, da die Platten auf dem Tische fest auf- geschraubt sind. Man kann sich zur Not damit behelfen auf der Platte ein Stück Fließpapier zu befestigen. Für ausgedehntere Arbeiten ist das aber sehr unzweckmäßig , da das Papier öfters XXV, 1. Heusner: Ein Objekttisch mit auswechselbaren Tischplatten. 63 erneuert werden muß. Verwendet man dazu noch einen beweglichen 01)jekttisch , so wird das Papier in kurzer Zeit abgerieben, sofern es überhaupt möglich ist, bei genau gearbeiteten Tischen eine Papier- lage einzuschieben. Ich habe mir daher mein Stativ A (von Leitz) so einrichten lassen, daß nach Abnahme des beweglichen Objekt- tisches die Hartgummiplatte , welche um etwaiges Verziehen zu ver- hindern auf einer besonderen Metallplatte aufgelegt ist, in einfachster Weise gegen eine mattweiße Milchglasplatte ausgewechselt werden kann. Diese Vorrichtung, die den Preis des Statives nur unwesent- lich erhöht, läßt sich unschwer an den meisten Stativen auch noch nachträglich anbringen und hat sich während eines nunmehr etwa vierjährigen Gebrauches gut bewährt. Wie aus der Abbildung er- sichtlich ist, werden die Platten in den vertieften Objekttisch ein- gelegt und sind, außer von der mittleren größeren Öffnung für die Beleuchtung, mit noch zwei kleineren Öffnungen durchbohrt, durch welche die Konusse für die Objektklammern hindurchgehen; auf diese Weise werden die Platten unverschieblich festgehalten. Man wird durch diese Vorrichtung in den Stand gesetzt, z. B. beim Betrachten größerer Reihen von Serienschnitten, unmittelbar 64 Ignatowsky: Ein neuer Spiegelkondensor. XXV, 1. vor dem Einstellen noch makroskopisch das Präparat zu kontrollieren und die gewünschte Stelle in die Höhe des Objektives zu bringen. Bei ungefärbten Präparaten wird man dagegen die Hartgummiplatte benutzen. Da beide Platten genau gleich dick sind, wird der Objekttisch in keiner Weise erhöht. Dieses ist besonders bei starker Vergröße- rung und Verwendung des Abbe sehen Beleuchtungsapparates von Bedeutung, gestattet aber auch etwaige Nebenapparate wie den be- weglichen Objekttisch ohne irgendwelche Abänderung zu benutzen. Geliefert wird die Vorrichtung von der Firma E, Leitz in Wetzlar. [Eingegangen am 28. Februar 1908.] Ein neuer Spiegelkondensor. Von W. V. Ignatowsky in Gießen. Hierzu zwei Textfiguren. In den letzten Jahren fand die sogenannte Dunkelfeldbeleuchtung vielfach besonderes Interesse und dementsprechend wurden von einigen Firmen z. B. Zeiss\ Reichert", Leitz ^ verschiedene Beleuchtungs- einrichtungen ausgeführt, welche zur Beobachtung im Dimkelfelde eingerichtet waren. Im folgenden möchte ich einen neuen Spiegelkondensor be- schreiben , der nach meinen Angaben von der Firma E. Leitz in Wetzlar schon seit Oktober vorigen Jahres ausgeführt wird. Bekanntlich beruht die Möglichkeit der Beobachtung im Dunkel- feld auf der Kontrastwirkung zwischen den leuchtenden Teilchen z. B. Bakterien und dem dunkeln Untergrund. Je mehr Details man 1) Diese Zeitschr. Bd. XXIV, 1907, p. 104. 2) Diese Zeitschr. Bd. XXIV, 1907, p. 233. 3j Diese Zeitschr. Bd. XXII, 1905, p. 114. XXV, 1. Ignatowsky: Ein neuer Hpiegelkondensor. 65 beobachten will, um so intensiver müssen die Teilchen beleuchtet werden , um genügend zerstreutes Licht liefern zu können. Man kann die Spiegelkondensoren oder andere Einrichtungen für üunkel- feldbeobachtung auffassen als Objektive, die die Lichtquelle an der- jenigen Stelle, wo sich das zu beobachtende Teilchen befindet, ab- bilden, und zwar mittels derjenigen Strahlen, welche nicht direkt in das beobachtende Objektiv gelangen können. Wir beobachten des- halb nur da zerstreutes Licht, wo sich Teilchen befinden, die sich optisch von dem umgebenden Medium unterscheiden ; das übrige Feld bleibt dunkel. Diejenigen Strahlen, welche die Abbildung der Lichtquelle be- werkstelligen, füllen, innerhalb des Kondensors, den Raum zwischen zwei Kegeln, welche gemein- same Achse und Spitze besitzen, aus. Die Apertur des inneren Kegels ist ein wenig größer als diejenige des beobachtenden Ob- jektivs, damit eben in dasselbe keine direkten Strahlen gelangen können. Je kleiner die zu beobach- tenden Teilchen sind, um so intensiver müssen dieselben be- leuchtet werden. Um dieses zu erzielen müssen 1) die Diffe- renzen der Aperturen zwischen dem äußeren und inneren Kegel möglichst groß sein , 2) muß das an der Spitze des Kegels befindliche Bild der Lichtquelle möglichst präzis sein, d. h. durch möglichst präzise Strahlenvereinigung zustande kommen und 3) möglichst frei von der sphärischen Differenz der Vergrößerung (Erfüllung der sogenannten Sinusbedingung) sein für alle zwischen den Kegeln verlaufende Strahlen, Was die chroma- tischen Fehler anbelangt, so fallen dieselben bei den Spiegelkonden- soren von selber weg, da hierbei die Strahlenvereinigung nicht durch Brechung, sondern durch Spiegelung erzielt wird. Den Forderungen 2) und 3) wird um so mehr Genüge geleistet werden können, je mehr spiegelnde Flächen vorhanden sind. Wie aus Figur 1 ersichtlich, besitzt der LEiTzsche Spiegel- kondensor zwei spiegelnde Flächen , eine innere und eine äußere. Dadurch erzielt man, wie gesagt, in P eine bessere Strahlenvereinigung, Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXV, 1. 5 1. 66 Ignatowsky: Ein neuer Spiegelkondensor. XXV, 1. als dies mit nur einer sphärischen Fläche möglich wäre. Die beleuchtenden Strahlen haben eine numer. Apertur von etwa 1"1 bis 1-45. Der Spiegelkondensor befindet sich in einer Fassung, welche mit einer Zentriervorrichtung versehen ist und an Stelle des ge- wöhnlichen Kondensors in das Mikroskopstativ von unten eingeführt werden kann. Der Spiegelkondensor wird außerdem in vereinfachter Art her- gestellt, und zwar in Form einer auf den Tisch des Mikroskops auflegbaren Platte (Fig. 2). Dadurch bedarf der Spiegelkondensor keiner besonderen Anpassung an ein Mikroskopstativ , sondern er kann ohne weiteres an jedem Stativ verwandt werden. Mittels des 2. auf der Figur 2 sichtbaren Hebels kann der Spiegelkondensor längs der Achse des Mikroskops in den nötigen Grenzen, d. h. entsprechend der Dicke der Objektträger, verschoben werden. Zum bequemeren Vergleich der einzelnen Kondensoren unter- einander seien hier die vorher in Punkt 2) und 3) beschriebenen Abweichungen in Prozenten der Brennweite ausgedrückt, was man machen kann, da wir, wie gesagt, die Spiegelkondensoren als Objek- tive auffassen können, bei welchen die Zentralstrahlen fehlen. Diese prozentualen Abweichungen lassen sich in folgender Tabelle zusammenfassen : Strahlenvereinigung Sinusbedingung Leitz 4 Prozent 8 Prozent Zeiss (Paraboloid) . . _ 15 „ Reichert (sphärischer Kondensor) .... 15 „ 15 „ XXV, 1. Ignatowsky: Ein neuer Spiegelkondensor. 67 Hierbei wurde angenommen, daß die Aperturen der beleuchten- den Strahlen bei allen drei Kondensoren gleich sind, und zwar zwischen 1"1 und 1'45 liegen. Für die ersten zwei Kondensoren stimmt diese Voraussetzung ungefähr , während bei dem Kondensor von Reichert die Dilferenz der Aperturen kleiner ist. Beobachtet man im Dunkelfeld mit starken Trockensystemen, so muß man bekanntlich ein dem Objekt entsprechend dickes Deck- glas anwenden oder eine Korrektion auf die Deckglasdicke ausführen. Außerdem tritt ein Lichtverlust infolge der Reflexionen an der Ober- fläche des Deckglases und an der Oberfläche der Frontlinse des Objektivs ein. Beide Übelstände fallen weg, sobald man mit Immer- sionssystemeu beobachtet. Hierbei müssen dieselben, um die direkten Strahlen nicht hinein zu lassen, entsprechend abgeblendet werden. Auch hier wie bei Trockensystemen ist die Anwendung eines Apo- chromaten, z. B. von 2 mm , einem Achromaten vorzuziehen, wegen der außerordentlichen Farbenempiindlichkeit bei derartigen Beob- achtungen. Die Beleuchtung mit dem Leitz sehen Kondensor in Verbin- dung mit einer Bogenlampe von 4 Ampere ist genügend intensiv, um die Herstellung von Momentaufnahmen lebender Bakterien zu ermöglichen. ^e' [Eingegangen am 26. April 1908.] 5* 68 Röthig: Vorrichtung z. lebenswarmen Fixieren d. Eileitereier. XXV, 1. Eine Vorrichtung zum lebenswarmen Fixieren und leichten Trans- portieren der Eileitereier der Vögel. Von Dr. Paul Röthig in Charlottenburg - Berlin. Hierzu zwei Textabbildungen. Für die Sammlung so zarten und schwer zu behandelnden Materiales , wie es die Eileitereier der Vögel sind , habe ich mir 1. seinerzeit von der hiesigen Firma Dr. Ron. Muencke einen Transport- kasteu bauen lassen, der sich in den ganzen Jahren, seitdem ich XXV, 1. Röthig: Vorrichtung z. lebenswarmen Fixieren d. Eileitereier. 69 ihn zum Sammeln meines embryologischen Materiales verwendet habe, durchaus bewährt hat. Man ist durch ihn in den Stand gesetzt, auf den Geflügelschlachthöfen die Eier unmittelbar nach dem Tode der Tiere noch lebenswarm zu fixieren und das Material leicht und schonend nach dem Laboratorium zu transportieren. Gefüllt ist der Kasten, von dem eine Zeichnung in ^/^ der natürlichen Größe in der beistehenden Abb. 1 wiedergegeben ist, mit einer Anzahl gewöhn- licher, durch einen Korken fest verschließbarer Wassergläser, in die je ein Eileiterei des Huhnes in der Fixierungsflüssigkeit Platz findet (Abb. 2). Der Kasten besteht aus zwei durch Scharniere miteinander verbundenen Etagen, von denen jede 2.5 Gläser faßt und die eventuell einzeln, jede für sich allein, transportiert werden können. Zu gleicher Zeit könnten also 50 Eileitereier der Hühner fixiert werden. Als Fixierungsflüssigkeit wandte ich meistens die in meinem Handbuch der embryologischen Technik (Wiesbaden 1904), p. 173, erwähnten beiden Gemische nach Nowack und Ger- hardt mit gutem Erfolge an. Die Einrichtung des Apparates wird sich ohne weiteres aus den Abbildungen 1 u. 2 ergeben. 2. [Eingegangen am 1. Februar 1908.] 70 Referate. XXV, 1. Referate. 1. Lehr- und Handbücher. Hager, H., Das Mikroskop und seine Anwendung. Hand- buch der praktischen Mikroskopie und Anleitung zu mikro- skopischen Untersuchungen. Nach dem Tode vollständig umgearbeitet und in Gemeinschaft mit Dr. 0. Appel, Dr. G. Brandes, Dr. Th. Lochte neu herausgegeben von Dr. Carl Mez. Zehnte , stark vermehrte Aufl. , 463 Figg. Berlin (Jul. Springer) 1908; 444 pp. Wir rühmten schon bei Besprechung der neunten Auflage^ die Vielseitigkeit des Buches. Mit der Mannigfaltigkeit seines Inhalts ist bei der neuen Auflage auch seine Verwendbarkeit noch weiter gefördert worden. Die neue Auflage bringt namentlich auch An- gaben über Mikrophotographie — mit weißem und mit ultraviolettem Licht — und widmet auch dem Ultramikroskop einige Seiten. Bei Durchsicht des speziellen Teiles, der eine sehr große Anzahl mikroskopischer Objekte bespricht und vorzüglich abbildet, sind uns zahlreiche Änderungen und Ergänzungen aufgefallen — z. B. in dem die Pilzkrankheiten der Kulturgewächse behandelnden Abschnitt, ferner in den Abschnitten „Die wichtigsten Wasserpilze", „Blutuntersuchung zum Zweck gesundheitspolizeilicher Maßnahmen", „Auswurf" u. a. Unberücksichtigt bleiben in dem Buche die Schädiger der Nadelhölzer und der Forstpflanzen überhaupt — nur die „grüne Tannenlaus" 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XXI, 1904, p. 325. XXV, 1. Referate. 71 wird genaunt ; vielleicht läßt sich in der nächsten Auflage des treff- lichen Buches , die gewiß nicht lange auf sich warten lassen wird, wenigstens die Schilderung der wichtigsten Koniferen bewohnenden Pilze noch einfügen. Bei Besprechung der „empfehlenswerten Mikroskopformen" war in der neunten Auflage ausschließlich von Seibert sehen Fabrikaten die Rede; die neue Auflage macht auch auf die Produkte der Leitz sehen Werkstätten aufmerksam, während ein Hinweis auf andere vortreff- liche deutsche Firmen — Zeiss, Winkel — noch fehlt. Der von Appel, verfaßte Abschnitt über Pflanzenkrankheiten ist auch separat erschienen. Küster {Halle a. S.). 2. Mikrophotographie und Projektion. Guieysse, A. , Platine oscillante de Nachet pour la microphotographie stereoscopique (C. R. Soc. Biol. Paris t. LXIII, 1907, no. 24, p. 18—19 av. 1 Fig.). Verf. macht darauf aufmerksam, daß die Idee, stereoskopische mikrophotographische Bilder herzustellen, indem man zuerst eine Photographie herstellt von einem Präparate , das in einem Sinne geneigt ist und darauf von demselben Präparate bei einer Neigung im entgegengesetzten Sinne, schon von Moitessier herrührt, der durch Nachet einen geeigneten Schaukeltisch herstellen ließ.^ Dieses Hilfs- mittel war in Vergessenheit geraten und neuerdings haben Quidor und Nachet^ ein Schaukelmikroskop zu demselben Zwecke konstruiert, bei dem das Präparat unbeweglich bleibt, während das Mikroskop seinen Platz verändert. Verf. hat nun die alte Idee wieder auf- gegriffen und durch Nachet den Schaukeltisch wieder herstellen lassen, den er iu seiner Arbeit abbildet. Der Tisch kann bei jedem Mikroskope angebracht werden, was als ein Vorteil gegenüber dem Mikroskope von Quidor und Nachet anzusehen ist. Schiefferdecker {Bonn). ^) Moitessier, La Photographie appUquee aux recherches micro- graphiques (Bailiiere, 1866). 2 Quidor, A. et Nachet, A., Sur an nouveau microscope et ses applications ä la micrographie stereoscopique (C. R. de l'Acad. d. sciences, 29 avril 1907). 72 Referate. XXV, 1. 3. Präparationsmethoden im allgemeinen. Schoorl , N. , Beiträge zur mikrochemischen Analyse (Zeitschr. f. analyt. Chemie Bd. XLVI, 1907, p. 658—671). Der Verf. empfiehlt im wesentlichen die mikrochemischen Metho- den von Behrens, hat aber eine Reihe von Ergänzungen und Ver- besserungen daran vorgenommen ; z. B. wird mit Recht betont , daß die Vermeidung von Trichtern, Filtern u. dgl., ferner die Vermeidung der wichtigen Reagentien Schwefelwasserstoff und Schwefelammonium, wie Behrens sie vornimmt , oft zu unnötigen Komplikationen und Einschränkungen führt. Der Verf. hat vielmehr einen systematischen Gang zur qualitativen Analyse von Gemischen ausgearbeitet, welcher die Hauptgruppen der qualitativen Makroanalyse beibehält, aber innerhalb dieser Gruppen die Nachweisung der einzelnen Elemente mit Hilfe des Mikroskops gestattet. In der Tat erscheint diese Me- thode naturgemäßer als der von Behrens angegebene systematische Gang zur qualitativen Trennung von Gemischen , welchen Behrens auf die Fällung der Chloride , Jodide , Karbonate und Oxalate ge- gründet hat. Die vom Verf. adoptierte Einteilung in Gruppen, innerhalb deren die Trennung mikrochemisch zu erfolgen hat, ist folgende: 1) Die in Wasser schwer löslichen Chloride von Silber, Queck- silber und Blei. 2) Die Sulfide von Arsen, Antimon und Zinn (aus der Schwefelammoniumlösung durch Salzsäure gefällt). 3) Die Nitrate von Blei, Wismut, Kupfer, Kadmium (durch Lösung ihrer Sulfide in Salpetersäure erhalten). 4) Das Sulfid von Quecksilber (welches als Rückstand beim Lösen der Gruppe 3 bleibt, aber noch Spuren von dieser sowie Schwefel enthalten kann). 5) Die Chloride von Nickel und Kobalt (aus den in kalter Salzsäure unlöslichen Sulfiden der Eisengruppe erhalten durch Behandlung mit Königwasser, Verjagen der überschüssigen Säure und Überführung in Chloride). 6) Die Hydroxyde von Eisen , Aluminium , Chrom. 7) Die als Lösung von letzteren sich trennenden Metalle Mangan und Zink. 8) Die Karbo- nate von Kalzium, Strontium, Barium. 9) Die Restgruppe Magnesium, Lithium, Kalium, Natrium. 10) Die unlöslichen Substanzen. E. Sommerfeldt {Tühmgeii). XXV, 1. Referate. 73 Biltz, W., Einige Versuche über ultramikroskopische Löslichkeitsbestimmung (Zeitschr. f. physik. Chemie Bd. LVIII, 1907, p. 288—292). Der Verf. hat die Benutzung-sweise des Siedentopp-Zsigmondy- schen Ultramikroskops für die Löslichkeitsbestimmung sehr schwer löslicher Substanzen ausgearbeitet und gefunden, daß in denjenigen Fällen , in welchen die Kristallisationsgeschwindigkeit der suspen- dierten Teilchen klein ist, die ultramikroskopische Methode sehr vor- teilhaft zur Löslichkeitsbestimmung verwandt werden kann, denn es existiert alsdann für die Konzentration ein scharfer Grenzwert, von dem ab in der Richtung der zunehmenden Verdünnung die Lösung leer ist, in der Richtung zunehmender Konzentration hingegen suspendierte Teilchen enthält. Wenn nun aber die Kristallisationsgeschwiudigkeit groß ist, findet man auch über den kritischen Wert hinaus über- sättigte teilcheufreie Lösungen, welche plötzlich den Übersättiguugs- zustand verlieren und alsdann sogleich relativ große Teilchen suspen- diert enthalten. Besonders die Löslichkeit von Silbersulfid hat der Verf. experimentell nach seiner Methode bestimmt. E. Sommerfeldt {Tübingeji). Gage, S. Ph., The method ofmaking modeis froni sheets of blotting paper (Americ. Journ. of Anat. vol. VII, 1907, no. 3; The anatom. Record no. 7, p. 166—169). Verf. beschreibt eine Methode, welche geeignet ist, die Wachs- platten der Born scheu Methode bei der Rekonstruktion zu ersetzen. Diese letzteren sind schwierig herzustellen. Verf. hat sich dicken Fließpapiers bedient, welches in Stärke von 1 mm, 0"5 mm, 0"77 mm und 0"9 mm käuflich zu haben ist. Verf. benutzt die Methode seit 1905 und derartige Modelle sind auf amerikanischen Kongressen schon mehrfach demonstriert worden. Um die Dicke der Lagen auszuprobieren , nimmt man einen Haufen von 40 übereinander ge- legten Stücken , die aus verschiedenen Blättern des Fließpapiers ausgeschnitten sind, und die durch ein Gummiband zusammengehalten werden. Ein Ende des so gebildeten Blockes wird in heißes Paraffin getaucht und mit den Fingern zusammengedrückt. Die Dicke dieses mit Paraffin behandelten Endes , dividiert durch die Zahl 40 der Blattstücke ergibt die Dicke des Papiers. Verf. teilt dann Näheres über die Umrechnung der Schnittdicke in die Papierdicke mit. Sind die Dicke des Papiers , die Größe des Modells und die Stärke der Vergrößerung festgestellt , so werden die Zeichnungen der Schnitte 74 Referate. XXV, 1. auf dem Fließpapiere mit Hilfe einer Camera lucida oder noch besser eines Projektionsmikroskopes ausgeführt. Eine oder mehrere Dupli- kate der Zeichnungen kann man leicht erhalten durch Verwendung von Kohlepapier und von dünnen Blättern über dem Fließpapier. Die Wachsplatten lassen sich nur schwierig schneiden. Diese Schwierig- keit wurde von E. L. Mark überwunden durch die Benutzung einer Nähmaschine mit einem elektrisch erhitzten Drahte als schneidendes Werkzeug (die Methode ist publiziert worden in The American Academy of art and sciences, March 1907, ferner in Science Bd. XXV, 1907, Anatomical Record, April 1907). Das Fließpapier kann, wenn die Zeichnungen klein sind , leicht mit Schere oder Messer geschnitten werden, sind die Zeichnungen groß und besonders, wenn das Modell so aufgebaut werden soll, daß jeder Schnitt durch die doppelte bis vierfache Dicke des Fließpapiers wiedergegeben wird, so kann man eine gewöhnliche Nähmaschine zum Schneiden benutzen. Stellt man die Stichregulierung auf den kleinsten Stich ein, so erhält mau fast einen gleichmäßigen Schnitt und kann die Stücke leicht voneinander trennen. Wird eine große Nähmaschinennadel meißelartig zugeschärft, so wird der Schnitt beträchtlich gleichmäßiger. Bei länger dauern- der oder besonders schwerer derartiger Arbeit verwendet man am besten einen elektrischen Maschinenmotor. Die nötige Übung erlangt man bald. Manche Details bei komplizierten Zeichnungen umschneidet man besser mit Schere oder Messer, nachdem die Hauptlinien durch die Maschine ausgeschnitten sind. Bei jedem Modell ist es sehr vorteilhaft, in bestimmten Zwischenräumen Schnitte besonders gefärbt hervortreten zu lassen. Fließpapier ist in einer größeren Anzahl von Farben (schwarz , rot , blau , rosa) leicht käuflich zu haben. Verf. hat bei den Modelleu jede zehnte Schicht von hellerer Farbe ge- nommen und jede hundertste schwarz; so konnte man schnell eine Zählung ausführen. Sind die Papierschnitte soweit vorbereitet, so legt man sie nach vorherbestimmten Richtungslinien aufeinander. Man kann sich leicht einen Leitapparat für das im Aufbaue begriffene Modell dadurch herstellen, daß man die Kontur, der man zu folgen hat, aus einem Blocke von 4 bis 5 Blättern Fließpapiers ausschneidet und auf ihr die Richtungslinien für jeden 10. oder 20. Schnitt mar- kiert. Die gefärbten 10 Platten müssen dann natürlich dem Abstände und der Richtung dieser Linien entsprechen. Nachdem das Modell im wesentlichen aufgebaut ist, geht man an die feinere Modellierung. Die Papierschichten verschieben sich leicht gegeneinander; um sie zu befestigen, benutzt man Stecknadeln oder Drahtstifte von ver- XXV, 1. Referate. 75 schiedener Größe , irgendein Kitt oder Leim erwies sich nicht als praktisch. Ist das Modell so ausgeführt, so entfernt man Uneben- heiten am besten mit der Schneide eines stumpfen Messers und glättet mit Sandpapier. Will man irgendwelche Zerlegungen des Modells vornehmen , um Bauverhältnisse im Innern zu zeigen , so tue man das zu dieser Zeit. Ebenso entferne man jetzt auch jene „Brücken"^ die man eventuell stehen gelassen hat , um abgetrennte Teile zu stützen. Schließlich wird das Modell in sich gefestigt und angestrichen mit heißem Paraffin, entweder durch Überstreichen mit einem Kamel- haarpinsel oder durch Eintauchen in das Paraffin, wobei der Über- schuß mittels eines heißen Instrumentes entfernt wird. Bei einem sehr großen Modelle kann man auch einen Thermokauter benutzen. Durch das Paraffin erlangt das Modell etwa die Festigkeit von Holz, ohne seine Leichtigkeit einzubüßen, um die Oberfläche des Modells zu färben, verwendet man am besten japanisches Fließpapier (Japa- nese bibulous paper ; das „lens paper" der Mikroskophändler) , das man in Wasserfarbe taucht und dann trocknet. Man kann hierzu irgendwelche in den Laboratorien verwandte Farben benutzen (Eosin, Pikrinsäure, Methylgrün, schwarze Tusche usw.). Das gefärbte „lens paper" schmiegt sich leicht der Oberfläche an und wird durch heißes Paraffin befestigt. Alle farbigen und zur Zählung dienenden Linien und die Feinheiten der Modellierung sind unter dem transparenten Papiere sichtbar. Wird das Modell nicht mehr direkt zur Arbeit verwendet , so kann es mit Ölfarben , die mit heißem Paraffin ge- mischt sind, bestrichen und so beliebig fein zurecht gemacht werden. Zerlegen kann man das Modell entweder mit Hilfe eines heißen Messers , das man in den Spalten zwischen den Blättern hinführt, oder mit Hilfe einer Säge, wenn man Schnitte ausführen will. Diese Fließpapiermodelle sind leicht und reinlich herzustellen , besitzen ein geringes Gewicht und sind dauerhaft; sie zerbrechen nicht leicht und können leicht verpackt und versendet werden. Schiefferdeclier {Bonn). Tröster, C. , Eine neue Mikroskopierlampe (Zentralbl. f. Bakteriol., Abt. 1, Orig. Bd. XLV, 1^07, H. 6, p. 574). Das Licht wird von der Lampe bis zum Mikroskopspiegel durch ein gerades, innen poliertes Metallrohr geleitet. Als Lichtquelle ge- nügt eiae GasglüWichttope. ^...^^^^ ^^^^^^ ^ ^ ^ 76 Keferate. XXV, 1. Sineif, A. , Ein vereinfachter Thermostat (Zentralbl. f. Bakteriol., Abt. 1, Orig. Bd. XLV, 1907, No. 2, p. 191). Verf. bedient sich eines Pappkastens ; unmittelbar oberhalb des Bodens wird durch eine Spalte, die an zwei gegenüberliegenden Wänden angebracht ist , ein Streifen Kesselblech gezogen ; letz- teres wird seitlich von einer Petroleumlampe angeheizt. Im Deckel der Pappschachtel steckt ein Thermometer. — Für manche Ver- suche mag dieser einfache Apparat wohl genügen. Küster {Halle a. S.). Roseubauch, E. , Über die Entwicklung der Schleim- zelle (Bull, de l'acad. des sciences j\ Cracovie ; Classe des Sciences mathematiques et natur. juin, 1907, p. 529 — 549 av. 3 pls.). Untersucht wurde die Submaxillardrüse der Schweine und die sogenannte Retroliugualdrüse (Ranvier) der Mäuseembryonen, sowie die Becherzellen des Darmepithels. Submaxillardrüseu der Schweine- embryonen wurden frisch in humor aqueus oder mit Zusatz von anderen Reageutien, an Gefrierschnitten und an fixierten Präparaten unter- sucht, die anderen nur an fixierten Präparaten. Gegenüber von Langley und E. Müller wird bemerkt, daß durch Einfrieren die 'Protoplasmastruktur nicht verändert wird. Zur Fixierung benutzte Verf. : 1) Eine Mischung von 2 Teilen gesättigter Sublimatlösung in physiologischer Kochsalzlösung und einem Teile Sprozentiger Salpeter- säure 5 2) 95 cc einer ähnlichen Sublimatlösung mit 5 cc Eisessig; 3) die Flüssigkeit von Carnoy (absoluter Alkohol 6 Teile, Chloroform 3 Teile, Eisessig 1 Teil). Obwohl alle diese Flüssigkeiten die Prä- parate gut fixieren , stimmt Verf. doch E. Müller darin bei , daß zur Darstellung der Granula sich am besten die Mischung von Sublimat mit Eisessig eignet. Die fixierten Präparate kamen dann durch Alkohol von 30, 50, 90, 96 Prozent, zweimal durch absoluten Alko- hol, dann durch ein Gemisch von absolutem Alkohol und Chloroform, dann zweimal durch reines Chloroform, dann durch ein Gemisch von Chloroform und Paraffin von 48 ^ Schmelzpunkt in reines Paraffin von 48 ^, dann in 52grädiges Paraffin, in dem sie nach zweimaligem Wechsel eingebettet wurden, Schnittserien von 3 bis 5 |U. dicken Schnitten. Färbung: 1) Eisenhämatoxylin (Heidenhain) , Mucikarmin , Thionin, Toluidinblau und Mucihämatein , Mayers Mucikarmin, nach seiner Vorschrift dargestellt, eignet sich am besten zum mikrochemischen Nachweise des Mucins. Schiefferdecker (Bonn). XXV, 1. Referate. 77 Schuberg, A., Untersuchungeu über Zellverbindungeii. IL Teil (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXVII, 1907, p. 551—602 m. 1 Fig. u. 4 Tfln.). Zur Untersuchung kamen im wesentlichen Larven von Siredon, Sahimandra und Bombiuator, die mit Rücksicht auf Verfassers Dahlia- färbung meist mit konzentrierter Sublimatlösung oder mit Sublimat- essigsäure fixiert wurden. Zur Färbung der kollagenen Fibrillen wurde vielfach die MALLORYSche Färbung benutzt (Beizen der mit Safranin vorgefärbten Schnitte in eiuprozentiger Lösung von Phosphor- molybdänsäure während einiger Minuten; Auswaschen in zweimal gewechseltem Wasser; Färben 2 Minuten oder länger in einem Ge- misch von Anilinblau 0'5, Orange G 2, Oxalsäure 2, Wasser 100; Auswaschen in Wasser; Überführen durch 95prozentigen Alkohol in Origanumöl ; Einschluß in Balsam), ferner die Weigert sehe Häma- toxylin-Eisen-Methode [vgl. diese Zeitschr. Bd. XXI, 1904, p. 2] mit Nachfärbung in einem Gemisch von Säurefuchsin und Pikrinsäure. Sehr gute Dienste leistete ferner die vom Verf. abgeänderte Modi- fikation Blochmanns der van Giesox sehen Methode, nach welcher die Schnitte der mit Boraxkarmin vorgefärbten Objekte mit einer 0*05- prozentigen Lösung von triphenylrosanilintrisulfosaurem Natron in gesättigter wässeriger Pikriusäurelösung nachgefärbt werden. Das triphenylrosanilintrisulfosaure Natron bildet, wie auch das von Bloch- MANN verwandte entsprechende Kalksalz einen der Bestandteile des Anilinblaus oder steht doch den unter diesem Namen in den Handel kommenden Farbstoffen sehr nahe. Man kann daher auch ziemlich ähnliche Färbung erzielen , wenn man in der oben erwähnten Vor- schrift das gewöhnliche Anilinblau als Ersatz nimmt. Je nach dem zu untersuchenden Objekt ist übrigens die Färbungsdauer wie der Prozentsatz des blauen Farbstoffes zu modifizieren. Zur Färbung der elastischen Fasern kam außer der sauren Orceinlösung nach Unna noch die Weigert sehe Fuchsin-Resorcin-Färbung und die ältere Unna sehe Dahlia- Methode zur Verwendung. Betreffs letzterer ließ sich durch entsprechende Versuche feststellen , daß sie ganz andere Färbung liefert als Verf. Dahlia- Methode zur Darstellung von Zell- verbiudungen. Allerdings ergab sich dabei, und zwar deutlicher als früher wegen günstigeren Materials (Proteus-Haut), daß letztere auch öfter elastische Fasern fingiert. Die Färbung ist dann allerdings keine sehr intensive und jedenfalls viel schwächer als jene des Zell- plasmas, besonders der Epithel- und Biudegewebszellen. Um elastische Fasern und Zellausläufer gleichzeitig darzustellen, wurden die Schnitte 78 Referate. XXV, 1. erst mit Orcein und dann mit Verf. Dablia- Methode gefärbt. Hier- bei zeigte sich, daß durch letztere nicht nur die Zellausläufer tingiert wurden, sondern auch die Orceinfärbung der elastischen Fasern eine recht bedeutende Verstärkung erfuhr, so daß die Unterscheidung von beiderlei Elementen nur schwer möglich war. Eine ähnliche, eben- falls sehr intensive Verstärkung der Orceinfärbung der elastischen Fasern ist aber auch durch Behandlung der Schnitte mit 0*5prozen- tiger wässeriger Toluidiublaulösung zu erreichen. In solchen Prä- paraten sind die elastischen Fasern tief dunkelblau mit einem braun- roten Stich, die Zellausläufer aber ungefärbt. Anderseits färben sich diese nur allein , oder wenigstens allein dunkel , wenn mau nur mit Dahlia ohne Orcein färbt. Wenn also auch die Kombination von Orcein und Dahlia in demselben Schnitt, die Unterscheidung von elastischen Fasern und Zellausläuferu erschwert, so ist dies doch leicht und sicher möglich, wenn man die Befunde an verschiedenen, einerseits mit Dahlia, anderseits mit Orcein-Toluidinblau behandelten Schnitten miteinander vergleicht. Zur Färbung der Zellen, insbeson- dere der feinen Ausläufer der Biudegewebszellen und ihrer Ver- bindungen mit den Epithelzellen der Epidermis bediente sich Verf. wieder in erster Linie der von ihm früher beschi-iebenen Dahlia- Methode (vgl. diese Zeitschr. Bd. XX, 1904, p. 309). Modifikationen wurden nur insofern vorgenommen , als häufiger eine schwächere Dahlia -Lösung (9 fache Verdünnung) und eine stärkere (2- bis 3pro- zentige) Brechweinsteinlösung zur Verwendung kam. Als wichtig wird betont , daß nach der Färbung sehr sorgfältig ausgewaschen werden muß , etwa eine halbe Stunde in fließendem Wasser , und daß die Brechweinsteinlösung öfter erneuert werden muß , da sie sehr bald verdirbt. Der Umstand, daß Eosinbehandlung vor der Dahliafärbung eine Beizwirkuug ausübt, läßt sich zur Erzielung einer etwas stärkeren Färbung benutzen ; man bringt zu diesem Zweck die Schnitte einfach für kurze Zeit in eine 0'02prozentige wässerige Eosinlösung. Zur Gegenfärbung der elastischen Fasern des Binde- gewebes ist nach Dahliafärbung Safranin (2 g in 150 cc absolutem Alkohol) gut geeignet. Die kollagenen Elemente des Bindegewebes werden dabei leuchtend rot, so daß die dunkelvioletten Zellen mit ihren Ausläufern sehr scharf hervortreten. Da übrigens auch andere basische Farben mit Tannin-Brechweinstein fixiert werden, läßt sich u. a. auch Methylgrün (0"5 Prozent in Wasser) und Methylviolett (0'02 Prozent in Wasser) an Stelle der Dahlialösung zu dem gleichen Zwecke verwenden. E. ScJioebel (Neapel). XXV, 1. Referate. 79 4. Präparationsmethoden für besondere Zwecke. A. Niedere Tiere» Saling, Th. , Zur Kenutuis der Entwicklung der Keim- drüsen von Tenebrio moIitorL. (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXVI, 1907, p. 238—309 m. 14 Figg. u. 2 Tfln.). Wie bei allen Insekten bereiteten auch hier Dotter und Chitin bei der Bearbeitung große technische Schwierigkeiten. Die leichte Verletzlichkeit der Eier macht es nötig dieselben zusammen mit den Wollstoffstücken, an denen sie abgelegt sind, in das Fixierungsgemisch zu bringen. Erst nach genügender Härtung in starkem Alkohol kann die Lospräparierung der Eier gefahrlos vorgenommen werden. Im Laufe der Entwicklung erhärten die Eihüllen so stark, daß selbst siedende Fixierungsgemische nicht rasch genug eindringen. Infolge- dessen stellen sich bei nicht genügender Vorsicht die verschieden- artigsten Deformationen des Eies ein. Als Fixierungsmittel gab vor allem ein Gemisch aus 56 Teilen konzentrierter Sublimatlösung, 40 Teilen 96prozeutigen Alkohol und 4 Teilen konzentrierter Salpeter- säure gute Resultate. Aus dem siedenden Gemisch kommen die Eier nach 2 Minuten langem Verweilen darin sofort in 90- oder 96pro- ^entigen Alkohol. Schwächere Alkohole sind zu vermeiden, da sie Quellung hervorrufen. Die Salpetersäure wirkt erweichend auf Ei- häute und Dotter. Weiter wurde unter anderem auch siedendes Formol, mit der 3fachen Menge destillierten Wassers verdünnt, ver- wendet. Hierin bleibt der Dotter geschmeidig. Osmiumgemische, wie Flemmings oder Hermanns Lösung in geschlossenem Reagenz- glas bis auf 80*^ C erhitzt, fixieren gut, haben aber den Nachteil, daß sie den Dotter schwärzen. Nachfolgendes Bleichen ist unerläß- lich. Ein Zusatz von Natriumjodat zum Fixierungsgemisch wirkt übrigens der Schwärzung recht kräftig entgegen. Der großen Sprödig- keit des Dotters wegen erfolgte die Einbettung der Eier in Hoff- manns Nelkenölkollodium (vgl. diese Zeitschr. Bd. XV, 1899, p. 314ff.). Die Eier wurden aber nicht nur 5 Minuten, sondern eine Stunde im Paraffin belassen, wodurch eine bessere Schneidbarkeit des Dotters erzielt wird. 80 Referate. XXV, 1. Gefärbt wurden die Eier in toto, meist mit Hämalaun, das be- sonders deshalb zu empfehlen ist, weil es nur das embryonale Ge- webe tingiert, nicht aber Fett und Dotter. Empfehlenswert ist eine Nachfärbung der Schnitte mit Orange G, und zwar ist eine Orange- alaunlösung besser als eine rein wässerige Lösung. Verf. löste in 2prozeutigem Alaunwasser Orange G bis zur Sättigung und verdünnte 8 cc dieser Stammlösung mit 50 cc 2prozentiger Alauulösung. Bei den Objekten zum Studium der postembryonalen Entwick- lung ergaben sich noch größere technische Schwierigkeiten , indem die besonders bei den Larven stark entwickelte Chitinbedeckung das Mikrotomieren geradezu unmöglich macht. Nach mehreren Versuchen erhielt Verf. mit folgender Methode noch die brauchbarsten Resultate : Die Mehlwürmer werden lebend in ein Reagenzglas mit siedender, frisch zubereiteter Eau de Labarraque geworfen und darin je nach Größe verschieden lange gekocht (ausgewachsene Würmer etwa 5 Minuten). Hauptsache ist auf den richtigen Zeitpunkt zu achten, wenn das Kochen unterbrochen werden muß, damit die Mazerations- flüssigkeit nicht in das Körperinnere eindringt. Bei richtiger An- wendung dieses Mittels bleibt nicht nur die Lagerung der Organe erhalten, sondern auch die histologische Erhaltung ist befriedigend. Nach dem Entchitinierungsprozeß wird das Objekt gehörig gewässert, am besten in warmem destillierten Wasser, und dann erst in Alkohol überführt. Eingebettet wurde in Paraffin oder in HoFFMANNSches NelkeuölkoUodium, gefärbt mit Hämalaun-Orauge. In gleicher Weise wurden auch Puppen und junge Imagines behandelt, nur daß bei diesen die Vorbehandlung mit Eau de Labar- raque meist nicht nötig wurde. Dann fand die Fixierung einfach durch heißes Wasser statt oder durch das oben erwähnte Sublimat- Alkohol -Salpetersäuregemisch, in dem natürlich ein längeres Ver- weilen erforderlich war, als bei den Eiern. Den Larven, Puppen und Käfern entnommene Genitaldrüseu wurden kalt fixiert, entweder in Flemming scher Flüssigkeit oder in Sublimat -Alkohol -Eisessig. E. Schoebcl (Neapel). Hamburger, C, Das Männchen von Lacinularia socialis Ehrbg. (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXVI, 1907, p. 625—643 m. 3 Figg. u. 1 Tfl.). Untersucht wurden lebende Tiere, ferner in toto präparierte und in Schnittserien zerlegte. Die immer notwendige Betäubung wurde nach RoussELET vorgenommen, indem dem die Tiere enthaltenden XXV, 1. Referate. 81 Wasser tropfenweise eine Mischung von 3 Teilen 2prozentiger Kokain- lösung, einem Teil 90prozentigem Alkohol und 6 Teilen Wasser so lange zugesetzt wurden, bis die Cilien zu schlagen aufhörten. Fixiert Avurden dann die betäubten Tiere in Sublimat-Alkohol oder in Sublimat allein. Immer muß aber vorher das Kokain erst kurz ausgewaschen werden, um Niederschläge zu vermeiden. Die Färbung geschah mit Borax- karmin, ferner nach Blockmaxn [moditizierte van GiEsoxsche Färbung] oder Malory [Safranin, Phosphormolybdänsäure, Anilinblau, Orange- Oxalsäure] oder schließlich mit Heidexhains Eisenhämatoxylin teils mit, teils ohne Nachfärbung. E. Schoebel (Neapel). KÖliler , A. , Untersuchungen über das v a r i u m der Hemipteren (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXVII, 1907, p. 337— .381 m. 2 Tfln.). Die Ovarien wurden in physiologischer Kochsalzlösung heraus- präpariert und möglichst schnell in Hermanx scher Flüssigkeit fixiert. Brauchbare Resultate gab auch das Zenker sehe Gemisch. Eingebettet wurde im allgemeinen in Paraffin. Bei Objekten , die eine Orien- tierung wünschenswert erscheinen ließen, wurde dagegen Nelkenöl- kollodium verwandt. Um das Splittern des Dotters nach Möglichkeit zu vermeiden, wurde die Schnittdäche nach jedem Schnitt mit Mastix- lösung bepinselt. Als hinderlich beim Schneiden erwies sich fast ausschließlich der Dotter , nicht das Ohorion. Alle Versuche , den Dotter zu erweichen, blieben mehr oder weniger resultatlos. Gefärbt wurden die Schnitte meist mit Eisenhämatoxylin. Für die Chorion- bildung zeigte sich aber auch Färbung mit Thionin, Pikronigrosin, Safranin oder Pikrinsäure geeignet. E. Schoebel (Neapel). DUrken, B., Die Tracheenkiemenmuskulatur der Ephe- meriden unter Berücksichtigung der Morpho- logie des Insekten flügels (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXVII, 1907, p. 435—550 m. 30 Figg. u. 3 Tfln.). Der Versuch, Ephemeridenlarven im Aquarium aufzuziehen, war nur von geringem Erfolg begleitet. Es schlüpften wohl eine Reihe von Imagines resp. Subimagines aus, aber es gelang nicht, die Nymphen längere Zeit am Leben zu erhalten. Da der Transport der lebenden Nymphen wegen ihrer Empfindlichkeit große Schwierigkeiten bereitet, wurden die Tiere in der Regel am Fangort in SOprozentigem Alkohol abgetötet und in Alkohol oder schwacher Formollösung aufbewahrt. 'ö Das Absterben im Alkohol erfolgt sehr rasch. Für die anatomische Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXV, 1. 6 g2 Referate. XXV, 1. Untersuchung erwies sieb diese einfache Konservierungsmethotle als ausreichend, aber auch für einige gelegentliche, histologische Beob- achtungen war das Material brauchbar. Immer wurden die Unter- suchungen mit Beobachtungen des lebenden Objektes begonnen , um namentlich über die Bewegungsart der Tracheeukiemen Aufschluß zu erhalten. Zum Studium der Skelettverhältnisse wurden durch Mazerieren in 15- bis 20prozentiger Kalilauge von den in der Mediau- ebene halbierten Tieren Chitiupräparate hergestellt. Dabei ist große Vorsicht geboten ; namentlich ist Kochen in der Lauge zu vermeiden, ebenso alles Schütteln oder Anfassen mit Pinzetten usw. Die Ob- jekte müssen unter Umständen bis zu 14 Tagen in der Kalilauge belassen werden. Nach sorgfältigem Auswaschen wurden die Chitiu- skelette gefärbt und in Kanadabalsam eingeschlossen, w^obei das Deckglas derart gestützt wurde, daß die Objekte ihre natürliche Form nicht veränderten. Vom Abdomen brauchbare Chitinskelette herzustellen gelang nur bei Nymphen. Für die Untersuchung der Muskulatur kamen gefärbte und in Balsam eingeschlossene Halbpräparate des ganzen Objektes (Nymphe und Imago) zur Verwendung. Bei Nymphen waren des stark ge- füllten Darmes wegen aber nur wenig gute Präparate zu erzielen. Männliche Imagines lieferten wenigstens vom Thorax einigermaßen brauchbare Präparate, immer sind aber nur die gröbsten Muskelzüge festzustellen. Deshalb war . zum Studium des Muskelverlaufes auch die Schnittmethode unerläßlich. Für den Thorax sind Frontal- und Querschnitte zu empfehlen , für das Abdomen außerdem Sagittal- schnitte. Gute Schnitte sind aber nicht leicht zu erhalten, fast aus- geschlossen sind sie bei weiblichen Tieren, wegen der großen Anzahl der recht harten Eier. Im allgemeinen gelingen Längsschnitte besser -als Querschnitte. Zur genauen Feststellung der Muskelansätze dienten außerdem Rekonstruktionen des Meso- und Metathorax. Als Färbemittel kam bei Ganzpräparaten für Chitin und Musku- latur Pikrinsäure zur VerAvendung; ferner für Chitinpräparate noch Eosin und Triacidgemisch nach Ehrlich. Die Schnitte wurden mit Hämatoxylin - Pikrinsäure , Hämatoxylin - Eosin oder mit Triacid gefärbt. Zur anatomischen Untersuchung ist mäßige Überfärbung der Schnitte eher ein Vorteil als ein Nachteil. E. Schoebel (Neapel). XXV, 1. Referate. 83 Heiidersoii , W. D. , Zur Kenntnis der Spermatogenese von Dytiscus niarginalis L. , nebst einigen Be- merkungen über den Xucleolus (Zeitschr. f. wiss, Zool. Bd. LXXXVII, 1907, p. 644—684 m. 5 Figg. u. 2 Tfln.). Für gute Präparate ist rasches Herauspräparieren der Geschlechts- organe , aber nicht unter physiologischer Kochsalzlösung , notwendig. Zur Fixierung ist außer Zenker scher Flüssigkeit vor allem das von Petrunkewitsch modifizierte GiLsoxsche Sublimatgemisch bei einer 24stündigen Einwirkung zu empfehlen. Eingebettet wurde in Paraffin, in welches nach der üblichen Behandlung mit Jodalkohol, den ver- schiedenen Alkoholen steigender Konzentration und Durchträukung mit Zederholzöl die Objekte direkt gebracht werden. Diese Methode hat den Vorteil, daß die Objekte nicht brüchig werden. Die zu schneidenden abdominalen Segmente wurden des Chitins wegen in folgender Weise behandelt : Sie wurden zuerst in üblicher Weise in Celloidin eingebettet und dann die Celloidinblöcke für 12 Stunden in TOprozentigen Alkohol, dann für 6 Stunden in 90prozentigen gebracht, schließlich je auf wenige Stunden der Reihe nach in ein Gemisch von ■^/g Origauumöl und ^/g 90prozentigen Alkohol, in reines Origanumöl, in ein Gemisch von -"-/g Xylol und '/o Origanumöl , in reines Xylol, in Xylol-Paraffin aa und schließlich in reines Paraffin. Zur Färbung wurde die HEioEXHAixsche Eisenhämatoxylin-Methode nach Vorbehand- lung mit Bordeaux- oder Kongorot angewandt oder Böhmer sches Hämatoxylin kombiniert teils mit Eosin, teils mit Pikrokarmin. Zur Kontrolle wurden noch Boraxkarmin- und Bleu de Lyon - Färbungen angefertigt und Hämatoxylin -Pikrokarmin -Präparate mit Eiseuhäma- toxylin umgefärbt. E. Schoehel {Neapel). Pesta, 0., Die Metamorphose von Mytilicola intesti- nalis Steuer (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXVHI, 1907, p. 78 — 98 m. 1 Tfl.). Um die Parasiten aus dem Darm zu erhalten, empfiehlt es sich diesen zunächst zusammen mit der Leber aus der Muschel heraus- zuschneiden und in eine größere flache Glasschale mit Seewasser zu legen. Während dann die freiliegenden Darmteile leicht mit einer Schere aufgeschnitten werden können, erfordert die Leberregion sorg- fältiges Zerzupfen. Den nun leicht aufzufindenden Weibchen werden die Eisäcke abgeschnitten , diese in kleinere Glasaquarien gegeben und, gut zugedeckt, sich überlassen. Je nach dem Reifezustand der 6* 84 Referate. XXV, 1. Eisäcke kommen mehr oder minder rasch die ersten Larven an die Oberfläche, welche sich zufolge ihres positiven Heliotropismus an der dem Fenster zugekehrten Glasseite ansammeln. Spätere Entwicklungs- stadien verlieren den Heliotropismus und müssen dann einzeln aus dem Gefäß mit einer Pipette gefischt werden. Neben der unerläß- lichen Untersuchung der lebenden Objekte sind zum Studium auch fixierte Totalpräparate nötig. Sublimatfixierung mit erwärmter Lösung, Färbung mit stark verdünntem alkoholischen Hämatoxylin, Differen- zierung in Salzsäure -Alkohol, Überführung mittels der Senkmethode in Nelkenöl , Einschluß in Balsam , liefert solche in befriedigender Qualität. Bei der Untersuchung älterer Stadien empfiehlt sich für gewisse Zwecke, z. B. zur Feststellung von Segmentgrenzen und Borsten, die vorsichtige Behandlung der fixierten Objekte mit Kali- lauere. •o^ E. Sclioebel {Neapel). Philiptsclienko , J. , Beiträge zur Kenntnis der Aptery- goten. 1. Über die exkretorischen und phago- c y t ä r e n Organe von C t e n o 1 e p i s m a 1 i n e a t a F. (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXVHI, 1907, p. 99—116 m. 1 Tfl.). Zur Untersuchung der exkretorischen und phagocytären Organe wurden physiologische Injektionen mit ammoniakalischem Karmin, mit Tusche und mit Indigokarmin ausgeführt. Nach den beiden zuerst genannten Injektionssubstanzen wurde mit Sublimat-Essigsäure, nach der letzteren mit absolutem Alkohol fixiert. Zur Untersuchung des Fettkörpers wurde das Material nach Abtötung in kochendem Wasser mit Osmiumsäure fixiert. j^ Schoehel {Neapel). Stauffaclier, H., Zur Kenntnis der Phylloxera vastatrix (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXVHI, 1907, p. 131—152 m. 5 Figg. u. 1 Tfl.). Zur Fixierung findet Verf. Flüssigkeiten, die keinen Alkohol enthalten, ungeeignet, weil sie die Tiere nur schwer benetzen. Mit Vorteil wurde Apatiiys Sublimatalkohol (2prozentige Lösung von Sublimat in 40prozentigem Alkohol mit 5 Prozent Essigsäure) ver- wendet. Zur Färbung leistete Hämatoxylin gute Dienste. E. Schoehel {Neapel). XXV, 1. Referate. 85 Nowikoff, M., Über d i e R ü c k e n s i ii n e s o r g a n e der P 1 a c o - p h r e 11 nebst einigen Bemerkungen über die Schale derselben (Zeitscbr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXVIII, 1907, p. 154—186 m. 9 Figg. u. 2 THn.). Das in unbekannter Weise fixierte , dem Verf. zur Verfügung gestellte Material wurde zum Entkalken der Schale mehrere Tage mit einem Gemisch von Salpetersäure und TOprozentigem Alkohol (1 : 100) behandelt. Zur Difierenzierung der verschiedenartigen Zellen und zwischen Bindegewebs- und Nervenfasern wurde die MALLORYSche Färbung verwendet (vgl. diese Zeitschr. Bd. XVIII, 1901, p. 175), und zwar zweckmäßig kombiniert mit einer Boraxkarminvorfärbung. Zum Studium feinerer histologischer Details wurden die Objekte ent- weder mit Eisenhämatoxylin oder mit Osmiumsäure behandelt. E. Schoebel {Neapel). Hofsteil , N. Y. , Studien über TurbeUarien aus dem Bern er Oberland (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXV, 1907, p. 391—654 m. 8 Figg. u. 6 Tfln.). Zunächst wurden immer frische Quetsch -Präparate untersucht und Verf. hält bei gewissenhafter Anwendung diese Methode in den meisten Fällen zur sicheren Identifizierung der Arten uud zur Auf- stellung neuer Species für hinreichend. Zum genaueren Studium des anatomischen Baues wurde dann aber weiter die Schnittmethode heran- gezogen. Zum Fixieren benutzte Verf. ausschließlich heiße Sublimat- lösung, meist das sogen. Lang sehe Gemisch. [Verf. gibt nicht au, welche der von Lang angegebeneu Flüssigkeiten zur Verwendung kamen; zuerst empfahl Lang ein Gemisch von Wasser 100 cc, Koch- salz 6 bis 10 g, Essigsäure 6 bis 8 g, Sublimat 3 bis 12 g eventuell mit Zusatz von 0"5 g Alaun, später konzentrierte Lösung von Sublimat in Pikrinschwefelsäure , der 5 Prozent Essigsäure zugesetzt war.] Die Schnitte wurden entweder mit Ehrlichs Hämatoxylin uud Eosin oder mit Heidenhains Eisenhämatoxylin und Nachbehandlung in Eosin oder ausnahmsweise in Orange G, Fuchsin S oder Pikrinsäure tingiert. E. Schoebel (Neapel). Martini, E., Über Subcuticula und Seitenfelder einiger Nematoden II. (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXVI, 1907, p. 1—54 m. 2 Figg. u. 3 Tfln.). Zur Untersuchung dienten Pseudalius minor aus Phocaena com- munis, Nematoxys ornatus uud Rhabditis nigrovenosa aus Rana. Die 86 Referate. XXV, 1. Embryonen von Pseudalius minor, die fast jedes "Weibchen in größerer Menge enthielt, ließen sich bei der Durchlässigkeit ihrer Eihüllen mit allen angewandten Fixierungsflüssigkeiten leicht und wohl auch ohne schädliche Veränderung der Struktur fixieren. Zur Fixierung wurden in erster Linie Sublimat, Sublimat-Essigsäure, ferner Sublimat- Osmium- säure, FLEMMiNGSche Mischuug, Pikrinessigsäure, endlich Goldchlorid verwendet. Auch in den in toto mit Sublimat oder Sublimat-Essig- säure fixierten Weibchen waren die Embrvonen gut erhalten. Zur Herstellung von Totalpräparaten wurden bei großen Nematoden der Uterus , bei kleinen die ganzen Tiere in einer Spur physiologischer Kochsalzlösung auf dem Deckgläschen möglichst fein zerzupft, die Fragmente gleichmäßig über das Gläschen verteilt und dasselbe dann , wenn an den Rändern des Präparates Eintrocknung sich eben zu zeigen beginnt, mit der Objektseite nach unten auf die Fixie- rungsflüssigkeit fallen gelassen. Es gerinnen dann genug Eiweiß- bestandteile, um die Mehrzahl, besonders die isoliert liegenden Em- bryonen am Glase zu befestigen. Diese Befestigung beweist sich auch bei der Überführung in öOprozentigen Alkohol als dauerhaft. Wie die Fixierung werden auch die weiteren Prozeduren, Färben usw. auf den betreffenden Flüssigkeiten vorgenommen. Erst das in Xylol aufgehellte Objekt kommt mit ein paar Haaren gestützt auf den mit Balsam versehenen Objektträger. Eine Anzahl Objekte gehen bei solcher Behandlung zwar zusammen mit abschwimmenden größeren Stücken von Leibeswaud oder Uterus verloren, was aber keinen Nach- teil, sondern für die Klarheit des Präparats geradezu einen Vorteil bedeutet. Man entfernt sogar am besten größere Gewebsteile noch absichtlich. Auf solche Weise hergestellten Präparaten fehlt natür- lich die Rollbarkeit der nach dem Boveri sehen Verfahren hergestellten, was aber bei den interessierenden Stadien der in Frage kommenden Untersuchung ohne wesentlichen Belang ist, da doch genügend Objekte in allen Stadien und in allen Orientierungen vorhanden sind. Selbst- verständlich läßt sich die Fixierung auch auf dem Objektträger vor- nehmen , indem man ihn mit der Ausstrichseite nach unten etwa 3 Minuten auf die Fixieruugsflüssigkeit hält, dann umdreht, vor- sichtig untertaucht und auf den Boden des Schälchens mit der Fixie- rungsflüssigkeit legt. Nach genügender Fixierung läßt sich dann der Objektträger wie ein mit Schnitten beklebter weiter behan- deln. Die Stütze des aufzulegenden Deckglases muß natürlich sehr dünn genommen werden, wenn man bei der Untersuchung starke Immersionssysteme benützen will. Vielfach können auch Trümmer XXV, 1. Referate. 87 des mlitterliclien Organismus den Schutz der Embryonen vor dem Druck des Deckglases besorgen. Die Hauptschwierigkeit, die Pseu- dalius minor bei der Untersuchung darbietet, ist die wenig aus- gesprochene Differenzierung der Kerne und Zellen für die einzelnen Organe, die sich besonders an Totalpräparaten geltend macht. Auch die Zellgrenzen sind kaum mit der wünschenswerten Deutlichkeit zur Anschauung zu bringen. Alaunkarminfärbung ließ aber wenigstens einiges erkennen. Zur Schnittfärbung kam außer Alaunkarmin Häm- alaun und Chlorgold zur Verwendung. So gute Resultate wie letztere Methode in bezug auf manche histologische Einzelheiten bei Schnitten durch erwachsene Nematoden gibt, so wenig befriedigen ihre Leistungen bei Embryonen, besonders wegen häufig auftretender ungemein stören- der Niederschläge. Die beste Schnittfärbung ergab entschieden Häm- alaun. Über die Technik bei der Untersuchung von Nematoxys ornatus ist nichts Besonderes zu erwähnen. Bei Rhabditis nigro- venosa gibt Sublimatfixierung und Hämalaunfärbung für Totalpräparate gute Resultate. Auf Schnitten zeigen mit Pikrinessigsäure fixierte Objekte die Zellgrenzen deutlich , oft aber die Kerne wenig gut. Sublimatfixierung gibt gute Kerne, aber sehr schlechte Zellgrenzen. Im allgemeinen stört bei der Untersuchung von Rhabditis nigrovenosa die schwer durchlässige Eihülle recht empfindlich. E. Schoebel {Neapel). Jaiiicki, C. T. , Über die Embryonalentwicklung von Taenia serrata Goeze (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXVII, 1907, p. 685—724 m. 3 Figg. u. 2 Tfln.). Die Untersuchungen wurden fast ausschließlich an Schnittpräpa- raten ausgeführt, da bei der Kleinheit der Eier und ihrer massenhaften Ansammhing in jedem Uterus genügend Garantie vorliegt, daß der so zu gewinnende Einblick in die Entwicklungsvorgänge ein voll- ständiger ist. Die besten Präparate gab Fixierung mit Flemming- scher Flüssigkeit und Färbung mit Delafields Hämatoxylin. E. Schoebel {Neapel). Eisler, E., Deckel und Brutpflege bei Spirorbis (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXVII, 1907, p. 603 — 643 m. 13 Figg. u. 1 Tfl.). Die Untersuchung wurde im wesentlichen teils am lebenden Objekt , teils an Totalpräparaten , die mit Hämatein , Boraxkarmin oder Alaunkarmin tiugiert waren, angestellt, in beiden Fällen nach 88 Referate. XXV, 1. Entfernung der Wohnröhre. Teilweise wurden auch die kalkigeu Teile des Operculums entfernt , und zwar am besten dadurch , daß die Objekte in FLEMMixGScher Chrom - Osmium - Essigsäure fixiert wnirden, wobei gleichzeitig eine genügende Eutkalkung erhalten wird. Ergänzt wurden diese Beobachtungen an Schnittpräparaten von Osmiummaterial. Wenu der Deckel viel Kalk enthielt, mußte iu Flemmixg scher Flüssigkeit entkalkt werden. Gefärbt wurden die Schnitte mit Eosin oder mit Heidenhains Eisenhämatoxylin. E. Schoebel {Neapel). B. Wirheitiere. Loewit, 31., Über die Membran und die Innenkörper der S ä u g e t i e r e r y t h r c y t e n. Ein Beitrag zur Entstehung und zum Untergange der roten Blut- körperchen (Beitr. zur pathol. Anat. und zur allgem. Pathol. Bd. XLII, 1907, H. 3, p. 559—605 m. 1 Tfl.). Verf. macht auf eine einfache Färbungsmethode aufmerksam, die am fixierten Blute von Säugetieren und Menschen die Darstellung der Erythrocytenmembrau , seiner Ansicht nach, in unzweifelhafter Weise gestattet. Die gut ausgestrichenen und lufttrockenen Präpa- rate kommen möglichst frisch (einige Wochen alte, lufttrockene Präpa- rate ergeben bei nachträglicher Färbung im Vergleiche mit frischen weniger gute, manchmal sogar ausbleibende Membranfärbungen) so- fort in eine methylalkoholische Farblösung; es kann zur Darstellung der Membran sowohl Orange G, Säurefuchsin, wie auch Aurantia verwendet werden, während Eosin (extra B. A. Höchst) sich für diesen Zweck als unbrauchbar erwies. Eine vorhergehende Erwärmung des Präparates ist überflüssig und sogar schädlich, indessen kann das lufttrockene Präparat immerhin zwei- bis dreimal durch den unteren, weniger warmen Teil der Bunseuflamme ohne jede Beein- trächtigung hindurchgezogen Averden. Dagegen genügt ein drei bis viermaliges Durchziehen des lufttrockenen Präparates durch die Spitze der Bunseuflamme , um die nachträgliche histologische Darstellung der Membran unmöglich zu macheu. Die methylalkoholische Farb- lösung bestand stets aus 0*5 g des Farbstoffes auf 90 cc Methyl- alkohol; am meisten zu empfehlen sind Fuchsin S und Orange G. Aurantia gibt leicht Veranlassung zu Fällungen und Netzbildungen XXV, 1. Referate. 89 in den roten Blutkörperchen, Orange nur sehr selten. Dieser letztere Farbstoff ergibt, bei nachträglicher Färbung mit Toluidinblau , sehr dunkle und klare Membranfärbungen. P^uchsin S begünstigt die Membranfärbung schon in stark verdünntem Zustande : 2 Tropfen einer solchen Lösung als Zusatz zu 0*5 cc einer methylalkoholischen Eosinlösung genügen zur nachträglichen Darstellung der Erythrocyten- membran, während die Eosinlösung allein unwirksam ist. In der jeweilig verwendeten methylalkoholischen Farblösung verbleibt das Präparat 4 bis 8 Minuten und wird dann sofort in fließenden Methyl- alkohol rasch, aber gründlich abgespült uud zwischen Filtrierpapier getrocknet. In diesen sauren Farblösungen tritt eine Membranfärbung an den roten Blutkörperchen nicht ein, die Vorfärbung ist aber not- wendig, damit bei der nachträglichen Behandlung mit den basischen Farben die Membran hervortritt. Als basische Farbstoffe eignen sich sehr gut: Toluidinblau (chlorzinkfrei, Grübler) oder Thionin (Mühl- heim) oder Methylenblau (Puriss. medic. Höchst), alle in einprozen- tiger, wässeriger Lösung. Auf die wässerige Farblösung werden die vollständig getrockneten, vorgefärbten Deckgläschen mit der Schicht- seite nach unten gelegt und verbleiben auf der Lösung schwimmend 3 bis 5 Sekunden, Hierauf möglichst schnelles und kurzes Abspülen in Leitungswasser, ebenso schnelles Trocknen zwischen Fließpapier, Einschluß in Balsam. Eine etwas länger dauernde Wassereinwirkung schädigt die Darstellung der Erythrocytenmembran; Verf. verfährt daher in der Regel so, daß die aus der basischen Farblösung ent- nommenen Deckgläschen sofort zwischen Fließpapier völlig abgetrocknet werden und dann erst in einer bereitstehenden Schale mit Wasser mehrere Male abgeschwenkt und von neuem zwischen Fließpapier abgetrocknet werden. Auf diese Weise kann man völlig klare und von Farbstoffniederschlägeu freie Präparate erhalten. Schiefferdeeker {Bonn). Pollitzer, H., Beiträge zur Morphologie und Biologie der neutrophilen Leukocyten (Zeitschr. für Heilk. Bd. XXVIII, 1907, H. 10, p. 239—295 m. 1 Tfl.]. Verf. hebt hervor, daß bei hämatologischen Untersuchungen die Technik eine hervorragende Rolle spielt, da alle feineren analytischen Criterieu in einem mangelhaft angefertigten Blutpräparate versagen. Es scheint indessen, daß der Wert dieser Technik besonders seitens der Histo- logen unterschätzt wird. Verf. ist der Ansicht, daß die Koch-Ehrlich sehe Technik des Strichpräparates nur in jahrelanger täglicher Übung an 90 ■ Referate. XXY, 1. normalen und pathologischen Objekten erlangt werden kann. Die Behandlung , die ein normales Blut erfordert , ist eine ganz andere als jene, die das eingedickte Blut eines fiebernden Pneumonikers oder das wasserdünne einer schweren Anämie verlangt. Hat man einmal seine Technik allen Anforderungen, die die wechselnde Beschaffen- heit des Blutes stellt , angepaßt , dann gelingt es , abgesehen von extremen Fällen, stets, Präparate herzustellen, in denen die Zellen in sehr vollkommener Weise konserviert sind. Auch in wohlkonser- vierten Präparaten finden sich am Rande stets eine Anzahl von mechanisch geschädigten Zellen. Nach Verf. ist die gut ausgeführte Technik des Strichpräparates jeder anderen histologischen Konser- vierungs- und Präparationsmethode ebenbürtig. Verf. verspricht dann eingehender die Vorgänge bei der Anfertigung des Strichpräparates. Er hat im Wesentlichen mit der LsiSHMANSchen Modifikation der RoMANOwsKvmethode gefärbt. Sie erlaubt eine Kernfärbung, die dem Hämatoxylin an Feinheit und Klarheit nichts nachgibt, an Kraft und Mannigfaltigkeit der Töne überlegen erscheint. Gleichzeitig färbt sie sämtliche Granulationen, das Protoplasma in einer vom Kerne ditferenten Farbe , so daß sie im ganzen als eine sehr vollkommene Methode zu bezeichnen ist. Trotzdem wird sie nicht recht anerkannt. Die Ursache des Mißlingeus von Leishman sehen Präparaten wird meist an falscher Stelle , namentlich in der Farblösung , vermutet. Wenn eine Lösung , die mit tadellos reinem , vorher destilliertem Methyl- alkohol hergestellt ist, und die während der Bereitung nur mit voll- kommen reinem Materiale in Berührung gekommen ist, schlechte Resultate gibt , so liegt das nie an der Lösung , sondern immer an anderen Ursachen. Verf. verwendet seine Lösungen Monate lang, ohne daß ihre Güte sich ändert. An jenen schlechten Präparaten, in denen die Erythrocyten grau gefärbt sind. Kerne und Protoplasma überfärbt, ist immer das destillierte Wasser schuld. Das sogenannte destillierte Wasser ist oft nichts weniger als chemisch rein. Es sind fast immer Verunreinigungen alkalischen oder saueren Charakters vorhanden. Beide können schon in minimalen Spuren die Färbungs- resultate vollkommen verderben. Die Folge von sauren Verunreinig- ungen ist die Zerstörung des Azurfarbstoftes, sodaß die Präparate beim Abspülen sehr rasch eosinrot werden, in Wirklichkeit aber dann nur eine schlechte Eosin-Methylenblaufärbung zeigen. Sehr hübsch sieht man diese Vorgänge an gut gelungenen Präparaten, auf die während des Ausstreichens einige Staubkörnchen gefallen sind. Fast jedes dieser Stäubchen umgibt ein Hof von mißgefärbten XXV, 1. Referate. 91 Zellen: bald ein graiier Alkalihof, bald ein Säurehof, in dem die Kerne blaßblau statt violett sind und die neutrophilen Granulationen eosinrot. Selbst wenn das destillierte Wasser ursprünglich voll- kommen rein war, wird es beim Stehen im gut verschlossenen Glas- gefäße innerhalb weniger Tage unweigerlich schlecht. Soweit sich das auf alkalische Verunreinigungen bezieht, trägt die Hauptschuld wohl die Glasflasche als solche. Aber wenn man auch zur Aufbewahrung Flaschen aus Jeuenser Gerätglas verwendet, die Flasche mit einem tadellos reinen Stopfen verschließt , der nie mit etwas anderem in Berührung gekommen ist, leidet die Güte des Wassers schon nach wenigen Tagen. Will man stets vollkommene Präparate er- zielen, dann muß man einen Destillierapparat im hämatologischen Laboratorium aufstellen und sich bei täglichen Arbeiten am besten täglich frisches destilliertes Wasser herstellen. Der Kühler des Apparates soll wie die Auffangflasche aus Jenenser Glas bestehen. Sämtliche Geräte, mit denen FarbstoÖ", Präparate und Wasser in Berührung kommen, dürfen nie zu anderen Zwecken verwendet werden. Mit solchem Wasser erhält man unter jeder Bedingung tadellose Präparate. Doch darf man selbst mit ihm nicht schematisch verfahren. Es gibt auch hier noch Ausstriche, die sich schwer und solche, die sich leicht diff"erenzieren. Ist das Wasser absolut rein, dann kann man das Präparat ruhig so lange darin abspülen, bis es makroskopisch einen schönen Eosinton angenommen hat, selbst wenn das minutenlang dauern sollte. In diesem Falle tut man aber besser, schon im zweiten Akte die Färbung in zur Hälfte verdünnter Lösung anstatt zwei Minuten etwa fünf Minuten lang vorzunehmen. Als Ursache dieser auch dem Verf. immer noch rätselhaften Schwankungen, die eine und dieselbe Farblösung heute zeigt und morgen vermissen läßt, möchte er fast die verschiedene Alkaleszenz des Blutes an- sehen. Er bemerkt allerdings noch, daß er in einem chemischen Laboratorium arbeite , in dessen Luft wohl mannigfaltige Dämpfe enthalten sind. Nur wo diese feinen Bedingungen nicht zu erfüllen sind, ist die JENNERSche Färbung als weit unempfindlicher vorzu- ziehen. — Verf. erwähnt hierbei eine Deckglasmarkierungs- methode, die ihm gute Dienste geleistet hat. Die Schattenseiten der Noniusmarkierung, bei der man bei Arbeiten, die sich über längere Zeit erstrecken, nie weiß, ob sich das Deckglas nicht unter- dessen verschoben hat, machten das Suchen einer anderen Methode nötig. Die Firma Zeiss verkauft einen Deckglasmarkierungsapparat in Form eines gefederten Linsentubus. Zur Markierung soll eine beigegebene 92 Referate, XX Y, 1. Flüßigkeit dienen, die aber weder an Metall noch an Glas haftet. Verf. empfiehlt das Folgende: Man bereite sich aus Vaseline und der Sub- stanz eines Glasfarbstiftes durch Verreiben eine dicke Paste, diese trägt man auf das Farbpolster auf, daß sich in dem Zeiss sehen Etui be- findet. Sie hält sich über ein Jahr lang unverändert. Will man markieren, so schraubt man an den Revolver den Apparat an, dessen Spitze mittels eines kurz gestutzten Pinsels mit etwas Paste bestrichen ist. Arbeitet man mit einem Trockensysteme, dann kann man so in kürzester Zeit durch Umschalten eine beliebige Anzahl von Zellen mit roten Ringen, die zentriert sind, umgeben. Später umzieht man alle mit Tintenringen imd spült mit Xylol darüber, wobei die Paste von selbst wegfließt. Tintenringe sind gegen jedes Abwaschen wider- standsfähig. Schi e ff er (lecker {Bonn). Stamer, A., Untersuchungen über die Fragmentation und Segmentation des Herzmuskels (Beitr. z. pathol. Anat. u. z. allgem. Pathol. Bd. XLII, 1907, H. 2, p. 310—353 m. 2 Tflu). Es wurden 84 Herzen erwachsener Menschen untersucht. Die nötigen Manipulationen wurden möglichst schonend ausgeführt, da es nicht unmöglich war, daß solche durch Erzeugung von Artefakten oder durch Modifizierung des histologischen Bildes der wirklichen Fragmentation Einfluß ausübten. Betreff"en die Untersuchungen auf- geschnittene Herzen, so läßt der Einfluß der Manipulation sich nicht völlig ausschließen. Einzelne Herzen wurden deshalb unaufgeschnitten herausgenommen und sofort in lOprozentiger Formollösung fixiert. Die meisten aufgeschnittenen Herzen wurden in toto in derselben Lösung fixiert. Nach 2 bis 3 Tagen wurden die Herzen dann eine Stunde lang in fließendem Wasser ausgewaschen, dann wurden mit einem scharfen Messer, möglichst parallel zum Verlaufe der Fasern, Stückchen ausgeschnitten, die teils zu Gefrierschnitten ver- wandt, teils in steigendem Alkohol entwässert, in Xylol aufgehellt und in Paraffin eingebettet wurden; nur ganz vereinzelte Stückchen wurden in Celloidiu eingebettet. Wenigstens wurden vom jedem Herzen untersucht: Stückchen beider Mitralpapillarmuskeln , zwei Stückchen aus "der Wandung des linken Ventrikels, zwei Stückchen aus den verschiedenen Seiten des Septum, zwei aus der Wand des rechten Ventrikels und ein bis zwei Tricuspidalpapillarmuskeln. Kam es besonders daraut an, das Vorhandensein oder Nichtvorhandensein der Fragmentation festzustellen, so wurden sehr viele Stückchen unter- XXV, 1. Referate. 93 sucht. Bei acht Herzen benutzte Verf. die von Sainton und Katt- wiNCKEL ^ zur Untersuchung- des Zentrahiervensystems verwandte und von Faber und Bloch" beim Magendarmkanal angewandte Methode: die Herzen wurden unmittelbar (etwa eine Viertelstunde) nach dem Tode des Patienten durch Injektion von lOprozentiger Formollösung in die Perikardialhöhle gehärtet. Bei der Sektion wurden dieselben dann in toto gehärtet und in der obigen Weise untersucht. Durch diese Technik wurde die Einwirkung der Fäulnis und die der Mani- pulationen ausgeschlossen. Außer den Herzen der Erwachsenen wurden einzelne Herzen von ein bis zehnjährigen Kindern und 20 Herzen von Neugeborenen, die während oder kurz nach der Geburt starben, wie auch Herzen von macerierten Embryonen untersucht. Ferner die Herzen von 16 Hunden verschiedener Größe und verschiedenen Alters, die unmittelbar nach der Tötung der Tiere durch Chloroform herausgenommen und in toto in lOprozentigem Formol fixiert wurden. Zur Untersuchung auf Fett wurde die Färbung von Gefrierschniten nach Formolhärtung mit Sudan und Scharlach wie auch die Methode von Marchi benutzt. Einige der Paraffinpräparate wurden nach den üblichen Methoden gefärbt: Hämatoxylinfärbung nebst Hansens Binde- gewebsfärbung oder Eosinfärbung; unter deuHämatoxylinen erwies sich das Eisentrioxyhämatein von Hansen^ als das brauchbarste. Verf. be- nutzte dieses fast ausschließlich zur Normalfärbung, entweder allein oder zusammen mit Hansens Biudegewebsfärbung: Es hebt ebenso vortreiflich die Kittlinienstruktur wie die Querstreifung hervor. Zu feineren Untersuchungen wurden die Eisenhämatoxylinmethode von Benda-Heidenhain mit Eosinfärbung, Ehrlich s Triacidfärbung und die Hfidenhain sehen Neutralfärbungen benutzt. Auch die LEiSHMAN-Färbung ergab schöne Kittlinienstrukturen und schöne Querstreifen. Ferner ver- wendete Veri^ die Methode von Kolossow^: Fixierung und Impräg- nierung frischen Gewebes mit Osmiumsäure undPieduktion der Letzteren im Stücke durch Tannin-Pyrogallussäure. Verf. wendete sowohl Impräg- nierung von Stückchen als auch Färbung aufgeklebter, in anderer Weise gehärteter Schnitte an. Diese Methoden liefern schärfere Bilder als das Eisentrioxyhämatein, wendet man aber Imprägnierung der Stückchen an, so erhält man leicht Kunstprodukte wegen des Sprödewerdens des Gewebes. Verf. ist der Meinung, daß man bei richtiger An- 1) Deutsch. Arch. f. klin. Med. 1898. 2) Nord. med. Archiv 1899. ») Diese Zeitschr. Bd. XXII, 1905, p. 45—90. ^) Diese Zeitschr. Bd. IX, 1892, p. 38—43 u. p. 316—320. 94 Referate. XXV, 1. Wendung des Eisentrioxj^liämateiins die meisten Strukturen des Herz- muskels deutlich darstellen kann, wenigstens ist man im stände, an so gefärbten Präparaten mit Leichtigkeit die Bilder wieder zu linden, welche die KoLOSSOw-Präparate darbieten. Es wurden Schnitte von 6 bis 10 [Ji Dicke hergestellt. Am Ende der Arbeit bespricht Verf. eingehend die Bildung von Artefakten durch die Schneide- oder Zer- zupfungsmethode etc. Es wird dieserhalb auf das Original verwiesen. Schiefferdecker {Bonn). Terzär , F. , Über die Anordnung der glatten Muskel- zellen im Amnion des Hühnchens (Intern. Monats- schr. f. Anat. u. Physiol. Bd. XXIV, 1907, H. 7—9, p. 292 —303 m. 1 Tfl.). Als Fixierungstlüssigkeit benutzte Verf. ein von v. Lenhossek angegebenes Gemisch, das bei der Fixierung von Hühnerembryonen ausgezeichnete Dienste leistet: Gesättigte Sublimatlösung 75 cc Acid. acet. concentratum 5 „ Alkohol, öOprozentiger 25 „ Pikrinsäure bis zur Sättigung. Anwendungsdauer 10 bis 30 Minuten. Die Zellgrenzen des Epithels (ektodermales Plattenepithel) treten an Eisenhämatoxylinpräparaten, besonders nach kurzer Ditferenzierung, sehr schön hervor. Nach Färbung mit Hämatoxylin und Eosin zeigen sich in der Muskelschicht des Amnion ziemlich lange, spindelförmige, anscheinend selbständige glatte Muskelzellen, nach Eisenhämatoxylin sind die Grenzen der Muskelzellen weniger ausgesprochen , eigent- liche Grenzen sind überhaupt nicht zu sehen , dagegen zeigen sich eine Menge von Myofibrillen. Schiefferdecker {Bonn). Takayasu , R. , t'ber die Beziehungen zwischen anato- mischen Glomerulusveränderungen und Nie- re n f u n k t i o n bei experimentellen N e p h r i t i d e n. (Deutsches Arch. f. klin. Med. Bd. XCII, 1907, H. 1, 2, p. 126—153 m. 1 TU.). Die Nieren der Tiere wurden sofort nach der Funktionsprüfung in Längsscheiben geschnitten und in Formol-MüLLER, in konzentrierter Sublimatlösung, in kochendem Wasser (Posner) oder absolutem Alkohol (Ribbert) und in Flejiming scher Lösung gehärtet. Von jeder Niere wurde eine Anzahl von großen Schnitten, welche die ganze Längs- XXV, 1. Referate. 95 schnittriäclie der Niere umfaßten, angefertigt. Stets Celloidineiubet- tung. Zur Färbung diente meist die Methode von vax Gieson, ferner Eisenhämatoxylin nach Heidexhaix, Toluidiublau, Safrauin, Phosphor- raolydänsäure nach Mallory. Verf. bestimmte dann die Anzahl der Glomeruli, die anatomisch verändert waren, in mehreren der großen Längsschnitte, und nahm daraus das Mittel. Die Glomeruli wurden in möglichst dünnen Schnitten (8 bis 10 jM) mit Immersion untersucht. Es war dabei trotz aller Bemühung nicht möglich, immer scharf zwischen Endothelien und Epithelien zu unterscheiden. Schiefferdecker {Bonn). Standf iiß , R. , V e r g 1 e i c li e u d - h i s 1 1 g i s c h e Studien an den MALPiGHischen Körperchen der Niere der "Wirbeltiere (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LXXI, 1907, p. 116—128 m. 1 Tfl.). Zur Untersuchung dienten meist weiße Mäuse, die nach Tötung mittels Chloroform von der Aorta aus mit Berlinerblau injiziert wurden. Zu der dann folgenden Fixierung und Härtung kam Formol oder MüLLERSche Flüssigkeit zur Verwendung. Die Einbettung erfolgte fast immer in Celloidin und diei Färbung mit Hämatoxylin kombiniert mit Eosin oder der van Gieson sehen Methode. E. Schoebel {Neapel). Letulle, M., et Larrier, N., Contribution a l'histopatho- logie generale de la glande hepatique. Les capillieules biliaires intra-trabeculaires (Journ. de Physiol. et de Pathol. gen. t. IX, 1907, uo. 4, p. 653 —663 av, 6 figg. et 1 pl.). Verf. hebt hervor, daß die Hämatoxylin-Eisenalaun-Färbmig von Heidenhain die elegantesten Bilder zur Darstellung der Gallenkapil- laren ergab. Es genügt, den Schnitt einige Stunden in der 2pro- zentigen Eisenalaunlösung liegen zu lassen ; ihn dann einen Augen- blick in "Wasser zu bringen; ihn dann in die Heidenhain sehe Hämatoxyliulösung zu übertragen ; ihn mit einigen Tropfen der Eisen- alaunlösung zu behandeln , bis er unter dem Mikroskope eine grau- blaue Färbung angenommen hat ; ihn dann sorgfältig auszuwaschen und schließlich, wie üblich, in absoluten Alkohol, Bergamottöl, Xj^lol, Zedernholzöl zu übertragen. Das Eosin in stärkerer Verdünnung ergibt nach Kernfärbuug mit saurer Hämalaunlösung bei 24stündiger Einwirkung ebenfalls oft sehr schöne Präparate der Gallenkapilkren. Schiefferdecker {Bonn). 96 Referate. XXV, 1. Lane, M. A. , The Cytologie al cliar acters oftlie areas of Langerhans (The Americ. Journ. of Anat. vol. YII, 1907, no. 3, p. 409—422 w. 1 pL). Unter den vielen Fixierungsflüssigkeiten und Färbeflüssigkeiten, die Verf. versucht hat, zeichneten sich drei von den ersteren und eine von den letzteren durch ihre Brauchbarkeit aus. Fixierungsflüssig- keiten: 1) Alkoholisches Chrom- Sublimat, bestehend aus gleichen Teilen einer 3*5prozentigen Lösung von Kaliumbichro- mat in Wasser und einer gesättigten Lösung von Sublimat in 95pro- zentigem Alkohol. 2) 70 prozentiger Alkohol. 3) Wässeriges Chrom-Sublimat: Müller sehe Flüssigkeit mit Zusatz von 5 Pro- zent Sublimat. Sehr kleine Stückchen des Pankreas (am besten von dem Milzende) werden dem lebenden Tiere entnommen und schnell in eine reichliche Menge der Fixierungsflüssigkeit übertragen. Für kleine Stücke genügen, bei einmaligem Flüssigkeitsweehsel, 2 Stunden bei der alkoholischen Chrom-Sublimatmischung. Für den 70prozentigen Alkohol genügen 24 Stunden, für die wässerige Chrom- Sublimat- Mischung 3 bis 4 Stunden. Von größter Wichtigkeit ist es, daß Essigsäure sorgfältig vermieden wird, da dieselbe schon in geringer Menge schwer schädigend wirkt. Nach der Fixierung Härtung in steigendem Alkohol , Aufhellen in Bergamottöl und Einbettung in Paraffin. Aufkleben der 3 bis 5 /t dicken Schnitte mit Wasser auf den Objektträger. Färbung mit dem neutralen Gentianaviolett I von Bensley : Zu einer gesättigten wässerigen Lösung von Gentiana- violett setzt man eine gesättigte wässerige Lösung von Orange G, der saure Farbstoff schlägt den basischen nieder; man filtriert und wäscht den Niederschlag aus und trocknet ihn, worauf er in 25 oder 30 cc absoluten Alkohols gelöst wird. Zur Färbung setzt man von dieser Stammlösung zu 20prozentigem Alkohol soviel zu, daß die Lösung dunkel violett aussieht. In dieser färbt man 25 Stunden lang, trocknet die Schnitte mit dickem Fließpapier schnell und gründlich ab oder mit mehreren Lagen Filtrierpapier , die aufeinander liegen. Differenzieren kann man auf zwei Arten : Bei der ersten übergießt man unmittelbar nach dem Abtrocknen den Objektträger mit abso- lutem Alkohol mittels eines Tropfglases, um den Überschuß der Farbe zu lösen, saugt den Alkohol schnell mit Fließpapier ab und bedeckt die Schnitte sofort mit Nelkenöl. Die Difl'erenzierung wird dann unter dem Mikroskope weiter verfolgt , bis die Zymogenkörner in den Drüsenzellen scharf hervortreten aus dem Cytoplasma , das bei dieser Methode den brauugelben Farbenton des Orange G annimmt. XXV, 1. Referate. 97 Bei der zweiten Methode werden die Schnitte schnell abgetrocknet, wie oben, und die Difterenzierung wird ausgeführt mit Aceton (Di- methylketon). Die Schnitte werden mittels eines Tropfglases mit Aceton beträufelt, schnell unter das Mikroskop gebracht, und, wenn die Zymogenkörner hervortreten, wie oben, wird der Objektträger in Xylol gelegt. Dieses letztere wird auch angewendet zur Aufhellung der durch Alkohol dift'erenzierten Schnitte. Dann Aufheben in Kanada- balsam. Scliiefferdecker {Bonn). PeiTOneito, A., Die Regeneration der Nerven (Beitr. z. pathol. Anat. u. z. allgem. Pathol., Bd. XLII, 1907, PI, 2, p. 354—446 m. 6 Tfln). Verf. hat nach vorheriger Fixierung in Osmiumlösung (Flemming, GoLGi) die üblichen Färbungsmethoden im weitesten Umfange benutzt; auch die GoLGi-Silberreaktion leistete, namentlich zur Kontrolle, gute Dienste. Als ganz besonders geeignet erwies sich die ÜAjALsche Methode. Von besonderem Vorteile beim Studium des Regenerations- prozesses ist die Modifikation von Veratti: diese gestattet das Ge- webe aufzuhellen und nach den verschiedenartigsten Methoden zu färben, ohne hierbei die charakteristische schwarze Färbung der Nerven zu zerstören, so daß die Verhältnisse dieser Letzteren sich recht gut zur Anschauung bringen lassen. Die Objekte wurden so- wohl in Zupfpräparaten, wie auch in Schnittserien untersucht. Scliiefferdecker {Bonn) . Petersen, 0. Y. C. E., Beiträge zur mikroskopischen Anatomie der Vesicula semin alis des Menschen und einiger Säugetiere (Anatom. Hefte, H. 103 [Bd. XXXIV, H. 2], 1907, p. 239—362 m. 11 Tfln.). Das menschliche Material wurde zum größten Teile in wässe- rigen Formollösungen von verschiedener Stärke fixiert. Bei den gewöhnlich benutzten Formoliujektionen in die Bauchhöhle gelingt es nicht , die Samenblasen in hinlänglich kurzer Zeit zu fixieren ; selbst bei Sektionen, die 24 Stunden nach dem Tode unternommen werden, kann man sie uufixiert antretfen, obgleich sonst alle mit Peritoneum bekleideten Organe gut fixiert sind (makroskopisch be- trachtet). Der Grund ist die tiefe Lage im Becken. Verf. ver- wendete daher die folgende Methode: Ein 14 cm langer Trokart wird durch das Rectum eingeführt und durch die vordere Wand dieses durchgestochen in den Bindegewebsraum zwischen den beiden Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXV, 1. 7 98 Referate. XXV, 1. Vesiculae semiuales ; durcb diesen hindurch kann man mit Leichtig- keit 50 bis 75 CO injizieren. Nachdem man die Kanüle heraus- genommen hat, füllt man die Blase durch einen Katheter mit 150 cc Fixationsflüssigkeit (um den Penis wird eine Ligatur gelegt) , und eine ähnliche Menge wird durch eine oder mehrere Punkturöftuungeu in der Bauchwand in die Peritonealhöhle eingeführt. Bei dieser Methode wurden sowohl die Därme als auch alle Organe des Beckens vorzüglich fixiert. Der Grund , weshalb Verf. Formol verwandte, war der , daß das Organ in situ fixiert werden mußte ; es mußte außerdem ein Stoff sein, der sich schnell über größere Strecken verbreitete, da die Vesiculae seminales außerordentlich schnell faulen. Verf. hebt dann die Nachteile der mit Formol erzielten Fixierung hervor. Obgleich das Formol soviel gerühmt worden ist, besitzt es doch wesentliche Nachteile. In lebenden Organen , die Muskulatur enthalten, wird eine maximale Kontraktion der letzteren hervorgerufen. Es ist dies besonders ungünstig für den Darm. Die histologischen Wirkungen des Formols sind sehr verschieden , je nachdem man schwächere oder stärkere Lösungen benutzt. Dieses gilt besonders für Epithelien und Bindegewebe. Während man bei einer schwachen, 4 bis 5 Prozent Formaldehyd enthaltenden Lösung die Epithelien angeschwollen findet, erhält man durch eine starke Lösung von 10 bis 20 Prozent Formaldehydgehalt eine so gute Fixierung, daß diese mit der Osmiumsäurefixierung verglichen werden kann. Verf. hat daher zu seinen Leicheninjektionen auch eine 20prozentige wässerige Formaldehydlösuug verwendet. Das Bindegewebe läßt sich dagegen besser in schwächerer Lösung fixieren, da es in der stärkeren sehr hart, fast hornartig wird. Die in Formol fixierten Orgaue sollen nicht in Wasser ausgespült werden, sondern sofort in 96prozentigen Alkohol kommen, da die Wasserbehandlung oft den Zellinhalt aus- wäscht oder auflöst. Bei den Samenblasen von Säugetieren , bei denen ja ein beliebiges Fixierungsmittel genommen werden konnte, ergab eine gesättigte wässerige Sublimatlösung die besten Resultate : sie läßt allerdings die Zellen etwas einschrumpfen, doch werden die Protoplasmastrukturen besonders gut konserviert. Ein großer Teil des menschlichen Materials wurde mit Parakarmin durchgefärbt und in 10 fi dicke Serienschnitte zerlegt. Sonst wurden zu Schnitt- färbungen die gewöhnlichen Kernfärbungsmittel verwendet , Häma- toxylin, Eisenhämatoxylin, Thionin und Toluidinblau in einprozeutiger wässeriger Lösung, Mucikarmin, Säurefuchsin-Pikriusäure (Haxsen) und das Hansen sehe Eisen- und Chromhämatein. Diese beiden letzten XXV, 1. Referate. 99 Methoden erleichterten dem Verf. die Arbeit bedeutend, teils wegen ihrer schnellen Wirkung , teils , und zwar namentlich , wegen der Sicherheit , mit der man imstande ist , das Intensitätsverhältnis zwi- schen der Kern- und der Plasmafärbung zu variieren , indem man die Farblösungen ein wenig modifiziert (wie von Hansex angegeben). Endlich ist sehr wichtig die Widerstandsfähigkeit dieser Färbungen gegen sauere Nachfärbungen. Verf. empfiehlt da besonders die Kom- bination Chromhämatein-Eosin : vorzügliche Färbung der Plasma- und der Kernstruktur. Noch distinkter färbt Chromhämatein-Säurerubin; diese Färbung läßt sich in folgender Weise leicht ausführen. Nach der Färbung mit Chromhämatein spült man ganz kurze Zeit (wenige Sekunden) lang in destilliertem Wasser aus und färbt 2 bis 5 Mi- nuten lang in einer Lösung von Säurerubin von 0'25 auf 250 cc Wasser. Nach der Färbung kommt das Objekt direkt in 96prozen- tigen Alkohol usw. Es scheint, daß die geringe in der Chromhämatein- lösung befindliche Menge von Schwefelsäure bei kurzem Abspülen in destilliertem Wasser im Schnitte zurückbleibt und diesen hierdurch gegen die nachfolgende Säurerubinfärbung „beizt" ; spült man da- gegen lange in gewöhnlichem Wasser ab , so kann man 30 bis 45 Minuten mit Säurerubin färben , ehe die Färbung gelingt , was wahrscheinlich darauf beruht, daß der Schnitt aus dem Wasser Alkali aufgenommen hat und das Säurerubin verträgt eine alkalische Reak- tion schlecht. Außer zur Protoplasmafärbung empfiehlt Verf diese Doppelfärbung auch zur Untersuchung der quergestreiften Muskula- tur: mit keiner anderen Methode werden die verschiedenen Elemente der Muskelfasern so schnell und so deutlich gefärbt, wie mit dieser. Nach Hansen ist das Eisenhämatein mehrere Monate lang haltbar; Verf. fand nach 5 Monaten die Färbefähigkeit noch vollkommen, wie am ersten Tage ; man darf indessen die Lösung nicht von Tag zu Tag in offenen Farbschälchen stehen lassen, da sie , selbst wenn man sie mit einem Glase bedeckt, dann von der Luft oxydiert wird und die von Hansen beschriebenen höheren Oxydationsgrade annimmt. Ein weiterer sehr wesentlicher Vorteil ist der, daß man durch diese Farben schnell ein haltbares Präparat herstellen kann , das sich, wenn man mit fokusdiflTerenzfreien Linsen arbeitet, auf gewöhnlichen photographischen Platten ohne Farbenfilter mikrophotographieren läßt. Die durch das Chromhämatein erzeugte Färbung ist, wie Verf. durch Mikrospektroskopie nachweisen konnte , nur für rote , grünblaue und blaue Strahlen durchlässig, und der blaue Teil des Spektrums war um so dunkler, je dichter die Färbung wurde ; der Grund, weshalb 7* 100 Referate. XXV, 1. man in Chromhämatein gefärbte Objekte auf die angegebene Weise photographieren kann, ist also der, daß die Farbe zu dicht ist, um Licht durchzulassen , man würde es ja sonst nicht recht verstehen können, daß eine blaue Farbe beim Photographieren schwarz ab- gebildet wird. Die Farblösung selbst hat übrigens ein etwas anderes Spektrum, als das gefärbte Objekt. Die Haltbarkeit der so gefärbten Präparate ist sehr gut, es ist indessen nötig, daß die Präparate wenigstens 10 bis 15 Minuten in Wasser ausgewaschen werden. Sclüefferdecker (Bonn). Bielschowsky, M., u. Brühl, G., Über die nervösen End- organe im häutigen Labyrinth der Säugetiere (Ärch. f. mikrosk. Anat. Bd. LXXI, 1907, p. 22— .57 m. 2 Tfln.). Als Material wurde hauptsächlich das Gehörorgan des Meer- schweinchens benutzt , weil bei diesem Tier die Schnecke nur von einer dünnen Knochenwand umhüllt in die Paukenhöhle hineinragt. Dieses Verhalten ermöglicht eine rasche Entkalkung und außerdem eine sichere Orientierung der Schnittebenen auf dem Mikrotom. Zur Untersuchung diente die Bielschowsky sehe Methode, welche auf der Aldehydreduktion ammoniakalischer Silberlösungen beruht und die besten Resultate an Gefrierschnitten liefert. Das Verfahren, welches ursprünglich für das zentrale Nervensystem angegeben ist , mußte für die Darstellung peripherer Nervenfasern modifiziert werden, weil andernfalls die sich mitfärbenden Bindegewebselemente eine genaue Orientierung erschweren. Das angewandte Verfahren ist folgendes : Die in Betracht kommenden Partien des Felsenbeins werden in 20prozentiger Formollösung fixiert und in 5prozentiger Salpetersäure entkalkt. Nach vollendeter Entkalkung werden sie entwässert und für einige Tage in 20prozentige Formollösung zurückgebracht. Vor dem Schneiden empfiehlt es sich die Präparate etwa eine Stunde in fließendem Wasser abzuspülen, um das freie Formalin , welches den Gefrierprozeß sehr erschwert resp. ganz unmöglich macht, zu ent- fernen. Die so vorbehandelten Objekte lassen sich auf jedem Kohlen- säuremikrotom leicht zum Gefrieren bringen und schneiden. Bei einiger Übung ist die Gefriermethode dem Einbettungsverfahren hin- sichtlich der Schnittgüte mindestens gleichwertig. Ein großer Vorzug dieses Verfahrens vor den Einbettungsmethoden besteht darin, daß vor der Färbung kein Alkohol mit dem Gewebe in Berührung kommt ; einmal werden dadurch Schrumpfungen vermieden und dann bleibt die Färbbarkeit der Neurofibrillen eine bedeutend bessere. XXV, 1. Refonite. 101 Die Schnitte werden vom Messer in destilliertes Wasser über- tragen und kommen dann für 24 Stunden bei Zimmertemperatur in eine 4prozentige im Dunkeln aufzubewahrende Lösung von Argentum nitricum, um dann nach kurzem Durchziehen durch destilliertes Wasser in eine Silberoxydammoniaklösung übertragen zu werden. Diese wird in folgender Weise hergestellt : Zu 5 cc einer 20prozentigen Argentum nitricum - Lösung setzt man 5 Tropfen einer 40prozentigen Natron- lauge. Der entstehende dunkle Niederschlag wird durch tropfen- weisen Zusatz von Ammoniak wieder gelöst, so daß die Flüssigkeit vollkommen klar erscheint oder nur noch einen leicht gelblichen Schimmer aufweist. Dann gießt man 20 cc destilliertes Wasser hinzu. Von Wichtigkeit ist, daß kein zu starker Ammouiaküberschuß, der am Geruch ohne weiteres erkennbar ist, in der Lösung vorhanden ist. In diese Flüssigkeit kommen die Schnitte für einige Minuten, bis sie einen bräunlichen Ton angenommen haben. Dann überträo:t man sie 'O^ in schwach mit Essigsäure angesäuertes Wasser. Es genügt ein Tropfen Eisessig für 20 cc destilliertes Wasser. Hier weicht der braune Ton nach kurzer Zeit einer etwas helleren Nuance und jetzt erfolgt die Überführung in 20prozentige Formalinlösung. Die Reduk- tion vollzieht sich ziemlich langsam. Man läßt die Schnitte so lange in dieser Lösung, als noch weiße Wölkchen aus ihnen aufsteigen. Damit ist die eigentliche Färbung vollendet. Bei älteren Objekten, welche längere Zeit in der Konservierungs- flüssigkeit gelagert hatten, erzielt man gute Resultate nur dann, wenn man die Prozeduren 3- bis 5mal wiederholt, wobei zu beachten ist, daß man formalinhaltige Schnitte nicht unmittelbar in ammoniaka- lisches Silberoxyd bringen darf, sondern dieselben längere Zeit vor- her wässern muß. Diese Verdoppelung der Prozeduren ist übrigens nie von Nachteil und erhöht unter allen Umständen die Sicherheit des Gelingens der Färbung. Um recht brillante und unvergängliche Präparate zu erhalten, empfiehlt es sich, eine Vergoldung und Fixie- rung mit unterschwefligsaurem Natron in bekannter Weise folgen zu lassen. Das Entwässern und Aufhellen der Präparate geschieht wie gewöhnlich in Alkohol von steigender Konzentration und 5pro- zentigem Karbolxylol und der Einschluß in Kanadabalsam. Der Hauptvorzug dieses Verfahrens vor der Methode Ramon y Cajals besteht darin, daß es die nervösen Elemente häufig mit quanti- tativer Vollständigkeit auf der ganzen Fläche des Schnittes zur An- schauung bringt und nicht nur in einzelnen tupfenförmigen Gebieten. Ein weiterer Vorzug besteht darin , daß man nicht nur die Kerne 102 Referate. XXV, 1. der Zellen, sondern auch deren Grenzen scharf und deutlich sieht, so daß Zweifel über die genaue Lage der Neurofibrillen zur Sinnes- zelle, über intra- oder extrazelluläre Strukturen kaum auftauchen können. Schließlich werden aber auch noch protoplasmatische Struk- turen in den Zellkörpern sichtbar, welche die Ramön y CAJALSche Methode nicht darstellt. E. Schoehel {Neapel). \ Rachmanoff, A. W., Die Neurofibrillen und die chroma- tophile Substanz in den Nervenzellen (Obosrenie psychiatrii, nervrologii i experimentalnoi psychologii Bd. III, 1907, p. 1—21 m. 2 Tfln. ; Ref. n. Ref. in Folia neuro- biologica Bd. I, 1907, No. 1, p. 90—91). untersucht wurden normale und pathologische Rückenraarks- zellen von Hund, Kaninchen und Katze. Um die Zellen pathologisch zu machen, wurden die Tiere entweder mit Strychniu vergiftet oder es wurde ihre Temperatur künstlich im Thermostaten erhöht oder es wurden Nerven ausgerissen oder torquiert. Stücke der Hals- und Lendenanschwellung des Rückenmarkes wurden in 95prozentigem Alkohol fixiert, in Paraffin eingebettet und in Serienschnitte zerlegt. Diese wurden gefärbt entweder in einer wässerigen Lösung von Toluidinblau mit nachfolgender Entfärbung in 95prozentigem Alkohol oder in einer 5prozentigen Silbernitratlösung innerhalb 24 Stunden bei 37*^. Letztere Schnitte wurden ausgewaschen in destilliertem Wasser und mit der folgenden aufs 2- bis Sfache verdünnten Mischung Übergossen: Destilliertes Wasser 25*0; Natr. sulfurosi 4*5; Kali carbonici 3*0; Hydrochinon 0*5. Nach dem Auswaschen kamen die Schnitte für einige Minuten in ein auf das 5fache verdünntes Ge- misch von gleichen Teilen einer Öprozentigen Lösung von Natr. bisulfurosum und einer lOprozentigen Lösung von Natr. hyposulfuro- sum. Nach abermaligem Auswaschen wurden die Schnitte in Balsam eingeschlossen. Verf. färbte zwecks besserer Vergleichung entweder zwei benachbarte Schnitte einer Serie, den einen nach dem ersteren, den zweiten nach dem letzteren Verfahren oder einen Schnitt zu- nächst mit Toluidinblau, photographierte ihn oder zeichnete ihn, zog dann aus ihm das Toluidinblau aus und färbte darauf denselben Schnitt mit Silbernitrat , oder aber er wandte eine Doppelfärbung mit den beiden genannten Färbungen an, die jedoch nur an normalen Zellen gelang. Schiefferdecker {Bonn). XXV, 1. Referate. 103 Larionoff, W. , Die feine Struktur und eine neue Fär- bungsmethode des Gehirns des Menschen und der Tiere (Arch. f. Psychiatrie u. Xervenkrankh. Bd. XLIII, 1907, H. 1, p. 388—397 m. 3 Tfin.). Verf. hebt hervor^ daß bei den jetzigen Untersuchungsmethoden die Nervenzellen zum Teil stark verändert, zum Teil direkt zerstört werden. Man müsse daher auch dicke Schnitte nehmen, damit wenig- stens die Zellen in der Tiefe erhalten bleiben, wenn auch die an der Oberfläche zerstört werden. Je einfacher die Bearbeitung der Präparate ist, desto besser werden die Bilder erhalten. Verf. hat daher seine Modifikation der Golgi- Methode noch bedeutend verein- facht: Das frisch herausgenommene Gehirn wird, um es lange zu konservieren, in lOprozentige Formollösung getaucht. Nach 3 bis 4 Tagen wird eine beliebige Windung mit der Pia oder sogar eine Hälfte des Gehirns des Hundes oder der Katze herausgeschnitten und in ein Glas mit einer kleinen Menge einer ^/,-, ein- bis 2pro- zentigen Lösung von Kaliumbichromat auf 4 bis 7 Tage in den Ofen bei einer Temperatur von 27^ bis 30^ gelegt. Je schwächer die Lösung des Kaliumbichromats ist , desto besser ist es. Dann gießt man diese Lösung ab und statt ihrer eine 3prozentige Lösung von Silbernitrat hinein. Das Glas bleibt wieder im Ofen bei derselben Temperatur 4 bis 7 Tage. Dann wird es herausgenommen , mit Fließpapier getrocknet, mit dem Papier in das Mikrotom gelegt und trocken oder mit Alkohol von 70^ bis 90*^ geschnitten; dicke Schnitte von 7 bis 10, 12 bis 20 Abteilungen des Mikrotoms. Dann schnelle Entwässerung und Einlegen in den Alkohol -Sandaraklack und nach Austrocknen Begießen mit hartem Kanadabalsam , gelöst in Xylol. Man darf das Präparat nicht mit Wasser abwaschen, da das der Färbung schadet. Um eine sichere Färbung zu erhalten, kann mau das Präparat noch mehrere Tage in einer frischen Lösung von Silbernitrat bei einer Temperatur von 16 bis 18*^ R liegen lassen und dann mehrere Tage in eine 3prozeutige Formollösung legen. Konservieren- kann man es in denselben Lösungen von Silbernitrat oder Formol. .Um eine Färbung der weißen Substanz zu erhalten, muß man die Färbung 20 Tage lang bei 25^ C fortsetzen und zur Lösung des Kaliumbichromats MtJLLERsche Flüssigkeit hinzufügen. Man kann auch eine noch bessere Färbung bei der umgekehrten Bearbeitung, d. h. zuerst mit Silbernitrat und dann mit Kalium- bichromat oder Formol erhalten. Schiefferdecker {Bonn). 104 Referate. XXV, 1. Cajal y Kamou, S. , L'appareil reticulaire de Golgi- HoLMGREx colore par le nitrate d'argeut (Trav. du Laborat. de Rechercbes biol. de l'Uuiv. de Madrid t. V, 1907, fasc. 3, p. 151—154 av. 1 fig.)- Es ist dem Verf. gelungen, den netzförmigen Apparat von Golgi- HoLMGREN in den Zellen der Spinalganglien und des Rückenmarkes des Hundes und der Katze bei neugeborenen oder nur wenige Tage alten Tieren mit Silber zu färben. Ebenso wie die Methode von GoLGi und die von Golgi-Veratti tritt die Färbung hinreichend stark und konstant nur bei jungen Tieren ein. Je älter das Tier wird, um so blasser wird die Imprägnation. Methode: 1) Die Stücke des Nervensystems werden für 24 Stunden zur Fixierung in eine lOprozentige Formollösung gebracht. 2) Dann vierstündiges Aus- waschen in fließendem Wasser , um das Formol auszuziehen , dann Übertragen in die Silberlösung (1*5- bis Sprozentig), in der sie 3 bis 5 Tage verbleiben. Man kann auch, bevor man die Stücke in das Silberbad bringt , sie erst noch einen Tag in Alkohol härten , wo- durch das Auswaschen ersetzt wird. 3) Reduktion des Silbers, wie gewöhnlich, in dem Pyrogallol-Formol-Bade. Entwässerung und Ein- schluß in Celloidin. Diese Methode, welche Verf. schon bei der Beschreibung der Imprägnierung der Neurofibrillen früher erwähnt hat , ist fast identisch mit dem von Levaditi zur Darstellung der Spirochäte der Syphilis angegebenen Verfahren. "Was die Färbung der Neurofibrillen und der Nervenfasern anlangt, so ist diese Methode lange nicht so günstig, wie die direkte Fixierung in Silbernitrat, und wie die mit vorheriger Fixierung in Alkohol allein oder in ammoniakalischem Alkohol. Dagegen läßt sie mit absoluter Sicher- heit die Nukleolen erkennen , die sich sogar in den Mitosen färben (Hühnchen usw.) und ferner die Bindegewebszellen, welche das Silber stark aufnehmen. Endlich färbt sie die Bindegewebsfibrillen , so daß man deren embryonale p]ntwicklung sehr bequem studieren kann. Man kann aus dieser Silberreaktion noch einen besonderen Nutzen ziehen. In dem Bindegewebe , dessen Zellen sich oft kaum gefärbt zeigen, ziehen diese lebhaft die basischen Anilinfarben an, besonders das Safranin , das Thiouin , das Methylenblau usw. Wahrscheinlich wirkt der schwache kolloidale Silberniederschlag, durch welchen die Zellen gelb gefärbt erscheinen, als eine ausgezeichnete Beize auf die basischen Anilinfarben , welche sich infolgedessen sehr elektiv ver- halten. Auch die in der Entwicklung begriffenen Bindegewebsfasern treten auf diese Weise besser hervor. Verf. verwendet daher die XXV, 1. Referate. 1Q5 eben angegebene Silberimprägnation häufig bei einer Färbung- mit basischen Anilinfarben sowohl bei normalen wie bei pathologischen Geweben. ScMefferdecker {Bonn). Herxlieimer, G., u. Gierlich, N., Studien über die Neuro- fibrillen im Zentralnervensystem. Entwick- lung und normales Verhalten. Veränderungen unter pathologischen Bedingungen. Wiesbaden (J. F. Bergmann) 1907; 210 pp. m. 1 Atlas von 20 Tfln. Die Verff. haben sich bei diesem ebenso umfangreichen wie eingehenden Werke zur Darstellung der Neurofibrillen ausschließlich des von Bielschowsky angegebenen Verfahrens bedient und sich im allgemeinen genau au die Vorschriften gehalten, die der genannte Autor 1904 in erweiterter und verbesserter Form mitgeteilt hat. Von der sogenannten Blockmethode , bei der ganze Stücke erst im- prägniert, dann eingebettet und geschnitten werden, haben die VerfF. bald Abstand genommen, da die so erzielten Schnitte oft nur streifen- weise das Silber annahmen und namentlich am Rande vielfach helle und ungefärbte Stellen aufwiesen. Es wurde also fast ausschließ- lich die Imprägnierung am Gefrierschnitte angewendet. Nachdem das Präparat in lOprozentiger Formollösung fixiert und gehärtet war, wurden mit Hilfe des Kohlensäuregefriermikrotoms Schnitte von mög- lichst 5 ^ Dicke augefertigt, unter Wasser aufgefangen und 24 Stun- den in eine 2prozentige Lösung von Silbernitrat gebracht. Nach kurzem Durchziehen durch Wasser wurden die Schnitte dann in stets frisch bereitete ammoniakalische Silberlösung übertragen (2 bis 3 Tropfen einer 40prozentigen Natronlauge wurden 20 cc einer 2prozentigen Lösung von Silbernitrat zugefügt und nun so viel Am- moniak unter ständigem Schütteln im Meßzylinder tropfenweise bei- gegeben , bis der sich bildende schwarzgraue Niederschlag sich ge- löst hatte. In dieser Lösung verweilten die Schnitte je nach der Dicke 2 bis 3 Minuten. Ein gelbbrauner Farbenton läßt die rich- tige Durchtränkung des Schnittes mit der ammoniakalischen Silber- lösung erkennen. Dann kamen die Schnitte nach kurzem Durchziehen durch Wasser in die reduzierende 20prozentige Formollösung, meist für 12 bis 24 Stunden. Dann Vergoldung unter Verwendung eines schwach saueren Goldbades mit nachfolgender Fixierung in sauerer schwefelsauerer Natronlösung. Auf der richtigen Durchtränkung des Schnittes mit der Ammoniak-Silberlösung beruht im wesentlichen das o Gelingen der Färbung. Die Zeitdauer des Verweilens in dieser 106 Referate. XXV, 1. Lösung ist daher für jeden Schnitt genau zu bemessen und richtet sich in erster Linie nach seiner Dicke. Anderseits sind auch einige Stellen des Nervensystems besonders leicht zu imprägnieren, so z. B. die vordere Kommissur des Rückenmarkes, die Substantia reticularis des verlängerten Markes und die Radii der Hirnrinde. Das embryo- nale Gewebe bedarf im allgemeinen einer stärkeren Durchträukung mit der Ammoniaksilberlösung. Haben die Schnitte in dieser zu lange verweilt, so tritt Überfärbung ein und die feinen Fasern und Netze in den Zellen verlieren an Deutlichkeit. Zuweilen haben die Verff. in pathologischen Fällen absichtlich stärkere Imprägnierung resp. leichte Überfärbung hervorgerufen , um so sicher alle vorhan- denen Neurofibrillen zur Darstellung zu bringen , so namentlich in der Regio zonalis der Hirnrinde bei Paralyse und Krampfzuständen. — Auch die Verff. haben bei Überschuß von Ammoniak in der Silber- lösung zuweilen ein Umschlagen der Färbemethode beobachtet; es findet sich dann statt der Fibrillenfärbung eine prächtige P^ärbung des Gliagewebes. So namentlich bei chronischen pathologischen Prozessen des Rückenmarkes. Worauf dieser Umschlag beruht, ist noch nicht bekannt ; ein absichtliches Hervorrufen dieser Gliafärbung war nicht immer von Erfolg; die Verwendung stärkerer Silberlösung (3 bis 5 Prozent) bot keine besonderen Vorteile. Die Unterscheidung des namentlich in pathologischen Fällen vermehrten und mitgefärbten Bindegewebes und der Glia von den Neurofibrillen läßt sich bei großer Übung meist durchführen , wenngleich bei isoliert gelegenen Fibrillen die Deutung mitunter sehr schwer sein kann. Gewöhnlich sind die Bindegewebsfibrillen durch ihre Dicke, Verlaufsrichtung und Lage zueinander gut charakterisiert. Auch heben sich die Neuro- fibrillen durch tiefere Schwärze gut ab von den Fasern des Stütz- gewebes , die meist auch ungleichmäßiger imprägniert sind. Auch von den Gliafasern unterscheiden sich die nervösen durch Dicke und Verlaufsrichtung; vor allem aber tritt der Unterschied zwischen den beiden Faserarten bei eifrigem Gebrauche der Mikrometerschraube hervor, wenn man sich ein körperliches Bild herzustellen versucht. Ist ein Farbenumschlag erfolgt, hat sich die Glia also in ausgedehntem Maße mitgefärbt, so sind solche Präparate zum Studium der Neuro- fibrillen nicht zu verwenden, sondern auszuschalten. Diese Unter- scheidung der Neurofibrillen von den anderen Geweben wird wesent- lich erleichtert durch die von Bielschowsky angegebene Modifikation des Durchziehens des Schnittes durch eine schwache Essigsäurelösung vor dem Eindringen in die reduzierende Formollösung. Vorsicht XXV, 1. Referate. 107 iiiul Kritik ist bei dieser, wie bei jeder Imprägnationsmetliode sehr nötig, man muß stets viele Schnitte herstellen und dann die besten aussuchen. Vorteilhaft war es auch oft, teils hellere, teils dunklere Schnitte herzustellen , je nachdem mehr Gewicht auf den Verfolg des Verlaufes einzelner Fibrillen oder auf eine sichere Darstellung ihrer Gesamtheit gelegt wurde. Unter Anwendung dieser Vorsichtsmaßregeln bewährte sich das Bielschowsky sehe Verfahren als eine fast konstante, sehr sichere und klare Methode. Schiefferdecker {Bonn). Fraenkel , E. , Über den Uterus senilis, insbesondere das Verhalten der Arterien in demselben (Arcli. f. Gynäkolog. Bd. LXXXIII, H. 3, 1907, p. 640—652 m. 4 Figg. im Text). Um die Arterienveränderung festzustellen, hat sich Verf. zur Darstellung der elastischen Fasern der Methoden von Unna-Tänzer und Weigert bedient. Besonders die Kombination des sauren Orzein mit Pikro-Lithion-Karmin oder Lithion- und Pikro-Indigo-Karmin gibt sehr übersichtliche, eine weitgehende Differenzierung der interessieren- den Gewebsbestandteile ermöglichende Bilder. Schiefferdecker {Bonn). Petermanii, W., Z u r K e n n t n i s der f r ü h e n E n t w i c k 1 u n g s - Vorgänge am Ei des Igels [Erinaceus euro- paeus L.] vor Ausbildung der Medullarrinne (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXV , 1907, p. 305—361 m. 20 Figg. u. 2 Tfln.). Die in ZENKERScher Flüssigkeit oder Eisessig -Sublimatlösung fixierten Objecte wurden nach Behandlung mit Jodalkohol behufs Entfernung des Sitblimates teils in alkoholischem Boraxkarmiu in toto gefärbt und in Salzsäurealkohol differenziert, teils ungefärbt durch Chloroform in Paraffin eingebettet und mikrotomiert. Die Schnitte wurden mittels Glyzerin-Eiweiß aufgeklebt und die der ungefärbten Stücke mit starkverdünntem Hexsen sehen Hämatoxylin und alkoho- lischem Eosiu tingiert. E. Schoebel {Neapel). Grohs , W., Die Primitivrinne der Fluß-Seeschwalbe [SternahirundoL.] (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXV, 1907, p. 362—390 m. 1 Tfl.). Bei der Fixierung des Materials wurde in folgender Weise vor- gegangen. Der den Eiern entnommene Dotter wurde zunächst in 108 Referate. XXV, 1. schwach erwärmte physiologische Kochsalzlösimg gebracht, am Keim- hof von dem anhafteuclen Eiweiß befreit und dieser dann nebst Embryo mittels Pinsel so lange mit dem Fixieruugsmittel (Zenker sehe Flüssigkeit oder Eisessig-Sublimat) betupft, bis das Eiweiß geronnen war. Nach ümschneidung des Keimhofes wurde dieser vom Dotter abgeschwemmt und für mehrere Stunden in das betreffende Fixatif übertragen. Nach Behandlung mit Jodalkohol wurde dann in üblicher "Weise durch Chloroform in Paraffin eingebettet und die mittels der Glyzerin-Eiweiß-Wasser-Methode aufgeklebten Schnittserien mit Borax- karmin gefärbt. E. Schoebel (Neapel). Lanis , H. , C o n t r i b u t i o n a 1' e t u d e de 1 a genese du v i - teil US dans l'ovule des amphibies [Rana tem- poraria] (Arch. d'anatom. microscopique t. IX, 1907, fasc. 3, 4, p. 607 — 66.3 av. 7 pls.). Das Tier wurde durch Durchschneiduug im Zervikalmarke ge- tötet ; es wurden hierdurch die meisten Reflexe vermieden , welche sonst hinderlich sind bei dem Uftnen des Unterleibes. Das Ovarium wurde schnell und vorsichtig entfernt, wenn es klein war, zusammen mit den Nieren , und sofort in die Fixieruugsflüssigkeit gebracht. Es wurde eine ganze Anzahl von Reagentien gleichzeitig verwendet, um vergleichende Bilder zu erhalten. Schnitte von Stücken, welche in Osmiummischung fixiert worden waren (BsNOASche Flüssigkeit, FLEMMiNGSche uud HERMANNSche Flüssigkeit), wurden gefärbt in Safrauin mit darauffolgendem Lichtgrün, mit Eisenhämatoxylin von Heidenhain mit oder ohne Eosiu, oder mit Bordeauxrot, Kongorot, Lichtgrün, Azurkarmin (nach den neuesten Angaben von Heidenhain). Nach der Fixierung mit der Benda sehen Flüssigkeit färbte Verf. zur Probe einige Schnitte auch mit der von diesem Autor angegebenen Methode (Kristallviolett). Andere Präparate (oft eins von den beiden Ovarien) wurden fixiert in Sublimat-Essigsäure nach Lenhossek, den Flüssigkeiten von Bouin, Zenker, MtJLLER oder in absolutem Alkohol. Gefärbt wurden die Schnitte dann mit Eisenhämatoxylin nach Hei- denhain mit oder ohne Eosin, Bordeauxrot usw. Eine Fixierungs- flüssigkeit kann nicht alle Feinheiten im Baue des Eies erhalten : die Flüssigkeiten von Benda , von Zenker und von Bouin ergaben klare Bilder von dem BALBiANischen Körper, der vitellogenen Sub- stanz und von den Dotterelementen. Die Flüssigkeiten von Flemming, Hermann und Müller ließen vor allem Details in bezug auf den Proto- plasmabau erkennen. Die Sublimatessigsäure und die FeejimingscIic XXV, 1. Referate. 109 Flüssigkeit zeigten deutlicli die Kernstruktur in den verschiedenen Entwicklungsstadieu. Nach den Ratschlägen von van der Stricht hat Verf. nach Fixierung und Behandlung mit Alkohol von 50° und 70*^ einen großen Teil seiner Präparate eine Zeitlang in TOgrädigem Alkohol mit Jodzusatz (Kognakfarbe) gelassen. Einige solcher lagen darin 3 und 6 Monate, die Resultate waren vorzügliche. Die intra- protoplasmatisclien Cytomikrosomen , die in frischem Zustande sicht- bar sind, waren gewöhnlich gänzlich verschwunden in nicht jodierten Stücken. Durch längere Behandlung mit dem Jodalkohol scheinen diese zarten Elemente widerstandsfähig zu werden gegen die Be- handlung, der die Stücke unterliegen. Das Jod scheint sie zu beizen und auf den mit Eisenhämatoxylin gefärbten Schnitten sieht man sie intensiv blau gefärbt sich von der schiefergrauen Farbe des Proto- plasmas scharf abheben. Auch in frischem Zustande wurden die jungen Eier untersucht : Es wurde eine Anzahl Eier in der dem Rückenlymphsacke entnommenen Flüssigkeit auf dem Objektträger untersucht. Schiefferdecker {Bonn). Tief haus, Tli., Die Entwicklung der Ringelnatter [ T r o - pidonotus natrix Boie] nach Ausbildung der Falterform bis zur Erhebung des Proamnios (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXVI, 1907, p. 55—99 m. 3 Figg. u. 3 Tfln.). Das Material wurde mit Sublimat -Eisessig oder Zenker scher Flüssigkeit fixiert, meist mit Boraxkarmin in toto gefärbt und in der üblichen Weise nach Paraffineinbettung zu Schnittserien verarbeitet. E. Schoebel {Neapel). Katz , L. , Zur mikroskopischen Untersuchung des in- neren Ohres (Arch. f. Olirenheilk. Bd. LXXIV, 1907, Teil 2, p. 135—147 m. 3 Tfln.). Verf. ist wohl der genaueste Kenner der mikroskopischen Technik über die Untersuchung des Ohres, so ist es sehr dankenswert, daß er in der vorliegenden kurzen Arbeit seine Erfahrungen kurz zu- sammenfaßt. Verf. spricht zunächst einige Wünsche aus: so wäre es sehr erwünscht, ein noch bequemeres und rascher eindringendes Füllungsmittel, als es das Celloidin ist, zu finden. Ebenso eine neue Methode des leichten und schnellen Aufklebens von Celloidinschnitt- serien. Endlich wäre eine bequeme und exakt wirkende Zerzupfungs- methode für die Kenntnis der Nervenendigung des Gehörnerven wesent- 110 Referate. XXV, 1. lieh. Besonders empfiehlt Verf. zunächst die Osmiumsäure in einem Osmiumgemische. Er öffnet dabei stets bei größeren Tieren und beim Menschen in vorsichtiger Weise das Labyrinth, entweder vom oberen Bogengänge aus oder au der basalen Schneckenwiudung. Die ja an sich schwer eindringende Osmiumsäure dringt bei Zusatz von Essig- säure und Chromsäure oder Platinchlorid wesentlich leichter ein. Die nachträgliche Reduktion der Osmiumsäure mit Holzessig, Tannin oder Pyrogallussäure ergibt sehr schöne scharfe Präparate. Die Zenker sehe Flüssigkeit leistet beim Labyrinth unvergleichlich mehr als die MtJLLERSche Flüssigkeit und zwar nicht wegen des Gehalts an Subli- mat, das kaum eindringt, sondern durch die relativ große Menge von Eisessig, welche auf die Umsetzung des Kalium bichromicum nicht ohne Einwirkung ist. Die von Wittmaack angewendete Methode ist sehr umständlich aber wertvoll. 1) Fixierung in einer Kalium- bichromat-Formalin-Eisessig-Mischung für mindestens 6 bis 8 Wochen im Brutofen, dann 24stündiges Auswaschen. 2) Hineinlegen in eine Formalin-Eisessiglöäung für 1 bis 4 Wochen; dann 3) Vorentkalkung in Formalin-Salpetersäurelösung 3 bis 14 Tage; 4) dann erst Osmium- Kaliumbichromat-Lösung für 1 bis 3 Wochen; 5) endlich späterhin Reduktion mit Pyrogallussäure etc. Auch die von Benda empfohlene 24stündige Fixierung durch lOprozentige Salpetersäure mit nach- träglicher mehrtägiger Behandlung mit doppeltchromsaurem Kalium hält Verf. für sehr brauchbar, aber für die Feinheiten des Corti sehen Organs leistet sie nicht das Wünschenswerte, jedenfalls weniger als das Osmiumgemisch. Die von Retzius mit so ausgezeichnetem Er- folge angewendete Goldchlorid-Osmiumsäure-Mischung hat den Verf. oft im Stiche gelassen und zwar wohl wegen der Unsicherheit der Einwirkung des Goldchlorids. Verf. nimmt an, daß hier Modalitäten des Verfahrens und der Präparation bestehen, die ihm nicht bekannt sind. Das große Werk von Retzius spricht für die Brauchbarkeit der Methode. Verf. kommt dann auf diejenigen Maßnahmen zu sprechen, die er selbst als einfach erprobt und als sehr zweckmäßig und meist zuverlässig befunden hat. Es kommt bei den Labyrinth- untersuchungen wesentlich darauf an, ob man es mit dem Schläfen- beine eines frisch getöteten Säugetieres, etwa eines Kaninchens, oder mit demjenigen eines erwachsenen, vielleicht nach langer Agonie ge- gestorbenen und 24 Stunden nach dem Tode sezierten Menschen zu tun hat. Für den ersten Fall schlägt Verf. vor, das Labyrinth des frisch getöteten Tieres von allen überflüssigen benachbarten Weich- teilen und Kuochenteilen zu befreien, den oberen Bogengang weit zu XXV, 1. Referate. 111 öftnen und das Präparat für eine bis 2 Stunden in die folgende Osmium- Essig'säure-Mischung- zu bringen: Osmiumsäure, 0"5prozentige Lösung . . 30*0 cc Essigsäure (konzentriert) 5 Tropfen. Nach Ablauf von 2 Stunden wird diesem Gemische zugesetzt: o^ Chromsäure, Oöprozentige Lösung . . 60'0 cc Essigsäure (konzentriert) 10 Tropfen. Hierin bleiben die Präparate 4 Tage. Anstatt der O'öprozen- tigen Chromsäure ist auch eine 0'5prozentige Lösung von Platin- chlorid vorteilhaft, sodaß der betreffende Zusatz zur Osmium-Essig- säure sein würde: Platinchlorid, O'öprozentige Lösung . . 60'0 cc Essigsäure (konzentriert) 10 Tropfen. Es handelt sich also bei diesen Lösimgen um eine modifizierte FLEMMiNGSche odcr Hermann sehe Lösung. Die Chromsäurelösuug oder Platinchloridlösung ist auf weitere 4 Tage zu erneuern. Es schadet nichts, wenn es einige Tage länger wie 4 Tage wird. Für außerordentlich nützlich hält Verf. es, besonders für die Darstellung der Nerven- und Ganglienzellen , die gehärteten Präparate unmittel- bar nach der Fixation, aber nach vorhergehendem 15 Minuten langem Abspülen in fließendem Wasser, in eine Holzessiglösung (1:1) für 12 bis 24 Stunden einzulegen, oder in Pyrogallussäure oder Tannin. Zur Entkalkung nach vorheriger Anwendung der Osmiummischung benutzt er für Schläfenheine kleiner Tiere: Chromsäure 0"5 Salpetersäure oder Salzsäure 2"0 — 5'0 Destilliertes Wasser 1000 Die Konzentration der Salpetersäure oder Salzsäure richtet sich nach der Dicke und Härte des betreffenden Schläfenbeines. Das durch Osmiumreduktion imd Holzessig schwarz gewordene Präparat, an dem man sich allerdings schwer orientieren kann, muß ungefähr ein bis 2 Stunden lang in fließendem Wasser ausgewaschen werden. Ob genügende Entkalkung eingetreten ist, muß man mit der Präpa- riernadel probieren. Die Entkalkungsflüssigkeit muß nach Bedürfnis ungefähr nach 2 Tagen erneuert werden. Gewöhnlich ist bei kleineren Tieren (Kaninchen) bei Sprozentiger Salzsäurelösung die Entkalkung in 3 bis 5 Tagen eingetreten, bei älteren Katzen in 4 bis 6 Tagen; bei Mäusen bewirkt z. B. die Hermann sehe oder die FLEMMiNGSche 112 Referate. XXV, 1. Härtuiigsfliissigkeit durch ihren Gehalt an Essigsäure in etwa 8 Tagen meist auch vollkommene Entkalkung. Eine Schädigung der vorher fixierten Labyrinthgebilde durch die Entkalkungsfllissigkeit ist nur bei unzureichender Fixierung zu befürchten. Verf. hält diese Osmium- mischungen für die besten Methoden, ebenso die Entkalkungsfiüssig- keiten für sehr brauchbar. Bei festen und schweren Felsenbeinen des Menschen ist der geringe Zusatz von Chlorpalladium (Waldeyer) zu leichterer Entkalkung von großem Nutzen. Einbettung stets in Celloidinlösung, die möglichst frisch hergestellt und ganz wasserfrei sein muß. Paraffineinbettung des Labyrinthes ist unbrauchbar, da beim Schneiden sowohl das CoRTische Organ, als auch die gespannte REissNEKSche Membran fast regelmäßig entzwei reißen. Will man dagegen recht feine Schnitte (5 fx) von festeren bindegewebigen Be- standteilen des häutigen Labyrinthes oder von der Stria vascularis erhalten, dann leistet die Paraffineinbettung bei kleinen Säugetieren sehr gute Dienste. — Was die Untersuchung des menschlichen Labyrinthes anlangt, so muß man vorläufig noch auf die Darstellung der feinsten histopathologischen Verhältnisse am Nervenendapparate des Gehörnerven und an den Sinueszellen verzichten, da in der Regel die Sektionen zu spät ausgeführt werden (24 bis 36 Stunden nach dem Tode), und da dem Tode meistens eine längere Agonie vorausgegangen ist. Es kommt daher für gewöhnlich bei diesen Labyrinthuntersuchungen wesentlich darauf an, durch eine passende Härtung noch den allgemeinen Situs und die allgemeinen Größen- verhältnisse der einzelnen Gebilde, sowie die Spannung der Mem- branen, die markhaltigen Nervenfasern des Gehörnerven, die Gang- lienzellen im Spiralkanal , etwaige Exsudate , den Knochen und die Gefäße usw. derart zu erhalten, daß man daraus noch relativ gröbere pathologische Verhältnisse mit Sicherheit erkennen kann. Auch für normal histologische Studien ist das Labyrinth des erwachsenen Menschen aus demselben Grunde kaum verwertbar, man behilft sich mit dem Schläfenbeine von Neugeborenen, die während der Geburt gestorben sind, und öfters verhältnismäßig frisch untersucht werden können. Spiritus und Müller sehe Flüssigkeit sind für das mensch- liche Labyrinth durchaus unbrauchbar. Verf. schlägt das folgende Verfahren vor: Nachdem das menschliche Schläfenbein aus der Schädelbasis herausgenommen ist, wird 1) das Tegmen antri vor- sichtig mit dem Meißel eröffnet; 2) ebenso der obere Bogengang; 3) die Spitze der Felsenbeinpyramide wird abgesägt, und zwar am äußeren Rande des Porus acusticus internus und ungefähr parallel XXV, 1. Referate. ]^J3 der Scilla feubeinsclmppc unter Schonung des Nervus acusticus und facialis. Der Sägeschnitt verläuft dann ziemlich nahe dem vorderen Rande der basalen Schneckenwindung, und von dieser Stelle aus kann man die Schnecke mit einem sehr feinen Meißel leicht eröffnen. Die dabei abgesägten Teile der Tube und der vorderen Paukenhöhle sind besonders aufzubewahren. Was die feinere und feinste Dar- stellung des Nervenendapparates betrifft, so empfiehlt Verf. auch hier, besonders für das Labyrinth des Kindes, die oben erwähnten Osmiumgemische mit eventueller Holzessigreduktion. Für die ge- wöhnlichen Untersuchungen des nicht frischen menschlichen Schläfen- beines reichen aber vollständig aus : Formol - MtJLLER -Verfahren : Formalin 100 Müller sehe Flüssigkeit ad 1000 oder besser : Formalin 10-0 Müller sehe Flüssigkeit 870 Eisessig 3-0 Hierin bleiben die Präparate unter öfterem Wechsel der Flüssigkeit etwa 3 Wochen. Eine brauchbare Konservierungsflüssigkeit, die gleichzeitig entkalkt, ist: Salpetersäure 7-5 Destilliertes Wasser lOO'O Formalin 5-0 Nach 3 Tagen kommt das Präparat zur eigentlichen Ent- kalkung in : Salpetersäure 100 Destilliertes Wasser 100"0 Chromsäure 05 Die Entkalkungsflüssigkeit muß alle 2 Tage erneuert werden bis zur vollständigen Entkalkung, die ungefähr nach 14 Tagen unter Kontrolle mit der Präpariernadel eintritt. Daß bei der Untersuchung des menschlichen Schläfenbeines alle überflüssigen Knochen und Weich- teile zu entfernen sind, ist selbstverständlich. Außer der Salpeter- säure verwendet Verf. auch bei dem menschlichen, sehr harten Schläfenbeine zur Entkalkung folgende Mischung: Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXV, 1 8 214 Referate. XXV, 1. Salzsäure lO'O Chromsäure 0"5 Chlorpalladium 0-05 Destilliertes Wasser 1000 Auch diese Mischung ist mindestens alle 3 Tage zu erneuern. Sie schädigt das in der Tiefe liegende membranöse Gebilde mit seinen Epithelzellen und Nerven in keiner Weise, wenn die Härtung eine vollständige war. Finden sich trotz der regelrecht vorgenommenen Entkalkung noch einige kleine Knochenmassen in der Tiefe, so soll man das in Celloidin eingebettete Präparat in Alkohol mit 5 Prozent Salpetersäure oder Salzsäure für einige Tage einlegen (Salzsäure 5'0, verdünnter Alkohol ad 100"0). Sowohl die Fixierungs- wie die Ent- kalkungstlüssigkeit muß stets in beträchtlicher Menge angewendet werden, bei größeren Tieren nicht unter 200 cc. Vor dem Schneiden der Celloidinblöcke sei man auf gute Orientierung bedacht : Verf. benutzt dazu meistens den oberen Bogengang imd den inneren Ge- hörgang. Was die Färbung anlangt, so ist eine solche nach Be- handlung mit Osmium und Holzessig meist unnötig. Man kann die Schnitte auch noch färben mit der Benda- Methode, d. h. nach mehr- stündiger Beizung in einer ungefähr 20prozentigen Lösung von Liquor ferri sulfurici oxydati in sehr verdünntem einprozentigem WEiGERxschem Hämatoxylin usw. Auch die Färbung nach van Gieson, die mit Hämatoxylin-Eosin oder mit Pikrokarmin oder die WEiGERTSche Nerven- färbung sind je nach Wesen und Beschaffenheit der zu untersuchen- den histologischen Elemente vorteilhaft anzuwenden. Es muß indessen bemerkt werden, daß die Färbbarkeit der Labyrinthpräparate besonders dann sehr leidet, wenn bei der Entkalkung scharfe Säuren ange- wendet werden, und das ist ja besonders nach dem vorangegangenen Osmiumgemische der Fall. Die Anwendung des Formols ist als ein großer Fortschritt in der Behandlung des Labyrinthes zu betrachten. Schiefferdecker {Bon7i). C. Mikroof^ganisnien. Stockhausen, F., Ökologie, „Anhäufungen" nach Beije- RiNCK. Beiträge zur natürlichen Reinzucht der Mikroorganismen. 11 Abb. ' Berlin (Institut f. Gärungs- gewerbe) 1907. XXV, 1, Referate. 115 Die außerordentlich dankenswerte Zusammenstellung des Verf. referiert in dem Sinne über zahlreiche Arbeiten Beijerincks und seiner Schüler, daß alle von ihnen angegebenen Methoden zur natür- lichen Reinzucht oder Anhäufung bestimmter Mikroorganismen zur Besprechung kommen. Beijerincks in Rede stehenden Methoden be- zwecken, „aus einem Gemenge von Mikroben diejenigen Arten und Varietäten, welche au gewisse, voraus bestimmte Lebensbedingungen adaptiert sind, in flüssigen Kulturmedien zur einseitigen Entwicklung zu bringen". Dabei werden einmal die Beziehungen der Mikro- organismen zu Licht und Sauerstoff und Temperatur, in zahlreichen anderen Fällen ihr ungleiches wählerisches Verhalten verschiedenen chemischen, als Nährstofte wirksamen Agentien gegenüber verwertet. Die Bakterien stehen im Vordergrund des Interesses. (Beziehungen der Bakterien zur Kohlensäure der Luft, StickstotF assimilierende imd denitrifizierende Bakterien. Oligo- und Mesonitrophilie , üreumbak- terien , Trennung der Milchsäurebakterien voneinander und von den Hefen, Zellulose zersetzende Mikroorganismen, Methanmehrer und Methauzehrer, Diastase und Gelase erzeugende Bakterien u. a.) Neben den Bakterien werden die Hefen, ferner auch kurz die kultivierbaren Algen und Protozoen behandelt. Küster {Halle a. S.). Mandelbaum, Ji., Eine vitale Färbung der Spirochaete pallida (Münch. med. Wochenschr., Jahrg. LIV, 1907, No. 46, p. 2268 — 2269). Verf. gibt eine Methode an, durch die es gelingt, die Spiro- chaete in kürzester Zeit, ohne im geringsten irgend welche für die- selbe charakteristische Merkmale zu zerstören, zu färben und für das Auge gut sichtbar zu machen. Es handelt sich um eine Färbung in vivo. Man bringe das zu untersuchende Material (Reizserum von einem Primäraffekt oder von einer nässenden Papel) in Form eines hängenden Tropfens auf ein Deckgläschen. Zu diesem setze man mit der Platinnadel etwas LöPFLERSches Methylenblau, vermenge den Farbstoff und das zu untersuchende Material und füge eine Öse l/lO Normalnatronlaugenlösung zu dem ganzen hinzu. Untersucht man nun mit der Ölimmersion und Okular 4 (Zeiss) den Rand des hängenden Tropfens, so sieht man die Spirochaete als zartes, feines, blaßblau gefärbtes Gebilde mit engen, unmittelbar aneinander gereihten Win- dungen, die nach beiden Enden zu immer niedriger werden und in einer feinen Spitze endigen. Verwechselung der Spirochaete pallida mit anderen Spirochaetenarten , namentlich mit der Spirochaete re- 116 Referate. XXV, 1. fringens, sind ganz unmöglich, da letztere grob gefärbt dagegen er- scheint. Sehr schön ist nach dieser Färbung auch die Spiralform der Spirochaeten zu sehen. Dies ist bei den bis jetzt bekannten Färbemethoden garnicht möglich gewesen, da die fixierte Spirochaete und dadurch natürlich auch die Windungen derselben in einer Ebene lagen. Dadurch scheinen auch die Gebilde, die Herxheimer als feine Körner im Protoplasma des Spirochaetenleibes beschrieben hat, vorgetäuscht worden zu sein. Wenn man das zu untersuchende Material unmittelbar nach seiner Entnahme nach der angegebenen Methode färbt, so kann man ganz deutlich noch Eigenbewegung der bereits gefärbten Spirochaete pallida beobachten. Umrandet man das Deckgläschen mit dem hängenden Tropfen mit Wachs, so kann man die Spirochaeten wochenlang, ohne die geringste Veränderung in deren Färbung wahrzunehmen , aufbewahren. Vorhandene Eigen- beweguugen sind aber nach 24 Stunden verschwunden. Der Vorteil der angegebenen Methode liegt also erstens in der sofortigen Färbung derselben, zweitens in dem vollkommenen Erhaltenbleiben der natür- lichen Form der Spirochaete und drittens in dem Erkennen von Eigen- bewegung der gefärbten Spirochaete. Schieferdecker {Bonn). Swellengrebel , N. H., Erwiderung auf die Arbeit des Herrn Dr. Hölling „Spirillum giganteum und Spirochaeta Balbianii" (Zentralbl. f. Bakteriol., Abt. 1 , Orig. Bd. XLVI, 1908, PI. 1, p. 1). Verf. widerlegt die Einwände Hölling s.^ Fixierung der Bak- terien (Spirillum giganteum) gelang mit Formol , Osmiumsäure , Jod- dämpfen, Hermann scher Flüssigkeit, Alkohol; zur Färbung dienten außer Heidenhains Hämatoxylin neuerdings noch Methylenblau, Giemsa- Lösung, Delafields Hämatoxylin. Küster {Halle a. S.). Meyer, A., Der Zellkern der Bakterien (Flora Bd. LXLVHI, 1908, H. 3, p. 335). Verf. beschäftigte sich mit den Sporangien von Bacillus Pasteu- rianus Winogradsky, die nach Bredemann völlig volutinfrei sind, und behandelte zum Zweck der Kern färbung die Objekte nach verschiedenen Methoden. 1. Verfahren. — Das Material wird im Reagensglas zwei Minuten mit Wasser gekocht, in ein Spitzgläschen gegeben und ») Vgl. diese Zeitschr. Bd. XXIV, 1907, p. 331. XXV, 1. Referate. j j 7 zentrifugiert. Nach Entfernung des Wassers gibt Verf. zum Absatz etwas schwefelsaures Eiseuoxydammoniak (^/., g auf 100 cc) , zentri- fug-iert abermals , hebt die Flüssigkeit ab und setzt zum Sediment Iläraatoxylinlösung (1:200). Nach 24 Stunden wird wieder zentri- fugiert, und die Bakterien werden unter dem Deckglas entfärbt. Besser als Eisenlösung bewährte sich dabei Salzsäure (5 Tropfen auf 10 cc Wasser). Zytoplasma und Sporenanlage entfärben sich, der Kern der Sporenaulagen tritt deutlich hervor; meist ist er in der Mitte von einem hellen Hof umgeben. 2. Verfahren. — Das zentrifugierte Material wird drei Stunden lang mit FLEMMiNGScher Lösung (1:1) behandelt, mit Wasser auf der Zentrifuge sechsmal gewaschen , dann wird Alkohol innerhalb 2 — 3 Tagen tropfenweise bis zu 20 Prozent zugesetzt. Zur P'ärbung wird zugesetzt verdünntes (1 : 1) DELAFiELDSchesHämatoxylin, das nach 24 Stunden wieder abgeschleudert wird. Zur Differenzierung nimmt Verf. 10 cc lOprozentigen Alkohol -|- drei Tropfen einprozentigen Salz- säurealkohol. Die Kerne in den Sporenanlagen treten gut hervor als scharf umschriebene dunkle Punkte in einer helleren kreisrunden Scheibe. Das Zytoplasma wird hellblau, die Membranen etwas dunkler blau. 3. Verfahren. — Vorbehandlung wie oben beim zweiten Ver- fahren; dann wird Eisenlösung auf 24 Stunden zugesetzt, Zentrifuge, Abheben der Eisenlösung und Zusetzen von Hämatoxylin (24 Stunden). Nach abermaligem Zentrifugieren werden die Objekte unter dem Deckglas mit Eisenlösung differenziert. Die vom Verf. beschriebenen Zellkerne sind 0"3 /u groß. „Wenn sie sich, wie zu vermuten, durch indirekte Kernteilung vermehren, so muß es uns unmöglich sein, den Teilungsvorgang zu beobachten, denn Körnchen von 0*1 ju.^ wie sie dann in den Chromatinmassen vorliegen würden, könnten wir mit unseren Instrumenten nicht mehr sehen." Küster {Halle a. S.). ßosam, A., Einfache Art der Mikrobe nfärbung (Zentralbl. f. Bakteriol. Abt. 2, Bd. XX, 1908, Nr. 21, 23, p. 724). Verf. färbt mit Methylenblau oder mitMENCLs Gemisch (^/^ Safranin und -^/^ Methylenblau); die Farbe wird in Spiritus konzentriert gelöst und beim Gebrauch mit gleichen Mengen Wasser und Alkohol ver- dünnt. Schließlich werden noch 10 Prozent Ammoniak zugesetzt. In einem Tropfen der Farbstofflösung wird eine kleine Menge der Bakterien gut verteilt und unter dem Deckglas sogleich beobachtet. Küster {Halle a. S.). 118 Referate. XXV, 1. Triucas, L., Nuovo metodo di colorazione per le spore, per i granuli metacromatici ed in sostituzione al metodo di Gram (Soc. delle sc. med. e natur. di Cagliari 1907; vgl. Zentralbl. f. Bakteriol., Abt. 1, Ref. Bd. XLI, 1908, No. 7/10, p. 316). Spor eufärbung: Mazeration in öprozeutiger Chromsäiire (einige Minuten), Kochen in karbolsaurem Fuchsin, Auswaschen, Ent- färbung mit unterchlorsaurem Kalk (10 Prozent), reichliches Aus- waschen, Passage in 40prozentiger Formalinlösung (einige Sekunden), reichliches Auswaschen, Färben mit Chrysoidinlösung (1:30). Die Sporen werden rotbraun, die Bazillen gelb, die Vakuolen schön zitronen- gelb. Nach Verf. ist seine Methode einfacher und schneller durch- führbar als die Möller sehe. Metachromatische Körnchen: Verf. färbt zunächst eine Minute lang in Toluidinblau 0-25 g Alkohol 5 Essigsäure, 2prozentige 100 n und unmittelbar darauf, ohne die Präparate auszuwaschen, eine Mi- nute in einprozentiger Vesuvinlösung. Die metachromatischen Körn- chen erscheinen schwarzblau, die anderen Teile der Zelle blaßgrün. Weiterhiu macht Verf. Mitteilung über die Färbung von Bak- terien aus Reinkulturen nach der von Löffler für Gewebsschnitte angegebenen Methode. Küster {Halle a. S.). Kreibich , Über Silberimprägnation von Bakterien- geißeln (Wiener klin. Wochenschr. 1907, No. 21, p. 633, vgl. Zentralbl. f. Bakteriol., Abt. 1, Ref. Bd. XLI, 1908, No. 4/6, p. 153). Im Anschluß an die von Stern zur Darstellung der Spirochäte angegebenen Methode färbt Verf. Geißeln von Bakterien dadurch, daß er das ausgebreitete Material auf dem Objektträger mit öOpro- zentiger Höllensteinlösung zur Fixierung übergoß und dann bis zur Braunfärbung dem Sonnenlicht (oder Finsenlicht) aussetzte. Küster {Halle a. 8.). Hernian, M., Sur la coloration du bacille tuberculeux (Ann. de Tlnst. Pasteur t. XXII, 1908, no. 1, p. 92). Verf. veröffentlicht eine neue Modifikation seines Färbungsver- XXV, 1. Referate. 119 ffthrens.^ Als Beize benutzt mau eine einprozentige Lösung von Ammoniuiukarbonat in destilliertem Wasser, als Farbflüssigkeit eine Sprozeutige Lösung von Kristallviolett in Oöprozeutigem Alkohol. Vor dem Gebrauch mischt man einen Teil der Farbtlüssigkeit mit 3 Teilen der Beize. Auch für Schnitte ist dieselbe Flüssigkeit ge- eignet. Zur Entfärbung dient lOprozentige Salpetersäure und 95pro- zentiger Äthylalkohol. Schnitte, die mit dem Kohlensäure -Gefrier- mikrotom (nach Fixierung in Eisessigsublimat) angefertigt sind, bringt man in eine mit destilliertem Wasser gefüllte Schale und fängt aus diesem die Schnitte mit dem Objektträger auf. Auf dem Deckel eines Wasserbades läßt man die Schnitte langsam antrocknen, bis sie halb durchscheinend werden. Dann trägt man 6 bis 8 Tropfen Farblösung auf das Präparat auf. Man läßt die Objektträger auf dem Wasserbad. Wenn eine Minute lang Dämpfe von dem Präparat aufgestiegen sind, ist die Färbung als beendet zu betrachten. Hier- nach Entfärbung mit Säure , Auswaschen mit reichlich Wasser. — Die Kristallviolettfärbung läßt sich noch mit anderen Farbstoffen (Eosin u. a.) kombinieren. Küster {Halle a. S.). Peabody, F., u. Prall, J. , Über den Wert von Malachit- grünnährböden zur Differenzierung von Ty- phus- und Kolon bazillen. Beschreibung einer neuen Methode zur Isolierung von Typhus- bazillen aus dem Stuhl (Zentralbl. f. Bakteriol., Abt. 1, Orig. Bd. XLV, 1907, H. 6, p. 550). Verff. fertigen die Bouillon aus Pändfleischwasser an und setzen nach dem Sterilisieren zu je 100 cc heißer Bouillon 10 cc einer etwa O'lprozentigen ( — die Optimalkonzentration muß für die ver- schiedenen Malachitgrünpräparate erst ausprobiert werden — ) , mit sterilem Wasser hergestellten Malachitgrünlösung zu, die Säure des Nährbodens entspricht für 100 cc Agar einem ^/o cc Normal -Na OH. Die Bouillon wird in Reagensgläseru in Portionen von je 10 bis 15 cc verteilt. Die Fäcesaufschwemmung wird bei festen Stühlen durch Aufschwemmung mit dem gleichen Volumen steriler normaler Salz- lösung gewonnen ; zu jedem Röhrchen Malachitgrünbouillon kommen je 2 Tropfen Fäceslösung. Nach 18- bis 20stündigem Wachstum im Brutofen werden Drigalski-Conradi- Platten in der Weise geimpft, daß ein Tropfen der Malachitgrünbouillon-Kultur über die Oberfläche 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. VI, 1888, p. 361. 120 Referate. XXV, 1. des Agars mit einem Drigalski- Conrad: sehen Spatel oder mit dem Ende eines kleinen sterilisierten Reagensglases gestrichen wird. Küste}' {Halle a. S.). Buchholz, VV., Zur kulturellen Unterscheidung der Typh US-Paratyphus-Kolibakterien unterein- ander (Zeitschr. f. Hygiene Bd. LYI, 1907, IL 2, p. 220). Auf 0"3- bis O'Öprozeutigem Nähragar nach Oldekop lassen sich die im Titel genannten Bakteriengruppen nach Zusatz bestimmter Farbstoffe — Neutralrot, Malachitgrün, Orseille — gut unterscheiden. Typhus : Neutralrot bleibt unverändert, Orseille wird in 20 Stun- den, Malachitgrün spätestens am zweiten Tage entfärbt. Paratyphus (Schottmüller- Kurth), Mäusetyphus, Bacillus ente- ritidis Gärtner und einige andere alkalibildende Darmbakterien : Entfärbung aller Nährböden nach 12 bis 24 Stunden. Paratyphus A (Brion-Kayser) : Orseille wird nicht oder erst nach mehreren Tagen entfärbt ; auf Malachitgrün ähnliches Verhalten wie bei Typhus ; Entfärbung des Neutralrots (laugsamer als durch Paratyphus B). Bacterium coli: Malachitgrün wird langsamer entfärbt als von den vorigen, Orseille später als von Typhus und Paratyphus B, früher als bei Paratyphus A. Neutralrot wird etwas langsamer entfärbt als von Paratyphus A und B. Ruhrbacillus (Shiga- Kruse): Die genannten Nährböden bleiben in den ersten Tagen unverändert. Küste?- (Halle a. S.). Kutscher, K., I^in Beitrag zur Züchtung des Meningo- coccus (Zentralbl. f. Bakteriol., Abt. 1, Orig. Bd. XLV, 1907, No. 3, p. 286). Gute Resultate erhielt Verf. auch nach unmittelbarer Isolierung aus dem menschlichen Körper mit folgender Methode. Möglichst frische menschliche Placeuta wird in kleine Stücke zerschnitten und mit dem ausfließenden Gewebssaft usw. gewogen. Nach Zusatz der doppelten Menge Wasser wird in der üblichen Weise die Nähr- flüssigkeit hergestellt und zu Agar (2^/2prozentig), welchem 0*5 Prozent NaCl, 1 Prozent Traubenzucker, 2 Prozent Nutrose und 2 Prozent Pepton (Chapöteaut) zugefügt werden, verarbeitet. „Der schwach alkalisch reagierende Agar wird in kleinen Kölbchen zu 100 cc sterilisiert. Zu 3 Teilen dieses Agars wird, um den fertigen Nähr- boden zu erhalten, ein Teil sterilen (in Kölbchen von 50 cc 4 Tage XXV, l. Referate. 121 liintereinander je eine Stunde bei 60*^ gelialtenen) Rinderseriims hin- zugesetzt. Beide Hauptkomponenten des fertigen Nährbodens, Pla- centaagar und Rinderserum, können vorrätig gehalten werden. Zum Gebrauch wird der fertige Nährboden ebenso wie Ascitesagar jedes- mal friscli hergestellt." Das Wachstum des Meningococcus ist auf dem Placeutaagar dasselbe wie auf Ascitesagar. Küster {Halle a. S.). Rotlie, Über die Verwendung verschiedener Zucker- nährböden zur Dif fer entialdiagnose der Gono- kokken (Zentralbl. f. Bakteriol., Abt. 1, Orig. Bd. XLVI, 1908, No. 7, p. 645). Nach den Angaben v. Lingelsheims stellt sich Verf. Zucker- lakmusnährböden in der Weise her, daß in Rubel -Tiemann scher Lakmuslösung (Kahlbaum) 10 Prozent der zur Prüfung bestimmten Zuckerart gelöst werden; von der Nährlösung werden je 10 cc in Reagensgläsern 2 Minuten im Wasserbad gekocht. Dann kommen zu je 10 cc Lösung 0'5 cc Normaljodlösung. Von der Zuckerlakmus- lösung werden je 1*5 cc zu 13*5 cc einer flüssigen Mischung von 3 Teilen Sprozentigen Nähragars und einem Teil Ascitesflüssigkeit zugefügt und das Ganze wird in eine Petrischale geschüttet. Nach dem Erstarren Strichkultur. Rotfärbung nach 24stündigem Aufent- halt im Brutschrank beweist die eingetretene Vergärung, Verf. zeigt mit Hilfe der Lingelsheim sehen Nährböden, daß Meningokokken Maltose und Dextrose vergären können, während Gonokokken der Maltose gegenüber unwirksam sind. Küster (Halle a. S.). Liefmanii, H. , Ein einfaches Verfahren zur Züchtung und Isolierung anaerober Keime (Zentralbl. f. Bakteriol., Abt. 1, Orig. Bd. XLVI, 1908, No. 4, p. 377). Verf. vermochte auf den gewöhnlichen Petrischalen nach Auf- decken eines Glimmerscheibchens auf den Nährboden anaerobe Orga- nismen zu züchten , wenn dieser irgendwelche reduzierende Stoffe enthielt (z. B. Traubenzucker, Natriumsulfid, Pyrogallol, ameisensaures Natron, Ferroammonsulfat, ferner frische oder kurze Zeit auf 100*^ erhitzte feine Gewebsteilchen aus irgendwelchen Orgauen). Küster (Halle a. S.). Marino , F. , Methode pour isoler les anaerobies (Ann. de rinst. Pasteur t. XXI, 1907, no. 12, p. 1005). 122 Referate. XXV, 1. JH^ 1. Verf. gibt zu der üblichen Nährgelatine 0*3- bis O'öprozentige Glukose und verteilt die Masse in weiten Reagensgläsern, so daß jedes 30 bis 35 cc enthält. Im Wasserbad werden vor dem Ge- brauch die Gläschen auf 42*^ erwärmt und zu jedem wird 1 cc Serum (Kanin- chen oder Pferd), das vorher 20 Mi- nuten auf 55^ erwärmt worden ist, zu- gesetzt. Das zur Prüfung bestimmte Material wird auf dem ersten Kultur- gläscheu ausgesät und dann von diesem aus zur nötigen Verdünnung ein zweites, drittes und auch viertes geimpft. Hier- nach gießt man die Masse in die größere (Deckel-) Hälfte einer Petrischale aus und bedeckt mit der umgekehrten kleineren Hälfte (Fig. 1) : unter der Glasscheibe entwickeln sich die Anaeroben. Beim Sterilisieren der Schalen bringt man diese bereits in die der Gebrauchsweise entsprechende Lage ; das Ganze überdeckt man zweckmäßig noch mit einer größeren Schale (Fig. 2). Küster (Halle a. 8.), 2. X). Botanisches. Moll , J. W. , Die Fortschritte der mikroskopischen Technik seit 1870 (Progressus rei botanicae vol. H, 1908, H. 2, p. 227—292). Das zusammenfassende Referat des Verf., das zur Lektüre an- gelegentlichst empfohlen sei , bekommt dadurch besonderen Wert, daß er die historische Entwicklung der botanischen Arbeits- methoden klarlegt und ferner auf manche Verfahren, die zum Teil schon vor langer Zeit veröftentlicht worden sind, aber aus irgend- einem Grunde nicht das verdiente Interesse der beteiligten Fach- kreise gefunden haben, neuerdings aufmerksam macht und auf Grund seiner eigenen reichhaltigen Erfahrung empfiehlt. Aus dem ersten Kapitel (Allgemeine Übersicht über die Mikrotechnik um das Jahr 1870 und die Entwicklung derselben seit dieser Zeit) werden die Nachrichten über Arbeitsraum und Beleuchtung vielleicht am meisten interessieren. XXV, 1. Referate. 123 Im zweiten Kapitel stellt Verf. „einige wiclitige spezielle Me- thoden der modernen Mikrotechnik" zusammen und läßt uns hier und da seine Kritik (z. B. der Ansichten Fischers betreffend Bau und Fixierung des Protoplasmas) hören. Die meisten der dem Bo- taniker bekannten Methoden sind zunächst dem Gebiet der tieri- schen Histologie entlehnt und auf diesem in ihrer Feinheit aus- gebildet worden, verhältnismäßig wenige (besonders die plasmolytische Methode von de Vries, die Erhitzungsmethode und die Lösungsmethode WissELiNGHS, über dessen technische Neuerungen in dieser Zeitschrift ausführlich berichtet worden ist^) können als spezifisch botanische Methoden angesprochen werden. Auf die Einzelheiten des umfangreichen Referates kann hier nicht eingegangen werden ; ich beschränke mich darauf, im folgenden einige der wenig bekannten Methoden zu nennen, die Verf. anführt und zur Benutzung empfiehlt. Als vielseitig anwendbares Fixierungsmittel für Pflanzengewebe benutzt Verf. 0"25- bis einprozentige Chromsäure. Altmann -^ läßt kleine Organstückchen gefrieren und bei einer Temperatur von etwa — 30^ C über Schwefelsäure im Vakuum trocknen. Hiernach werden die Objekte ohne weiteres in Paraffin eingebettet. Auch in botanischen Laboratorien dürfte die Methode mit Vorteil anzuwenden sein. Tammes^ empfahl zum Fixieren Fluorwasserstoffsäure; eine Me- thode , sich Behälter aus Zelluloid , wie sie für die Aufbewahrung dieses Fixiermittels erwünscht sind, selbst herzustellen, haben Vosmaer und Wijsman angegeben.'^ Über ScHOUTES Methode, komplizierte Pflanzenzelluetze mit Hilfe von Mikrotomschnitten zu untersuchen , wurde in dieser Zeitschrift berichtet, ■' über des Verf. Methode, Mikrotommesser selbst zu schärfen, vergleiche seine Abhandlung über das Mikrotom Reinhold -Giltay^; 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XV, 1898, p. 265, 512; Bd. XVI, 1899, p. 506; Bd. XVII, 1900, p. 390; Bd. XIX, 1902, p. 257; Bd. XX, 1903, p. 493. ') Vgl. diese Zeitschr. Bd. VII, 1890, p. 199. 3) Über die Verbreitung des Carotins im Pflanzenreiche (Flora Bd. LXXXVII, 1900, p. 205). *) VosiiAER, G. C. J., a. Wijsman, H. P., On the structure of some sifieeous spicules of Sponges (Proceed. kon. Akad. Wet. Amsterdam 1905, vol. VIII, p. 17). ^) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 524. 6) Vgl. diese Zeitschr. Bd. IX, 1892, p. 455. 124 Referate. XXV, 1. Verf. bedient sich neuerdings beim Abziehen der Mikrotommesser fast ausschließlicli des aus Ammoniumeisensulfat gewonnenen Eisen- oxyds , die seinerzeit empfohlene Diamantine ist im Handel leider nicht mehr erhältlich. Als mikroskopische Präparate zweiter Ordnung bezeichnet Verf. solche , welche aus gewöhnlichen mikroskopischen Schnitten durch abermaliges Schneiden in bestimmter Richtung gewonnen werden. Die Präparate erster Ordnung werden in eine dünne Celloidiuschicht eingebettet und unter dem Mikroskop geprüft ; die Richtung, in der man beim Anfertigen der „sekundären" Präparate schneiden will, wird durch Beschneiden der Celloidinplatte augegeben 5 die Celloidin- platte wird dann gefärbt und in Paraffin eingebettet. WissELiNGHS Methoden werden zur Benutzung sehr empfohlen, die Bedenken , welche gegen seine Lösungsmethode gelegentlich ge- äußert worden sind, als unberechtigt zurückgewiesen. Küster (Halle a. S.). Wisselingh, C. V., Über die Karyokinese bei Oedogo- nium. Sechster Beitrag zur Kenntnis der Karyo- kinese (Beih. z. bot. Zeutralbl. Bd. XXIII, 1908, Abt. 1, H. 2, p. 137). Verf. arbeitet mit seiner Chromsäure-Lösungsmethode. ^ Fäden einer dicken Oedogonium-Art (Oe. cyathigerum) werden mit Flemming scher Flüssigkeit fixiert. Sie verbleiben in dieser mehrere Tage und werden dann mit 20prozentiger Chromsäure behandelt. Die früher vom Verf. angewandte 40- und öOprozentige wirken zwar schneller als 20prozen- tige, in welcher der Lösungsprozeß mehrere Stunden oder selbst einen halben Tag in Anspruch nimmt, lassen aber zu viel Bewegung in den Zellen zustande kommen. Das Kerngerüst der Zellwandung und der äußere Zellwandteil erleiden durch die Vorbehandlung mit der Fixierungsflüssigkeit Veränderungen derart, daß sie gegen Chrom- säure besonders widerstandsfähig werden. Die genannten Teile bleiben demnach erhalten, wenn das übrige bereits verschwunden ist. Später lösen sich auch noch die Teile des Kerngerüstes, das allmählich aus- einanderfällt. Gelegentlich färbte Verf. — nach Auswaschen der Chromsäure mit Wasser — mit Brillantblau extra grünlich. Küster {Halle a. S.). 1) Siehe oben p. 123, Ann. 1. XXV, 1. Referate. 125 Heiiizeiiing, 0., Der Bau der Diatomeenschale mit be- sonderer Berücksichtigung der ergastischen Gebilde und der Beziehung des Baues zur Systematik (Bibl. Botan. Heft 69, Stuttgart [1908], 3 Tflu.). Bei der Färbung der Diatomeenzellkerne hat Verf. nach An- wendung der Lauterborn sehen Methylenblaufjirbung keine guten Resultate erzielt , da sich gleichzeitig mit dem Zellkern auch das Zytoplasma färbte. Dagegen trat bei Pinnularia viridis-nobilis und Navicula radiosa nach Fixierung mit einprozentiger Osmiumsäure und Jodjodkalium c (nach A.Meyer, Praktikum der Bakterienkunde, 1903: 3 g Jod, 3 g Jodkalium, 20 cc Wasser) und nach Übertragen in Wasser mit Methylenblau 1 -[~ 10 (nach A. Meyer) und nachfolgendem Ent- färben mit einprozentiger Schwefelsäure gute Kernfärbung ein ; die Nukleolen waren etwas dunkler gefärbt. Nach Fixierung mit Flem- jsnNGScher Lösung und Färbung in Safranin treten die Nukleolen leuchtend rot hervor; die übrigen Bestandteile des Zellkerns bleiben schwächer gefärbt. In Pfitzers Pikrinsäure-Nigrosin färbt sich der Zellkern graubraun; zum Studium der feineren Strukturen ist das Verfahren nicht zu empfehlen. Die Fixierung des Zytoplasma s erreichte Verf. mit ver- schiedenen Mitteln. Osmiumsäure , schon von Pfitzer empfohlen, fixiert den Protoplasten fast unverändert und ist besonders am Platze, wenn die Präparate ungefärbt untersucht werden sollen. FLEMMiNGSche Lösung, Sublimat und Pikrinschwefelsäure sind anzuwenden, wenn die Präparate gefärbt und in Balsam eingeschlossen werden sollen ; der Färbung muß aber noch Härtung mit Alkohol vorausgeschickt werden; Pikrinschwefelsäure gibt weniger gute Resultate als die beiden anderen Mittel, Jodjodkali c färbt gut, macht aber die Prä- parate zu braun. Pikrinsäure-Nigrosin fixiert gut, ist aber für das Studium feinerer Strukturen nicht zu empfehlen. Alkohol ist zum Fixieren nicht zu gebrauchen, wohl aber zum Härten. Chloralhydrat treibt die Schalen auseinander, die Struktur des Plasmas wird zerstört. Die schon von Pfitzer beobachteten und von Lauterborn als Doppelstäbchen bezeichneten Einschlüsse der Diatomeenzelle erkennt Verf. als Doppelplatten. Zur Fixierung der Gebilde eignen sich am meisten einprozentige Osmiumsäure und FLEMMiNOSche Lösung; nachfolgende Färbung mit Safranin. Bei Untersuchung des Volutins folgt Verf. den von Meyer angegebenen Verfahren (insbesondere Methylenblau - Schwefelsäure- 12G Referate. XXV, 1. reaktion); er ergänzt Meyers Angaben über die Mikrochemie des Volutins. Weitere mikrochemische Mitteilungen des Verf. gelten den Pyrenoiden. Küster {Halle a. 8.). Wisselingli, C. V., Über den Ring und die Zellwand bei Oedogonium (Beih. z. botan. Zentralbl. Abt. 1, Bd. XXIII, 1908, H. 3, p. 157). Bei Oedogonium-Material, das „während einiger Zeit" in Flem- MiNG scher Fixieruugsflüssigkeit gelegen hat, ist der bekannte Cellulose- ring und der aus ihm hervorgehende Teil der Membran geschwollen und chemisch verändert , wie aus ihrem Verhalten verschiedenen Reagentien gegenüber hervorgeht. Liegt das Material „einige Tage" in derselben Lösung, so nehmen die genannten Teile eine ähnliche Modifikation an wie die Zellkerne und erweisen sich einer (z. B. 20prozentigen) Chromsäurelösung gegenüber besonders widerstands- fähig. Man vergleiche im übrigen p. 124 das Referat über v. Wis- sELiNGH. Küster {Halle a. S). Marpmann, G., Wie sammelt man rezente Meerwasser- diatomeen auf dem Festlande? (Zeitschr. f. angew. Mikrosk. Bd. XIII, 1908, p. 183). Verf. macht darauf aufmerksam, daß die Magen und Eingeweide vieler Seefische eine Fundgrube für viele interessante Plauktonorganis- men sind, bei deren Durchmusterung man je nach Heimat und Lebens- weise des vorliegenden Fisches die verschiedensten Formen antreffen kann. Verf. empfiehlt grüne Heringe, welche mit Eingeweide in den Handel kommen, zu untersuchen, ferner den Stint, frischen Schollen oder andere Plattfische , die ihrer Lebensweise entsprechend eine Masse Senkplankton liefern. Um die gewünschten Planktonorganismen von allerhand organi- schen Verunreinigungen zu befreien , verfährt Verf. folgendermaßen. Ein oder zwei Heringsmageu (mit allen anhängenden Teilen) werden in ein größeres Probiergläschen gebracht; man setzt 5 cc W^asser und eine Federmesserspitze Natriumsuperoxyd zu. Die Probe wird von Zeit zu Zeit geschüttelt und bleibt dann 24 Stunden stehen. Die Flüssigkeit ist dann meist völlig klar geworden , alle Gewebe sind zerstört. Verdünnt man hiernach mit Wasser, läßt absetzen oder zentrifugiert man, so ist die größte Menge der Diatomeen und Kalk- körperchen im Bodensatz zu finden. Ist aber die Flüssigkeit noch nicht geklärt, so kann mau noch etwas Natriumsuperoxyd zusetzen. XXV, 1. Referate. 127 oder iiiaii erwärmt die Flüssigkeit, bis Klärung eintritt. In beiden Fällen werden aber die Schalen der Diatomeen stark angegriffen. Besser ist es , die Lösung in der Kälte vor sich gehen zu lassen und nötigenfalls die Mischung 2 bis 3 Tage stehen zu lassen. Eine Kombination von Natriurasuperoxyd und konzentrierter Schwefelsäure gestattet, kleine Mengen organischer Substanz schon in wenigen Mi- nuten zu zerstören. Es bedarf bei dem Verfahren großer Vorsicht; das Natriumsuperoxyd darf man nur in kleinsten Körnchen in die Schwefelsäure fallen lassen. Küster {Halle a. S.). Marpmann, G. , Über Befunde von Benzoesäure in Piu- g u i c u 1 a vulgaris (Zeitschr. f. angew. Mikrosk. Bd. XIV, 1908, IL 1, p. 1). Pinguicula vulgaris gibt ein vortreffliches Material ab, um die Behrens sehe Methode zum Nachweis chemischer Stoffe in Form ihrer Sublimate zu prüfen und zu üben. Man legt auf eine Glimmerplatte (0*2 bis 0'3 mm Dicke und 30 X 80 mm Oberfläche) einen Metall- ring (15 bis 20 mm Durchmesser, 15 mm Höhe) und füllt eine kleine Probe des vorliegenden Materials getrocknet und zerrieben in die Zelle, die man mit einem Objektträger bedeckt. Der kleine Apparat wird auf eine Metallplatte gestellt und erwärmt. Es bilden sich bei Untersuchung der Pinguicula zunächst Dämpfe von Benzoesäure, Bernsteinsäure u. a., die man auf dem Objektträger in Form von Kriställchen niedergeschlagen findet. Bei kräftigerer Erwärmung entstehen eventuell neue Körper und diese können auf einem weiteren Objektträger aufgefangen werden. Mit Hilfe dieser Methode gelingt es, auch geringe Mengen von Teein in Teeproben nachzuweisen und eventuell Verfälschungen zu erkennen. Reguliert man mit Hilfe eines heizbaren Objekttisches die Temperatur genau und erhitzt man nur bis zum Siedepunkt der betreffenden flüchtigen Substanzen, so gelingt es, den einen von den andern Körpern getrennt aufzufangen. Küster {Halle a. S.). O" Oes, A. , Über die Autolyse der Mitose (Botan. Zeit Abt. 1, Bd. LXVI, 1908, H. 5 u. 6, p. 89). Oes erbringt in seiner interessanten Arbeit auf mikroskopischem Wege den Nachweis für die Existenz eines chromatolytischen Enzyms in den Pflanzenzellen, das bei Zusatz von Toluol, Chloroform, Karbol- säure , Kochsalz u. a. die angefangenen Mitosen auflöst und die Nukleine dabei wahrscheinlich auch tief spaltet. 128 Referate. XXV, 1. Verf. unterwarf Wurzelspitzen (Vicia faba u. a.) meist bei 32 bis 40 '^ in Toluol- oder Chloroformwasser (Vg '^is ^lo Vol.-Prozent) mit oder ohne Beigabe von Neutralsalzen (meist 0*5 Prozent Koch- salz) der Autolyse; die besten Resultate lieferte Toluolwasser mit 0*5 Prozent Chlornatrium bei 38^ C. Zum Fixieren der Objekte wurde in erster Linie FLEMraNGS Gemisch (stärkere Modifikation) gewählt; gefärbt wurde mit Safranin und Gentianaviolett, ferner mit Delafields Hämatoxylin, Heidenhains Eisenalaunhämatoxylin, Fuchsin, Säurefuchsin u. a. Die Veränderung der Kerne bei der Autolyse besteht darin, daß die färbbare Substanz in' den Chromosomen der Meta- und Anaphasen (inkl. Telophasen) abnimmt; viel langsamer werden Mutterkuäuel und ruhende Kerne angegriffen. Die Chromo- some werden weiterhin löcherig und schwinden schließlich ganz ; sie hinterlassen ein Negativ, in dem oft Körnchen liegen. Später verschwinden auch die Negative; vermutlich wird der von ihnen in Anspruch genommene Raum vom Zytoplasma ausgefüllt. ■ — Nach totaler Autolyse der Chromosome vermochte Verf. die Negative besonders bei Fixierung mit Platinchlorid (lOprozentig) und Flemming scher Lösung, mit Phosphorwolframsäure (Sprozentig) und Heidenhain scher Färbung, seltener mit Silbernitrat (2prozentig) und Färbung nach Delafield und mit Safranin nachzuweisen. Es wurde versucht, auf fixieranalytischem Wege Aufschluß über die Natur der Lösungs- und Spaltungsprodukte zu bekommen. Nur mit 3prozentiger Phosphor- wolframsäure erhielt Verf. Niederschläge in den Negativen ; Nukleine, Nukleinsäure , Albumine und Albumosen sind auszuschließen, da sie durch Flemming s Gemisch wasserunlöslich niedergeschlagen werden müßten ; Pepton hätte durch Sublimat oder Platinchlorid gefällt werden müssen ; da Chlorbaryum und Silbernitrat ebenfalls keine Niederschläge gaben, waren ferner Phosphate auszuschließen ; „durch das negative Resultat dieser beiden Versuche ist zwar nicht bewiesen, daß keine Phosphorsäure abgepalten wurde, da die freie Säure und ihre sauren Alkalisalze durch die genannten Reagentien nicht gefällt werden". Vielleicht hat man hinsichtlich des chemischen Charakters der Stoffe, durch welche in den Negativen Niederschläge mit Phosphorwolfram- säure erzeugt werden, in erster Linie an Hexonbasen zu denken. Ein an chromatolytischem Enzym armes Objekt scheint in den Pollenmutterzellen von Lilium candidum vorzuliegen. Die besten Resultate gab O'öprozentige Karbolsäure, zumal nach Kochsalzzusatz (0-25 bis 0-5 Prozent). Küster {Halle a. S.). XXV, 1. Referate. 129 JEJ. 3Ihiera1ogisch - Petrof/raphisches. Physikalisch es. Donau , J. , Über den Nachweis von Gold, Silber und den Platin metallen durch die Phosphorsalz- perle (Zeitschr. f. Chemie u. Industrie d. Kolloide Bd. II, 1908, p. 273—275). Der Verf. weist mikrochemisch das Gold dadurch nach , daß Asbest, welcher mit GoldchloridchlorwasserstofF getränkt und hierauf zum Glühen erhitzt wird, Purpurfarbe annimmt, die sehr hitzebeständig- ist und sich bei mikroskopischer Prüfung als ganz homogen erwies. Besonders empfindliche Nachweise gelangen dem Verf. durch Ver- besserung der Phosphorsalzperlenreaktion. In gewissen Temperatur- intervallen liefern die Metalle in dieser Perle die Färbungen kol- loidaler Lösungen , welche als Übergang zwischen äußerst feinen ultramikroskopischen Teilchen und größeren Molekülkomplexen hierbei auftreten. Unterbricht man das Erhitzen im Temperaturintervall des kolloidalen Zustandes, so bleibt dieser wegen des raschen Erhärtens der Perle längere Zeit hindurch bestehen und man kann z. B. beim Gold rubinrote , violette , blaue , grünliche Perlen erhalten , je nach der Zeit, während welcher die Perle flüssig war. Später wird infolge der Zusammenballung zu größeren, nicht kolloidal gelösten Teilchen die Perle farblos. Der Verf. prüfte die Färbungen auch mikro- skopisch und stellte hinsichtlich der goldhaltigen Perle fest, daß sie wohl bezüglich ihrer chemischen Natur, nicht aber bezüglich der Existenzbedingungen mit Goldrubinglas übereinstimmt (in diesem ist der kolloidale Zustand reversibel, in der Perle hingegen nicht). Beim Silber erhielt der Verf. nicht eine solche Mannigfaltigkeit von Färbungen wie beim Gold, vielmehr zeigten Glasflüsse, Fasern, wie auch Phosphorsalzperlen nur die bekannte Gelbfärbung bei Zusatz von Silber. Platin führte zu rehbraunen kolloidalen Färbungen, bei größeren Mengen war eine Opaleszenz im auffallenden Licht sichtbar. Die übrigen Platinmetalle zeigen Reaktionen, welche den des Platins selbst sehr ähnlich sind. Die Abhandlung enthält noch eine interessante Tabelle, in welcher die empfindlichsten Reaktionen der Edelmetalle [1) mikrochemische a. aus Lösungen , b. in Perlen , 2) spektralanalytische , 3) makro- Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXV, 1. 9 130 Referate. XXV, 1. chemische] hinsichtlicli ihrer Empfindlichkeitsgrenze miteinander ver- glichen werden. E. Sommerfeldt {Tübingen). Siecleutopf, H. , t'ber künstlichen Dichroisraus von blauem Steinsalz (Zeitschr. f. Chemie u. Industrie d. Kolloide Bd. II, 1907, p. 133— 1;;4). Der Verf. bestätigt den Befund Cornus, daß gefärbtes Steinsalz beim Ausüben von Druck pleochroitisch wird und bereichert die ein- schlägigen Beobachtungen durch Untersuchung der Polarisationszustände der einzelnen mittels des Ultramikroskops erkennbaren Teilchen. Wäh- rend bei nicht gepreßtem Steinsalz diese Polarisationszustände un- regelmäßig verteilt sind , ordnen sie sich bei Ausübung von Druck so, daß sie alle gleichmäßig je zwei senkrecht zueinander polari- sierte Farben aussenden, und zwar grün und orangerot. Die Polari- sationsebene der abgebeugten grünen Farbe liegt wie die in der gleichen Richtung hindurchgelassene rote Farbe, nämlich parallel zur gedrückten Hexaederfläche ; die Polarisationsebene der abgebeugten orangeroten Farbe liegt senkrecht zur gedrückten Hexaederfläche und ebenso wie die Polarisationsebene der in gleicher Richtung hindurchgelassenen Farbe. Zur objektiven Demonstration empfiehlt der Verf. die durch Kathodenstrahlen erzielte Blaufärbung, welche bis nahezu zur Un- durchsichtigkeit gesteigert werden kann und die Gestalt eines metallisch glänzenden Überzuges annimmt. Auch auf Flußspat lassen sich metallisch glänzende Überzüge, welche ganz ähnliche Eigenschaften wie die analogen dunkeln Schichten des Steinsalzes zeigen, mittels Kathodenstrahlen hervorbringen. E. Sommerfeldt {Tübingen). B-ohlaild, P. , Die Tone als semi permeable Wände und Mittel z u r K 1 ä r u n g von Fabrik- u n d A b w ä s s e r n (Zeitschr. f. Chemie u. Industrie d. Kolloide Bd. II, 1907, p. 177—179). Der Verf. hat besonders einen hochplastischen Ton von Striegau i. Schles. untersucht, dessen Zusammensetzung folgende ist: Glüh- verlust 13-407o, Kieselsäure 52-53''/o, Tonerde 29-01 7o, Eisenoxyd 3-43<^/o, Kalziumoxyd l'OO^o? Magnesia 0-02 ^o, Alkalien 1*01 ^/^ und findet, daß die Absorptionsfähigkeit der Tone um so größer ist, je plastischer sie sind und daß ihr Gehalt an Kolloidstoff'en mit dem Plastizitätsgrad in engster Beziehung stellt. Fabrikwässer, welche XXV, 1. Referate. 131 fettige Substanzen enthalten, lassen sich von ihrem Fettgehalt beim Filtrieren durch plastischen Ton gut befreien. Da gerade in diesen Fällen die elektrochemische Reinigungsmethode und diejenige der Berieselung versagen , kommt den Vorschlägen des Verf. praktische Bedeutung in den Betrieben der Spinnerei (Kämmprozeß) , Stärke- fabrikation, Gerberei, Färberei, Leimsiederei, Zuckerfabrikation, Papier- fabrikation und Brauerei zu. E. Sommerfeldt (Tübingen). 31ie, G., Die optischen Eigenschaften kolloidaler Gold- 1 ö SU n gen (Zeitschr. f. Chemie u. Industrie d. Kolloide Bd. II, 1907, p. 129 — 133 m. 3 Figg.). Um die vielerlei Faktoren zu bestimmen , welche für die Er- klärung der optischen Eigenschaften kolloidaler Lösungen in Betracht kommen, wurden für das Beispiel der kolloidalen Goldlösungen folgende Messungen ausgeführt: 1) Bestimmung der Absorptionskurve mittels des Spektralphotometers , 2) Ermittelung der Intensität des seitlich (d. h. senkrecht zu dem durch die Lösung gehenden Lichtstrahl) aus- gestrahlten Lichtes, 3) Abzahlung der Teilchen pro Kubikmillimeter im Ultramikroskop , 4) Bestimmung des Goldgehaltes durch Elektro- lyse. — Aus diesen Messungen zieht der Verf. die Schlüsse , daß die optischen Eigenschaften der rubinroten Lösungen sich durch die Annahme kugelförmiger Teilchen erklären lassen ; daß ferner das Gold dieser Lösungen eine ganz andere Absorption als festes Gold zeigt, daß die früher vielfach angenommene optische Resonanz zur Erklärung des Verhaltens dieser Goldlösungen nicht in Betracht kommt. E. Sommerfeldt {Tübingen). 9* 132 Neue Literatur. XXV, 1. 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Perles) 1908. 16 M., geb. 18 M. Kitt, Th. , Bakterienkunde und pathologische Mikroskopie für Tierärzte und Studierende der Tiermedizin. Fünfte, wiederholt verbess. u. um- gearb. Aufl. Wien (M. Perles) 1908. 15 M. Königer, H. , Die z3'-tologische Untersuchungsmethode, ihre Entwicklung und ilire klinische Verwertung an den Ergüssen seröser Höhlen. Jena (Fischer) 1908; IV, 112 pp., 8». 3 M. Rubenthaler, G, , Technique histologique et cytologique. 60 figg. Paris (Bailliere et Fils). 306 pp. S». 4.50 M. Whittaker, E. T. , l'he theory of optical Instruments. Cambridge (Univ. Pr.) 1907; VHI, 72 pp. 8^ (Vgl. Cambridge Tracts in Mathematics and Math. Physics, no. 7.) XXV, 1. Neue Literatur. I33 2. Mikroskop und mikroskopische Apparate. a. Neue Mikroskope. Marx, H., Ein handliches Obduktionsraikroskop (Zeitschr. f. Medizinalbeamte Jahrg. XX, 1907, No. 21, p. 744—745). Beck's „London" Microscope, Regent model (Journ. R. Microsc. Soc. 1908, pt. 2, p. 227; vgl. R. and J. 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Seit vielen Jalireu beschäftige ich mich mit Untersuchungen über die histologischen Färbungen und deren Theorie, und darf ich voraussetzen, daß meine ausführlichen Darstellungen, welche ich in meiner Arbeit: „Der Hy a linknor pel" (Anat. Hefte No. 82, 1905 [auch dänisch schon 1900]), über die Knorpel- und Binde- gewebsfärbungen gegeben habe, sowie meine Arbeit : „ÜberEisen- hämatein, Chromalaunhämatein, Tonerdealauuhäma- tein, Hämateinlösungen und einige Cochenillefarb- lösungen" (Zeitschr. f. wiss. Mikrosk. Bd. XXII, 1905, p. 45—90), hinreichend bekannt sind , so daß ich es unterlassen kann , schon früher Gesagtes zu wiederholen. Meine Untersuchungen über die M e t a c h r o m a s i e betreffen einen Spezialfall, welcher einigen Zusammenhang mit den Knorpel- und Bindegewebsfärbungeu hat, aber dennoch allgemeinere Bedeutung besitzt ; in diesem ersten Abschnitt gebe ich die allgemeinen Gesichts- punkte für die Metachromasie und deren Beurteilung, im zweiten Abschnitte folgt die speziellere Darstellung. Die Arbeit hat mich seit 1898 beschäftigt; vielfache Anregung habe ich dabei aus der fach chemischen Literatur , z. B. den Untersuchungen W. Ost- walds über die Farbe der Jonen und aus desselben Verfassers Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXV, i. 10 140 Hansen: Über die Ursachen der metachiomatischen Färbung. XXV, 2. „Die wissenscliaftliclien Grundlagen der analytischen Ciieniie" er- halten, sowie ans vielen Arbeiten, besonders in der Zeitschrift für physikalische Chemie n. a. , wie ich es bei dieser Ge- legenheit ausdrücklich hervorheben möchte, weil wir alle Histologen, welche in den letzten 10 Jahren die Theorie der histologischen Färbungen auszuarbeiten unternommen haben , wahrscheinlich aus denselben Quellen der fachchemischen Wissenschaft geschöpft haben — „ex unge leonem". Bekanntlich färben gewisse reine basische Farbstoffe, Methyl- violett, Thionin, Toluidinblau , sowie Neutralrot und Safranin, um nur einige der altbekanntesten zu nennen, gewisse Elemente wie Schleim, Knorpelgrundsubstanz und auch andere Ge- webe , wie man sagt , metachromatisch nicht mit der gewöhn- liehen Farbe des neutralen Farbsalzes violett oder blau bei den drei ersten , rot bei den zwei letzten , sondern in der Farbe der Farbbase, nämlich rot, bis purpur bei den drei ersten, gelb bei den zwei letzten. Verschiedene andere Farbstoffe zeigen ähnliches, aber ich halte mich hier an diesen fünf, wo die erwähnte Farbveränderung auch bei den reinen Farbstoffen auftritt , wo eine Verunreinigung mit anderen Farbstoffen (wie Fischer^ supponierte) nicht vorliegt. Um diese Metachromasie zu erklären, nimmt L. Michaelis" an, daß es sich nicht um eine Färbung mit der Farbbase handelt, denn Aväre das der Fall , müßte mau den Mastzellenkörnern eine starke basische Reaktion zuschreiben, so daß sie die Farbbase in Freiheit setzen konnten , aber man kann die rotgefärbten Mastzellengranula mit Salzsäure behandeln und dennoch behalten sie ihre rote Farbe, also ist es nicht die Färb base, welclie hier färbt. Deshalb nimmt Michaelis an , daß in einer wässerigen Lösung von Thionin sich ausschließlich oder fast ausschließlich die blaue Modifikation des Thioninfarbsalzes findet ; in einem Schleimmedium oder in den Mast- zellen findet sich eine tautomere Modifikation des Salzes,^ ^) Fischer, A., Fixierung, Färbung usw. 1898. 2) Enzyklopädie d. mikrosk. Technik Bd. II, p. 800—803. ^) Jüngst hat P. Köthig (Zeitschr. f. wiss. Mikrosk. Bd. XXIV, 1907, p. 109) beim Hämatoxylin das Auftreten einer Metachroiuasie besprochen und die Möglichkeit einer „Laktonbildung" als Ursache vermutet. Ehe ich diese Möglichkeit, die beim Hämatoxylin mir aus den gegebenen Daten durch- aus nicht hervorzugehen scheint, zu diskutieren vermag, müßte es bei XXV, 2. Hansen: Über die Ursachen der mctaeliromatischen Färbung. 147 nämlich eine hypothetische rotgefärbte Form des Thioninfarbsalzes von demselben Molekulargewicht und elementaren Zusammensetzung, aber von veränderter Strukturformel. Die Ursache der veränderten Farbe sucht Michaelis also in einer tautomer veränderten Konstitu- tiousformel des Farbsalzes, und er führt diesen Gedanken weiter aus unter Erörterung der Konstitutionsformeln auch anderer Farb- salze, z. B. des Methylvioletts. Ich gehe auf diese rein hypothetischen Erörterungen, deren Richtigkeit ich, beiläufig gesagt, nicht anerkennen kann, hier nicht näher ein, der Sachkundige möge die Stellen im Original nachsehen. Die Theorie Fischers, daß die Metachromasie auf Verunreinigungen der Farbstoffe mit anderen Farbsalzen beruhe, tritft für die von mir genannten Farbstoffe nicht zu. Dagegen haben meine eigenen Untersuchungen mich zu einem anderen Resultat geführt , ein Resultat, welches ich schon in einem Vortrage in der Kopenhagener biologischen Gesellschaft in der Sitzung von 17. Dezember 1903 ausführlich neben anderen meiner Untersuchungsresultate die mikro- technische Färbung betreffend veröffentlicht habe. (Der Titel des Vortrages lautete : „Über die wissenschaftlichen Grundlagen der mikroskopischen Färbungen.") Meine Resultate sind folgende : Die wässerigen (auch schwäch alkoholischen) Lösungen der ge- nannten basischen Farbsalze ^ sind teilweise hydrolytisch ge- spalten. Die wässerigen Lösungen enthalten außer den undisso- ziierten Farbsalzmolekülen und den jonisierten Farbsalzmolekülen zugleich Moleküle der freien hydrolytisch gebildeten Farbbase in undissoziiertem Zustande (und natürlich eine ent- sprechende Anzahl der Moleküle der freien Säure oder deren Jonen). Diesem Gehalt der Lösung an freier hydrolytisch gebildeter Farbbase verdanken die wässerigen Lösungen von Methylviolett, Thionin, Toluidinblau ihren violetten oder purpurnen Farbton, welcher Farbton also eine Mischfarbe aus der blauen des reinen undissoziierten Farb- den Versuchen von Röthig ausgeschlossen sein, daß sich in seiner Häma- toxylinlösung nicht kleine Mengen von Hämatein gebildet hätten bei den ziemlich eingreifenden Prozeduren, welchen er seine Hämatoxylin- lösungen unterzogen hat, und wo eine teilweise Oxydation des Hämatoxylins mir sehr naheliegend erscheint. ^) Ähnliches gilt für andere Farbstoffe (auch saure), ich habe mehrere davon untersucht , beschränke mich aber hier der Einfachheit halber auf einige besonders typische. Auch das Nil blau ist hydrolytisch gespalten, darüber im Abschnitt II. 10 * 148 Hansen: Über die Ursachen der metachromatischen Färbung. XXV, 2. Salzes oder der positiven Farbjonen und der roten Farbe der hj'dro- lytiscli gebildeten Farbbase ist ; denn die Farbe der freien Farbbase in wässeriger Lösung ist rot oder purpur. Mit steigender Konzen- tration der Lösnng wächst der absolute Gehalt an freier Farbbase im großen und ganzen nach den bekannten Regeln für hydrolytische Dissoziation. Bei Verdünnung mit hinreichend reinem destil- liertem Wasser wird die Farbe immer mehr blau , indem die Mole- külen der Farbbase ähnlich den Farbsalzmolekülen jonisiert werden, wodurch die Farbe der Lösung sich der Farbe des Farbsalzmoleküls, resp. der des elektropositiven FarbstoflPjons nähert (die negativen Jonen usw. z. B. sind ja farblos).-^ Ganz Analoges gilt für die roten Farbstoffe — beispielsweise Neutralrot und Safranin, wo die freie Farbbase gelb ist. Bei anderen basischen Farbstoffen, wo die freie Base nur seh v/ ach gefärbt ist, gibt sich diese hydrolytische Spaltung nicht annähernd so deut- lich dem Auge kund durch die geringfügigere Änderung des Farb- tones der wässerigen Farbsalzlösung bei der Verdünnung z. B., oder gegenüber den stark alkoholischen Lösungen, wo die Hydrolyse zurückgedrängt ist. Als Beispiele dieser Art nenne ich das reine Methylenblau mit schwach rotgefärbter Base, das Malachit- grün mit schwach gelbbraungefärbter Base, das Methylgrün mit farbloser Base , das Fuchsin und das R h o d a m i n mit farbloser Base. Solche Farbstoffe zeigen, wenn rein," bekanntlich keine Metachromosie. Endlich sind zu nennen die basischen Farbstoffe, wo die freie Base annähernd dieselbe Farbe zeigt wie das Farbsalz ; bei solchen gibt sich die Hydrolyse dem Auge nicht so leicht zu erkennen, auch zeigen sie keine ausgesprochene metachromatische Färbung der Gewebe, obwohl eine starke Hydrolyse der wässerigen Lösungen mit passenden Mitteln nachweisbar ist, wie ich im zweiten Abschnitte zeigen werde. Diese hier erörterten Verhältnisse sind nicht theoretisch ausgeklügelte , sondern lassen sich durch einfache Versuche demonstrieren. Die met ach romatischen Färbungen mit den anfangs genannten Farbstoffen beruht nun darauf, daß gewisse histologische ^) Anders verhält es sich natürlich, wo das negative Jon selbst ge- färbt ist , z. B. bei den beliebten Farbkompositionen aus einer Farbbase und einer Farbsäure (z. B. eosinsaures Methylenblau). ■•^) Ich habe alle diese Farbstoffe in gereinigtem Zustande untersucht. XXV, 2. Hansen: Über die Ursachen der metachromatischen Färbung. 149 Bestandteile — um nur die bekanntesten anzuführen, nenne ich: Schleim und Schleimgranula, Knorpelgrundsubstanz, Mastzelienkörner und Amy- loid (aber bekanntlich gibt es gelegentlich auch viele andere) — , die in den wässerigen Farblösungen also schon vorhandenen, hydro- lytisch gebildeten freien Moleküle der Farbbase im besonderen Grade aufspeichern und sich daher im Ton der freien Farbbase besonders stark färben. Ich betrachte diese Aufspeicherung als eine Asso- ziation zwischen der Farbbase und den genannten Gewebssub- stanzen, also als eine chemische obwohl in der Regel ziemlich lockere Bindung (aber keine Salzbildung). Als wohlbekannte Analogien führe ich an Assoziation von Kristall- wasser. Aber außerdem ist es meine Ansicht, daß wir es hier mit einer ungleichen, auswählenden L ö s 1 i c h k e i t zu tun haben (wofür ja auch Analogien^ in Hülle und Fülle in der Chemie vor- liegen) , indem die Farbbase nach dem Verteilungskoeffizient sich vorzugsweise in die sich metachromatisch färbenden Substanzen auf- speichert und löst, also darin einwandert und verbleibt. Ganz, wie wenn man eine organische Base, z. B. ein Alkaloid aus seiner wässe- rigen Lösung mit einem geeigneten Lösungsmittel ausschüttelt, oder wie (s. später) wenn ich seinerzeit" die schwach braungelblich ge- färbte Malachitgrünbase oder die farblose Rhodaminbase z. B. mittels Xylols oder Benzins aus seiner wässerigen alkalischen Lösung aus- schüttelte , um diese Xylolbaselösung für die Färbung von wasser- freien Knorpelschnitten in Xylol zu gebrauchen, wodurch ich schon im Jahre 1899 eine echte Bildung von grün oder rot gefärbtem Färb salz in den Knorpelschnitten bekam (vgl. meine Arbeit von 1900 oder 1905). — Oder wie ich eben aus den rein wässerigen, nicht alkalisch gemachten Lösungen von Methylviolett, Thionin, Toluidinblau , Neutralrot, Safranin usw. mittels Xylol, Chloroform, Benzin usw. die rote resp. gelbe Farbbase auszuschütteln vermochte^, und durch Anfärben von wasserfreien Knorpelschnitten oder anderen Gewebsschnitten aus Xylol in den sicher wasserfreien Xylolbasen- lösungen die Anwesenheit* der freien Farbbase in der Xylollösung ^) Ich betrachte diese metachromatische Färbung ganz wie die so- genannten Fettfärbungen mit Sudan, Alkanna. -) Vgl. meine Arbeit von 1900 (oder 1905, p. G05-606f.). **) Dieses ist die richtige Erklärung, dagegen kann von einer Aus- schüttelung, z.B. eines „roten" Farbstoffes als „Verunreinigung", wie andere analoge Fälle gedeutet worden sind, durchaus keine Hede sein. *) Aus diesen Xylolbasenlösungen läßt sich das Farbsalz mittels Hinein- leitung von luftförmigen Chlorwasserstoffs im Xylol bilden und ausfällen. 150 Hansen: Über die Ursachen der metachromatischen Färbung. XXV, 2. und durch Färbung der Gewebeschnitte im Ton der F a r b s a 1 z e (also blau oder rot) eine echte chemische Färbung durch Salzbilduug erzielen konnte unter den eiuwandfreiesten Bedingungen. Die Abhängigkeit der Hydrolyse von der Anwesenheit des Was- sers erklärt die bekannte Unbeständigkeit vieler dieser metachroma- tischen Schleimfärbungen usw. Alkohol , Glyzerin , sowie andere energische Entwässerungsmittel vernichteten vielfach die Meta- chromasie. Es erklärt sich ferner, daß eine Metachromasie dieser Art sich am besten erhält in wasserhaltigen Einschlußmedien , in essigsaurer Kalilösung (welche selbst stark hydrolysiert ist) z. B. und daß beispielsweise die rote Thioninmetachromasie, sowie die Toluidin- blaumetachromasie sich hält, wenigstens für einige Zeit, sobald man die gefärbten Präparate unmittelbar in eine Mischung von Xylol und Alkohol absol. bringt, in welcher Mischung einige Prozente Wasser klar gelöst (dies ist angängig) worden sind, und nun hierin zum größten Teile aber nicht absolut entwässert und nachher in reines Xylol und schließlich in Balsam überführt. Durch diese Prozedur wird eben die Hydrolyse nicht ganz auf- gehoben, die rote Farbe hält sich wenigstens im Sclileim und in Mastzellenkörnern, sowie in der Knorpelgrundsubstanz, welche Spuren von Feuchtigkeit fester behalten. L'ber die sogenannte Fixierung der Metachromasie und ihre wahre Bedeutung werde ich später berichten. Ferner bildet der Umstand, daß verdünnte Säuren in wässeriger Lösung die z. B. rote metachromatische Färbung bei blauen Farb- stolfen nicht aufheben , kein Argument gegen den basischen (im gewöhnlichen chemischen Sinne, nicht im Sinne Ehrlichs) Zustand der roten Farbe, denn ich habe u. a. bei Methylviolett, Toluidinblau, Thionin gefunden, daß erst von einer gewissen^ oft ziemlich großen Konzentration des Säuregehaltes an die hydrolytische Abspaltung der freien Farbbase so sehr zurückgedrängt wird, daß sie fast unmerk- lich wird ; also braucht eine schon (in einem gefärbten Schnitte) ein- getretene metachromatische Rotfärbung (resp. Gelbfärbung) in gewissen Gewebselementeu wie Schleim, Mastzellenkörner, Knorpel usw. nicht sogleich (auch nicht bei vergrößertem Säuregehalt der Farblösung) rückgängig gemacht zu werden. Am widerstandsfähigsten scheint mir fast die Mastzellenkörnermetachromasie zu sein. Wir dürfen aus diesen Verhältnissen schließen, daß in solchen Gewebselementeu eben die rela- tive Löslichkeit der Säure und der Farbbase anders ist als außerhalb. XXV, 2. Hansen: Über die Ursachen der metachromatischen Färbung. 151 Auch habe ich vielfach gefunden, daß ein ziemlich großer Essig- säurezusatz zur Farblösung, ja selbst ein nicht unerheblicher Gehalt der wässerigen Farblösung an Salzsäure , Schwefelsäure usw. nicht die metachromatische Färbung verhinderte. Auch hier zeigen ver- schiedene Elemente bei steigendem Säuregehalt der Farblösung die Einbuße der Metachromasie früher als andere , dessen Aufspeiche- rungsvermögen für die freie Farbbase bei gegebener Konzentration der Säuremoleküle größer ist. Erst wenn die Konzentration des Säuregehaltes so groß geworden ist, daß die Hydrolyse des Farb- stoffes in der Lösung stark zurückgedrängt worden ist, wodurch der Gehalt der Lösung an freier Farbbase sehr gering, eventuell fast Null geworden ist, tritt die Metachromasie der Gewebselemente nicht mehr ein. Einfache Verdünnung mit Wasser genügt, um die Hydro- lyse wieder hervorzurufen, indem die Konzentration der Säuremoleküle herabgesetzt wird, und die Metachromasie stellt sich sogleich wieder ein. Wir haben es also auch hier zu tun mit einem Falle des von den ^lassenverhältnissen abhängigen variierenden Gleichgewichtes^ (loc, cit. p. 629 ff.). Es ist ferner klar , daß gelegentlich auch andere Bestandteile eines Gewebes als die , welche gewöhnlich eine metachromatische Färbung zeigen, die Fähigkeit haben können, die in der Farblösung vorhandene freie Farbbase aufzuspeichern, resp. sich metachromatisch färben können. Es wird jedem praktischen Mikroskopiker eine solche akzessorische Metachromasie vielfach aufgefallen sein , und ebenso daß diese Metachromasie manchmal so ausgesprochen sein kann, wie die par excellence des Schleimes, des Knorpels und der Mastzellenkörnelung. Die Art der Fixierung spielt hier ja eine große Kolle. Ferner beobachtet man diese akzessorische Metachromasie, z. B. bei dem Bindegewebe, den glatten Muskeln, auch bei den ruhenden ^) Dies ist von mir gelegentlich der Knorpelfärbungen mit angesäuerten basischen Farbstoff lösungen ausführlich dargelegt worden, ebenso bei der eingehenden Begründung meiner (nicht van Gieson!) Bindegewebsfärbung mit Säurefuchsin-Pikrin. Bezüglich dessen verweise ich auf mein dänisches Werk: Den hyaline Bruskgr undsubstans, Kopenhagen 1900, oder dessen deutsche Ausgabe: Der Hyalinknorpel (Anat. Hefte, No. 83, 1905, besonders p. 603 f. u. GlTff. u. p. 629—634 u. p. 637—640). Meines Wissens war dieses in der histologischen Mikrotechnik das erstemal (1900), wo bei einer histologischen Färbung durch bewußte quantitative Versuche das Gesetz der Massenwirkung als geltend nachgewiesen wurde. Freilich scheint dieser Abschnitt meiner Knorpelarbeit fast unbekannt zu sein. 152 Hjvnsen: Über die Ursachen der metachromatischen Färbung. XXV, 2. Zellkernen und Zellen, an koagulierten Gewebsflüssigkeiten, an Sekreten usw. , wenn man die basischen Farbstotfe in wässeriger Lösung verwendet und die Farbtiüssigkeit schon größtenteils vom Schnitte abgetropft ist, das Präparat aber noch nicht mit destilliertem Wasser abgespült worden ist ; die akzessorische Metachromasie ist dann in maximaler Ausbreitung vorhanden , sie schwindet aber in vielen Gewebsbestandteilen durch die Abspülung in (destilliertem) AVasser, weil das Wasser die Farbbasemoleküle dissoziiert und nach- her die Farbe eines Farbsalzes oder eines freien Jons erscheint. Wir haben also wenigstens drei verschiedene Grade der Meta- chromasie bei jedem basischen Farbstotfe und bei jeder Fixierung 1) eine solche, die in reinem Wasser schwindet, 2) eine, die sich dem dissoziierenden Einflüsse des Wassers gegenüber behauptet, 3) eine, die auch einem Säurezusatz widersteht, wobei das verschie- dene Verhalten den verschiedenen Säuren (z. B. die schwache, wenig jonisierte Essigsäure und andere schwache organische Säuren und die stark jonisierten Mineralsäuren) gegenüber, abhängig von dem Jonisierungsgrade und der Konzentration der Jonen in erster Linie zu beachten wäre. Daß hier die Temperatur eine große Rolle, ebenso wie bei der Hydrolyse spielt, muß in Rechnung gezogen werden ; auch dies läßt sich durch Versuchsfärbungeu unter dem Mikroskope beobachten. Die Abhängigkeit der Metachromasie von der Anwesenheit von Wasser läßt sich sehr scliön bei der Entwässerung demonstrieren ; ist bei der Entwässerung, z. B. mittels Alkohols (oder durch vor- sichtiges Austrocknen im Exsikkator oder über eine warme Metall- platte) , die Metachromasie ganz oder teilweise geschwunden , wie unter dem Mikroskope zu sehen ist, kann man augenblicklich fast die Metachromasie wieder hervorrufen durch Wasserzusatz oder durch Wasserdampf. Die Hydrolyse tritt ja also auf. Endlich möchte ich in diesem Zusammenhang noch erwähnen, daß man sehr häufig eine doppelte Bindung der Farbe an den Ge- websbestandteilen findet, indem sowohl eine Bindung des Farbstoft'es in der Form eines F a r b s a 1 z e s und mit dessen Farbe (also blau, resp. rot) als auch eine Aufspeicherung der freien Farbbase mit deren Farbe (also rot, resp. gelb) in denselben Gewebsbestand- teilen statt hat. Dieser Fall, welcher meinen Erfahrungen nach, wenn die Präparate in der wässerigen Farblösung untersucht werden, der häufigste sein dürfte, weist eine ganze Reihe von Übergängen auf von der fast reinen salzförmigen Bindung in dem Ton des Färb- XXV, 2. Hansen: Über die Ursachen der metachrouiatischen Färbung. 153 Salzes auf der einen Seite bis zur fast reinen Basenassoziation in dem Ton der freien Farbbase. Die ausgesprochenen Zwisclienstadien der doppelten Farbbindung' in der Form als Salz und als Base geben natürlich eine mehr weniger ausgesprochene Mischfarbe, bei Methjiviolett, Toluidinblau und Thionin also einen mehr violetten , resp. r 1 v i 1 e 1 1 e n Farbton, bei Safranin und Neutralrot einen mehr orangenen, resp. scharlachroten Ton, wenn man die Präparate in der wässerigen Losung untersucht. Bei der nun folgenden Nachbehandlung mit Alkohol schwindet der Mischton , welcher von der Anwesenheit der freien Farbbase her- rührte, an den meisten Stellen, indem die Hydrolyse zurückgedrängt wird. Es erklärt sich so zum großen Teil die Änderung der Farb- nuance, welche bei den genannten basischen Farbstotfen, wenn man die Präparate in Xylol und in Balsam überführt, deutlich wird. Da ich also meine, daß der physikalisch-chemische Zustand der Farblösungen eine große, vielleicht die grijßte Rolle beim Auftreten der Metachromasie spiele , da ferner ein Wassergehalt und die da- durch bedingte Hydrolyse des Farbstotfes von ausschlaggebender Bedeutung ist, versteht man wie unsicher alle Schlüsse aus diesem Verhalten eines Gewebsbestandteiles sein müssen. Aus dem Auftreten einer M e t a c h r m a s i e kann man meiner Meinung nach eigentlich nur schließen, daß der betreffende Gewebsteil die freie in der Farb- lösung hydrolytiscli entstandene Farbbase zu ad- dieren, a ufzusp eich er n vermag. Woran das liegt, in welcher Eigenschaft des Gewebsteiles dieses Verhalten begründet sein mag, darüber muß man in jedem speziellen Falle Untersuchungen anstellen. Vielleicht beruht es auf einem ge- wissen im gegebenen Falle besonders sich geltend machenden moleku- laren Zustand, wie ihn „Schleim" z. B. oft zeigt, ebenso wie Knorpel- grundsubstanz und die Mastzellenkörnelung; daß „schleimähnliche" Substanzen nicht immer eine Metachromasie zeigen , besagt selbst- verständlich nichts gegen ihre chemische Natur als „Schleim", ebenso- wenig wie man berechtigt wäre, mikroskopische Tropfen von Xylol, Chloroform, Benzol usw., die in einer wässerigen Thioninlösung ver- teilt sich unter dem Mikroskope metachromatisch rotgefärbt zeigen, als „mucinös" zu bezeichnen. [Eingegangen am 22. Juli 1908.] 154 Fischöl: Über eine vitule und spezitisclie Nervenfärbung. XXV, iJ. Über eine vitale und spezitisclie Nervenfärbung. Von Alfred Fischel. Wir besitzen bekanntlich im Methylenblau ein Mittel , um Nerven beim lebenden Tiere zu färben. Diese Färbung ist aber keine spezifische, da das Methylenblau außer den Nerven auch noch andere Gewebselemente hierbei mitfärbt. Es ist mir nun gelungen, einen Körper zu ermitteln, mit wel- chem man eine vitale und gleichzeitig auch spezifische Nervenfärbung erzielen kann. Dieser Körper ist das Alizarin (Alizarinum siccum). Die Objekte, an welchen ich bisher mit diesem Farbstoffe positive Resultate erhielt, sind Cladoceren. In einfachster Weise läßt sich bei diesen Tieren eine Nerven- färbung schon erzielen, wenn man in das Wasser, in dem man die Tiere hält, etwas Alizarinpulver schüttet. Nach einigen Stunden, spätestens am nächsten Tage, wird man in der so entstandenen gelb- lichen Lösung Tiere vorfinden, bei welchen wenigstens einzelne Teile des Nervensystems dunkelviolett gefärbt sind. Die Zahl der gefärbten Tiere und die Färbungsintensität nehmen allmählich noch zu. Bessere Resultate lassen sich mit reinen Alizarinlösungen er- zielen. ]Man erhält dieselben, indem man in siedendes (Leitungs-, eventuell destilliertes) Wasser Alizarin im Überschusse zusetzt, dann noch eine Zeitlang aufkochen läßt und nachher filtriert. Die noch nicht filtrierte Lösung soll eine dunkelviolette Farbe besitzen, die filtrierte ist viel heller. Vom Alizarin löst sich nur wenig, etwa 0*01 g in 250 cc Wasser. Setzt man es vor dem Erhitzen dem Wasser zu, so löst sich noch weniger, und die Wirkung der Lösung ist infolgedessen geringer. Nach dem Erkalten der Lösung setzt man von ihr mindestens das gleiche Volumen dem Wasser zu, in dem sich die Tiere be- finden. Die Färbung der Nerven tritt zeitlich in derselben Weise ein, wie dies oben geschildert wurde. Das im Handel vorkommende Alizarinum siccum ist kein reines Produkt, es ist vielmehr in verschiedenem Grade, und zwar liaupt- XXV, 2. Fischel: Über eine vitale und spezifische Nervenfiirbung. 155 sächlich mit Flavo- und Anthrapurpnrin verunreinigt. Um zu er- mitteln, was das eigentlich färbende Prinzip des Alizarinum siccum ist, habe ich Färbiingsversuche einerseits mit reinem Purpurin, ander- seits mit chemisch reinem Alizarin (Kahlbaum) augestellt. Die erst- erwähnten sind negativ, die letzteren positiv ausgefallen. Es handelt sich also um eine Wirkung des Alizarins, die aber durch die Bei- mengung von Purpurin nicht geschädigt wird. Die gefärbten Nerven sehen, wie erwähnt wurde, dunkelviolett aus. Es ist das ein Farbenton, den die Alizarinlösung dann an- nimmt, wenn man sie leicht alkalisch macht. Dieser Umstand legt die Vermutung nahe, daß auch die Färbung der Nerven durch Alka- leszenz zustande kommt : Ein schwach alkalisch reagierender Bestand- teil der Nervensubstanz verwandelt vielleicht die Farbe des Alizarins in Dunkelviolett. Der Farbstoff haftet im Nerven an Schollen und Körnchen von verschiedener Größe und Gestalt. Es handelt sich hier um eine Färbung der feinkörnigen „molekularen Nervensubstanz" selbst. Eine Fibrillenfärbung ist insofern erzielbar, als oft auch die feinsten End- zweige der Nerven sichtbar werden ; doch werden hierbei wohl nicht die Fibrillen selbst gefärbt, sondern nur jene feinen Plasmagranula („perifibrilläre Substanz"), in welchen die Fibrillen offenbar einge- bettet liegen. Die Resultate dieser Färbungsmethode sind außerordentlich schöne und instruktive. In den großen Muskeln z. B., welche die Ruderantenne bewegen, lassen sich die baumartig verzweigten Nerven zur Gänze übersehen; in den Ruderantennen selbst sieht man sowohl die zu den Muskeln zielienden, als auch die zu Ganglien ziehenden, offenbar sensiblen Nerven ; da auch die zentralen Ursprungszonen der Nerven durch Farb-Granula sichtbar werden, und ferner gewisse Nerven-Endorgane den Farbstoff annehmen können, lassen sich einzelne Systeme färberisch — beim lebenden Tiere — vollkommen zur An- schauung bringen. Ebenso lassen sich einzelne Nervengeflechte und Ganglienzellen auf diese Weise sichtbar machen. Betreffs der näheren Schilderung dieser Resultate verweise ich auf meine soeben erschienene Arbeit: Untersucliungen über vitale Färbung an Süßwasser- tieren, insbesondere bei Cladoceren. (Mit 2 Tafeln und 8 Figuren im Texte.) Leipzig, Verlag Dr. W. Klinkhardt^ ^) Separat und in der „Internat. Revue der gesamten Hydrobiologie" Bd. I, H. 1, erschienen. 15G Fischel: Über eine vitale und spezifische Nervenfiirbung. XXV, 2. Leider besitzt die Methode auch Nachteile. Der eine besteht darin, daß die Wirkung der Farblösuug eine sehr verschiedene ist: In ein und derselben Lösung findet man neben gut gefärbten Tieren auch solche, deren Nervensystem nur zum Teile oder gar nicht ge- färbt ist. Dieses Schwanken der Reaktion deutet darauf hin, daß ihr Eintritt nur bei ganz bestimmten chemischen Vorbedingungen möglich ist. Hier spielen wohl in erster Linie die in den ver- schiedenen Jahreszeiten wechselnden Ernährungszustände und StotF- wechselprozesse eine Rolle , vielleicht in der Art , daß das Nerven- system hierbei lokal und funktionell verschiedene Alkaleszenzgrade aufweist. Ein weiterer Nachteil ist der, daß es mir — bisher wenigstens — nicht gelungen ist, diese Nervenfärbung auch bei anderen Tier- arten zu erzielen. In dieser Hinsicht bedarf es noch weiterer Ver- suche. Sollte es sich übrigens herausstellen, daß das Alizarin nur bei den Cladoceren die Nerven färbt, so wäre auch dieser Nachweis sehr interessant, da es sich um eine ganz spezifische Art-Reaktion handeln würde. Es wäre das um so interessanter, als das Methylen- blau gerade als Nervenfärbungsmittel, nicht als vitaler Farbstoff im allgemeinen (siehe die zitierte Arbeit), bei den Cladoceren versagt. Vielleicht besteht in der Wirkung dieser beiden Farbstoffe auf die Nerven ein Gegensatz, der sich für die Ermittelung chemischer Ver- hältnisse verwerten ließe. Sollten die weiteren Versuche auch lehren, daß die Methode nur für eine ganz beschränkte Zahl von Arten verwendbar ist, so läßt sich doch jetzt schon sagen, daß diese Färbungsmethode außer- ordentlich interessant und prinzipiell wichtig ist. Denn sie stellt eine vitale und gleichzeitig auch eine spezifische Reaktion dar. Das erstere aus dem Grunde, weil die Nervenfärbung vom lebenden Tiere ohne jeglichen Schaden vertragen wird und die gefärbten Nerven ihre Funktionen auch weiterhin ausüben; die in ihnen gefärbten Ge- bilde ändern dabei ihr Aussehen nicht. Spezifisch aber ist die Methode deshalb, weil nur Elemente des Nervensystems, nicht auch solche anderer Organsysteme den Farbstofi' annehmen, und weil die Granula, die sich mit dem Alizarin färben, von ganz anderer Art sind, als die mit den übrigen Vitalfarbstoffen in den Zellen darstell- baren Gebilde. Eine Methode, welche gleichzeitig vital und spezifisch wirkt, war bisher nicht bekannt. Der Nachweis, daß sie möglich ist, scheint mir technisch und prinzipiell wichtig zu sein. Es ist in dieser Hinsicht XXV, 2. Winiwarter-Sainmont: Über Flemmingsche Dreifärbung. 157 von weiterem Interesse, daß man, wie in der oben genannten Arbeit näher ausgeführt wird, auch imstande ist, durch Alkalisierung, bzw. durch Ansäuerung der Alizarinlösung eine spezifische Färbung von bestimmten, otfenbar funktionell ungleichAvertigen Abschnitten der Kiemen der Cladoceren zu erzielen. Weitere Versuche sollen lehren, ob sich solche vitale und spezifische Reaktionen auch für andere Organe oder Tierarten er- mitteln lassen. Prag, Anatom. Institut, Juni 1908. [Eingegangen am 2G. Juni 1908.] Erfahrungen über die Flemmingsche Dreifärbung. Von Hans T. Winiw arter u. G. Sainmont, Enibryologisches Institut der Kgl. Staatsuniversität in Lüttich. Seit einigen Jahren scheint die Dreifärbung mikroskopischer Schnitte nach Flemming ziemlich in Vergessenheit geraten zu sein, namentlich weil eine Reihe von Autoren ungünstige Resultate mit dieser Methode zu verzeichnen hatten, um einige der schärfsten Urteile anzuführen, verweisen wir u. a. auf Skrobansky (Arch. f. mikr. Anat. Bd. LXII), V. BoNNEY (ViRCHOws Arch. Bd. CLXXXV) und besonders auf das bekannte Werk von Meyer und Lee (Mikr. Technik.) : sie alle stimmen darin übereiu , das Verfahren als „unsicher , langwierig, mühevoll''', ja sogar als ungeschickt zu bezeichnen, und ihm höchstens ästhetischen Wert zugestehen, da andere P'ärbemittel, wie z. B. das Eisenhämatoxylin ebensoviel und ebensogutes leisten, ohne seine Nach- teile zu besitzen. Wir können uns dieser abfälligen Kritik nicht anschließen. Die Flemming sehe Dreifärbung hat uns in den verschiedensten Gebieten so ausgezeichnete Bilder geliefert, daß wir gerade dieses Verfahren als eines der besten auf das wärmste empfehlen müssen. Übrigens sollte der Umstand, daß ein so gewissenhafter Forscher w4e Flemming auf seine Methode Gewicht legte , allein schon diejenigen zur Vor- 158 Winiwarter-Sainiuont: Über Flemraingsche Dreifärbung. XXV, 2. sieht mahnen , welehe sie ohne weiteres als unpraktisch verwerfen wollen. Allerdings hängt es bei der Durchführung derartiger tech- nischer Vorschriften sehr oft von gewissen Kunstgriffen ab, ob man gute oder schlechte Resultate erzielt, und gerade diese Kunstgriffe, sei es mit Absicht oder nicht, bleiben in der Regel unerwähnt. Wir haben die Dreifärbung seit etwa 12 Jahren fortwährend angewandt ; die ersten Male mißglückte sie oft, nicht weil die Methode an und für sich unsicher ist, sondern weil Flemjiings Vorschriften nicht genügend genau waren , so daß wir die zum Gelingen unbe- dingt nötigen Kunstgriffe selbst mühsam auffinden mußten. Seither haben wir das Verfahren ziemlich modifiziert ; es liefert uns jetzt genau bestimmbare Resultate. Wir glauben den Cytologen einen Dienst zu erweisen, indem wir unsere Technik im Detail beschreiben, und hoffen, daß sie mit dieser in Mißkredit geratenen Methode ebenso sichere Erfolge erzielen werden, wie wir sie erzielt haben. Zuerst einige Worte über Fixierung. Die Dreifärbung wird speziell nach Flemming scher Lösung gebraucht; sie kann aber nach irgendeinem anderen Fixierungsmittel (Zenker, Sublimat usw.) in An- wendung kommen, wenn man die aufgeklebten Schnitte 24 Stunden in Flemming sehe Lösung legt und etwa 20 Minuten in strömendem Wasser auswäscht. Wird das FLEMMiNGSche Gemisch direkt gebraucht, so muß es mindestens 24 Stunden einwirken, die Präparate können aber auch unbeschadet tage- und wochenlang in der Flüssigkeit verbleiben. Die für das Gelingen der darauffolgenden Färbung wichtigste Bedingung ist das Auswaschen. Die Größe des fixierten Stückes kommt dabei weniger in Betracht, wenigstens nach unserer Erfahrung. Wir haben mehrere zentimeterlange Embryonen in toto fixiert, ebenso Hautstücke, ziemlich große Tumoreubestandteile usw., und haben stets gut kon- serviertes Material erhalten. Das Auswaschen muß in einer besonderen Flasche vorgenommen werden, in welche das Wasser von oben hineingeleitet Avird, während es durch eine auf den Grund reichende Glasröhre wieder abfließt. Es darf keine stagnierende, gelbliche Zone entstehen. Die zu diesem Zweck konstruierten durchlöcherten Porzellanbehälter finden wir nicht praktisch. Trotz der Löcher fließt das Wasser nicht genügend hin- durch, und wenn man es dazu bringt, legt sich das Objekt gewöhn- lich gegen eine der Öffnungen, wird beschädigt, und sehr ungleich ausgewaschen, einige Teile ungenügend, andere zu stark. Die Dauer des Auswaschens muß mindestens 24 Stunden be- XXV, 2. Winiwarter-Sainmont: t'ber Flemiuingsche Dreifärbung. 159 tragen. Am besten läßt man dann sofort die aufsteigende Serie der Alkoliole einwirken und bettet in Paraffin ein, respektive man bewahrt die Objekte in Paraffin und niclit in Alkohol auf. Wenn die Schnitte erst nach mehreren Jahren angefertigt werden, so haben die Präpa- rate ihr Färbungsvermögen einigermaßen eingebüßt. Neuerliches Einlegen der aufgeklebten Schnitte in FtEMMiNGSche Lösung, wie be- reits oben erw^ähnt, beseitigt diesen Übelstand. Bei unserer eigentlichen Dreifärbung wird folgendermaßen ver- fahren : 1) Das Paraffin wird nicht über einer Spiritusflamme ge- sclimolzen, sondern einfach in zwei oder drei Xylolbädern bei gewöhn- licher Zimmertemperatur sehr leicht aufgelöst. 2) Auswaschen in einem Gemisch von Xylol und absolutem Alkohol, dann in zwei verschiedenen Alk. abs., um sämtliche Spuren von Xylol zu entfernen; 95prozeutigen Alkohol und zuletzt in 65pro- zentigem Alkohol. 3) Dann kommen die Objektträger in Safranin während 24 Stunden. Je nach dem Safranin gebrauchen wir ^/„prozentige oder einprozentige Lösung in 50° Spiritus. (Die Stammlösuug besteht aus einprozentiger Safraninlösung in abs. Alkohol, welcher einige Tropfen Anilinw^asser zugesetzt werden. Zum Gebrauch wird ein gleiches Volumen destillierten Wassers beigemischt.) 4) Mehrmaliges Abwaschen in destilliertem Wasser. 5) Sodann werden die Schnitte in einprozentiges wässeriges Gentianaviolett gebracht, ebenfalls während 24 Stunden. 6) Wiederholtes Abwaschen in destilliertem Wasser. 7) Eintauchen in eine wässerige Lösung von Orange G während etwa einer Minute. Die Konzentration dieser Lösuug hängt ganz von dem zu färbenden Objekt ab. Alle embryonalen Stadien oder Gewebe erfordern eine drei- oder viermal stärkere Konzentration als die anderen. Das einfachste Mittel ist ein für allemal empirisch diese Konzentration für ein bestimmtes Objekt festzustellen und unter dem Mikroskop zu kontrollieren, da alle späteren Manipulationen den Ton des Orange nicht mehr beeinfiussen. 8) Sechs bis acht Tropfen einer Mischung von gleichen Teilen abso- luten Alkohols und reiner Salzsäure w^erden 100 cc absoluten Alko- hols (ungefähr) beigemengt und die Schnitte in diese Flüssigkeit (acidulierter Alkohol) getaucht. Beim ersten Auftreten von violetten Wolken (nach 2 oder 3 Sekunden) werden die Schnitte sofort ent- fernt und 160 Win iwarter-Sain raunt: Über Flemmingsche Dreifärbung. XXV, 2. 9) in reinem abs. Alkohol ordentlich ausgewaschen, nm Säure und Überschuß von Farbe zu entfernen. 10) Die eigentliche Differenzierung beginnt nun in Nelkenöl mit etwas wenigem abs. Alkohol. Diese erfolgt langsam und kann von dem Anfänger leicht mittels des Mikroskopes kontrolliert werden. Gewöhnlich ist sie beendigt , wenn die Schnitte eine schöne blaue Farbe in kernreichen, eine intensiv gelbe Farbe in kernarmen Teilen aufweisen. 11) Reines Nelkenöl, um die letzten Spuren von Alkohol zu entziehen. 12) Die Objektträger werden senkrecht auf Fließpapier aufge- stellt, um das Nelkenöl größtenteils zu entfernen. Indessen dift'eren- ziert man eine Serie von neuen Objektträgern, nehme aber nicht mehr denn sechs oder sieben , da schließlich das Nelkenöl Wasser aufnimmt. 13) Genaues Auswaschen in purem Xylol. 14) Einschluß in Kanadabalsam. Dieses muß mit Xylol und nicht mit Chloroform bereitet werden. Das Chloroform verdunstet sehr langsam, in Wirklichkeit nur an den Rändern des Deckglases, während im Inneren das Gemisch jahrelang tliissig bleibt. Spuren von Nelkenöl oder Chloroform lösen nach und nach die Farbstoffe ; die Schnitte nehmen dann einen schmutzigen, gleichmäßigen braun- violetten Ton an und können histologisch nicht mehr verwertet werden. Befolgt man genau die angegebenen Vorschriften, so erhalten sich die Präparate jahrelang, ohne sich merklich zu verändern. Nach der Beschreibung zu schließen, schiene die Methode sehr lang zu dauern; aber die eigentlichen Manipulationen vom Violett bis zum Einschluß in Kanadabalsam gehen sehr rasch vor sich : etwa 20 Objektträger können in einer Stunde fix und fertig gestellt werden. * Die im Handel gebräuchlichen Gentianaviolette und Orange be- sitzen alle wesentlich gleiche Eigenschaften. Mit dem Safranin ist es freilich eine viel heiklere Sache. Wir verwenden seit langem im Laboratorium ein Produkt der ehemaligen Firma Trommsdorf, welches ganz vorzügliche Bilder gibt. Wir haben dagegen eine Anzahl anderer Safranine untersucht, die uns wenig befriedigt haben. Folgende Muster wurden probiert: E. Merck, Safr. T; Kahlbaum, XXV, 2. Winiwarter-Sainiuont: Über Flemraingsche Dreifärbung. 161 Safr. extra-G ; Höchst, SalV. AN 5 de Haen, Safr. I, II und III; ScHUCHARDT, Safr. 0, Safr. G 5 Grübler, Safr. 20 (zwei Arten), 0, rein, alcohol (zwei Varietäten); Könicj, Safr. G, extra-G, G-extra, NNSO und OSSN. Sämtliche Safranine zeigen unter sich schon große Verschieden- heiten ; für ein gleiches Gewicht schwankt das Volumen in erheb- lichen Grenzen. Einige lösen sich nie vollständig auf; im Satz scheint Sand enthalten zu sein. Ebenso wechselt die Farbe von einem Produkt zum anderen: einige sind eher bläulich oder violett, andere bräunlich , andere sogar geradezu gelb (König , NNSO und OSSN). Der größte Nachteil liegt in einer zu starken Färbung des Proto- plasmas. Durch die spätere Einwirkung des Orange nimmt dasselbe einen schmutzigen braunroten Ton an , in welchen die Kerne heller heraustreten, während das Gegenteil geschehen soll. Um aber eine gute Dreifärbung zu gewinnen, ist es absolut nötig, daß vor allem das Safranin gut wirkt , da sonst das Violett und Orange ebenfalls untaugliche Bilder liefern. Die besten Resultate wurden erzielt mit Safranin Grübler 20, DE Haen I und Schuchardt 0, in '/aP^o^^^^iSöJ" Lösung. Wir geben überdies zu, daß auch andere Safranine gute Dienste leisten können ; es hängt eben von dem zu färbenden Objekt ab. Die gelben Safranine z. B. von König (NNSO u. OSSN) färben die Granulationen von Mastzellen intensiv braun, eignen sich also in dieser Hinsicht, um jene Elemente gut hervortreten zu lassen. Welches sind die Merkmale einer wohlgelungenen Dreifärbung? Das Chromatin der ruhenden Kerne ist tief dunkelblau, der Nukleolus hellrot ; die Chromosomen einer Kernteilung rot ; das Chromatin degenerierender Kerne, in Teilung begriften oder nicht, zeigt alle Abstufungen zAvischen dem schmutzigen Braunrot zum Violett ; im Ovariura sind die Kerne der erwachsenen interstitiellen Zellen rot ; ebenso die Blutkörperchen, welches, nebenbei gesagt, das beste Zeichen eines guten Safranins ist. Das Protoplasma hellgelb , in untergehenden Zellen braun oder leicht bläulich. Das Bindegewebe färbt sich stärker in gelb oder braun. Die Fetttropfen, welche durch Osmiumsäure schwarz werden, besitzen ein ganz anderes Aussehen, als das intensiv dunkelblaue Chromatin. Die verschiedenen Kern- Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXV, 2. 11 162 \A iniwar ter-Siiinmont: Über Flemmingsche Dreitarbung. XXV, 2. typen der Oogenese weisen bestimmte Farbendifferenzen auf, welche wir hier nicht näher beschreiben können (cf. unsere spezielle Arbeit über das Katzenovarium in Archives de Biologie). Die Membran der Zellen ist immer sehr deutlich ; die achro- matischen Figuren gut ausgeprägt, wenn auch das Eisenhämatoxylin für diesen besonderen Zweck vorzuziehen ist. Endlich möchten wir betonen, daß die Dreifarbenmethode, besser denn alle übrigen, den Gegensatz zwischen Epithel- und Bindegewebe hervortreten läßt ; dieser Umstand wäre an und für sich schon ein großes Verdienst, da namentlich bei embryologischen wie bei pathologisch anato- mischen Studien die Entscheidung, ob dieses oder jenes Element dem Epithel oder Bindegewebe zukommt, von großer AVichtigkeit ist. Dem Einwand, daß unsere Methode langsam und zeitraubend ist, können wir nur entgegnen, daß dieser Umstand gar nicht ins Gewicht fällt, wenn es darauf ankommt, tadellose Präparate zu er- halten. Wir haben uns schon an einer anderen Stelle gegen die allzu rapiden Verfahren ausgesprochen , die namentlich zu anatom- pathologischen Zwecken mit Vorliebe angewendet werden. Gerade beim Studium von malignen Neubildungen (Carcinome , Sarkome, Pagetkrebs usw.) hat uns die Dreifärbung ausgezeichnete Dienste ge- leistet, und sie ermöglicht, die verschiedensten Elemente hervortreten zu lassen, für welche gewöhnlich die Pathologen besondere Methoden empfehlen (Mastzellen, Plasmazellen, Leukocyten im weitesten Sinne des Wortes usw). Überzeugender denn eine Beschreibung wäre selbstverständlich die Demonstration eines Präparates. Da solches aber nicht möglich, können wir nur dringend ermahnen, die Dreifärbuug nach den oben erwähnten Vorschriften zu versuchen. Wer Geduld und Ausdauer auf sie verwenden will, der wird mit den erreichten Resultaten zu- frieden sein. Zum Schluß müssen wir uns ausdrücklich dagegen verwahren, als ob wir der Dreifärbung einzig und allein das Wort sprächen und alle anderen Verfahren verwürfen. Jede Technik hat bestimmte Zwecke, und wir wenden ebenso oft andere Verfahren an, schon aus Rücksicht auf Kontrollbilder; aber die Dreifärbung besitzt so ungemein viel Vorzüge, daß es schade wäre, sich ihrer nicht zu bedienen. [Eingegangen am 19. Juni 1908.] XXV, 2. Giltay: Einiges über Beleuchtung beim Mikroskopieren. 163 Einiges über Beleuchtung beim Mikroskopieren. Von Dr. E. Giltaj in Wageningen (Hollanrtj. Hierzu drei Textfiguren. In bezug auf Beleuchtung beim Mikroskopieren findet man mehr- mals, wie ich meine, nicht genau Zutreffendes. Es rührt dies wohl daher, daß man sich zunächst die allgemeinen Bedingungen einer guten Beleuchtung nicht genügend vor Augen hält. Fangen wir also mit einer raschen Übersicht über dieselben an. Schlechte Qualität des Lichtes kann von drei Ursachen her- rühren : von zu geringer Intensität, von ungeeigneter Farbe und von ungenügender Ausdehnung der Lichtquelle. Es ist gewöhnlich leicht, sich über die beiden ersten Qualitäten ein Urteil zu bilden; ein wenig schwieriger ist dies in bezug auf die dritte, weshalb wir in erster Linie diese etwas genauer besehen wollen. Ungenügende Ausdehnung der Lichtquelle, woraus Beleuchtung des Feldes mit zu engen Lichtkegeln resultiert, verspüren wir an dem Auftreten störender Interferenzfiguren. Ein sehr geeignetes Objekt, um in dieser Hinsicht die Beleuchtung zu prüfen, bildet Kartoffelstärke, die man einfach in Wasser liegend unter dem Mikroskop zu betrachten hat. Ist die Lichtquelle genügend aus- gedehnt, dann überlagern sich die an den Grenzflächen auftretenden, von den einzelnen Punkten der Lichtquelle herrührenden Interferenz- figuren derart, daß eine gleichmäßige Lichtstärke resultiert, abge- sehen von einem einzigen, wenig auffallenden Lichtring an der ge- nannten Grenzfläche. Sowie aber die Lichtquelle von ungenügender Ausdehnung ist, werden mehrere, wenigstens teilweise gefärbte Licht- bänder sichtbar, die der Grenzfläche parallel laufen und namentlich bei nahe zusammenliegenden Grenzen äußerst hinderlich sind. Das Bild ist, wie man sagt, unruhig geworden. 11* 164 Giltay: Einiges über Beleuchtung beim Mikroskopieren. XXV, 2. Es ist deutlich, was man iu diesem Fall zu tun hat. Mau hat sich einfach mittels einer das Licht ditl'us machenden Fläche eine neue Lichtquelle von genügender Ausdehnung zu schaffen ; weil aber durch die ditfuse Ausbreitung viel Licht für das Mikroskop verloren geht, muß dafür gesorgt werden, daß zugleich die ursprüngliche Lichtquelle genügend lichtstark ist. Und weil diese beiden Maß- regeln öfters leicht zu verwirklichen sind, ist es in vielen Fällen auch gar nicht schwer, ausgezeichnetes Licht zu erhalten. Worin besteht nun das anfangs erwähnte Unzutretfende? Erstens darin, daß man nicht selten der Meinung begegnet, daß zum Mikroskopieren ein Nordfenster in hohem Grade erwünscht, ja sogar notwendig sei. Gewiß, wer ein Nordfenster und ein Süd- fenster zur Verfügung hat, wird aus Bequemlichkeitsrücksichten das erstere vorziehen ; wer jedoch nur ein Südfenster hat, darf getrost an die Arbeit gehen, ja für einige Fälle würde ich sogar dasselbe vorziehen. Man hat einfach vor einen Teil des Fensters eine, oder ein paar Mattscheiben anzubringen; dieselben werden bei Sonnen- licht eine weiße Wolke ganz entbehrlich machen; und ist die Sonne verhüllt, so hat man den Spiegel nur auf einen nicht mit Mattglas versehenen Fensterteil zu richten. Für gewöhnliche Verhältnisse wird man erfahren, daß man relativ sehr kleine Fensterteile zu einer guten Beleuchtung braucht, so daß man sich, ohne irgendwelchen Schaden, von einem gewöhnlichen Fenster auch mehrere Meter ent- fernen kann, wenn nur der Spiegel genau gestellt wird. Das Unterlassen dieser einfachen Maßregel bildet das zweite Unzutreifende, auf das ich im Anfang hindeutete. Der Hauptzweck dieses Aufsatzes ist jedoch nicht über Sonneu- beleuchtung zu sprechen, sondern ein paar Lampen zu beschreiben, die ich vor einiger Zeit habe anfertigen lassen. Ich war nämlich damals in der Notwendigkeit, das Praktikum der Mikroskopie, wel- ches bis dahin nur bei guter Tagesbeleuchtung stattgefunden hatte, zum Teil wenigstens auch bei künstlicher Beleuchtung abzuhalten. Es war nun die Frage, welches Beleuchtuugssystem Verwendung finden sollte. Die besten mir bekannten Lampen sind erstens die Lampe mit Schusterkugel oder mit Sammellinse der Firma Zeis.s; diese hat je- doch für meinen Zweck den Nachteil, daß sie verhältnismäßig viel Raum beansprucht. Weiterhin kommt in Betracht die Lampe nach Kochs und Wolz, bei welcher mit dem bekannten gebogenen Glas- stab das Licht bis nahe unter das Präparat geleitet wird. Aber XXV, 2. Giltay: Einiges über Beleuchtung beim Mikroskopieren. 165 auch diese beansprucht ziemlich viel Raum unmittelbar vor dem Mikroskop und wird obendrein kostspielig, weil man bei ihr zu be- quemem Gebrauch Zalin und Trieb bedarf, um schnell hoch und tief stellen zu können. Auch für Verwendung mit P^lektrizität hat dasjenige, was ich vorfand, mich nicht in jeder Hinsicht befriedigen können, so daß J. icli nach speziellen Angaben zwei neue Lampen habe anfertigen lassen, und zwar eine für Elektrizität und eine für Gas. Ich habe nicht ausscliließlich Gas verwenden wollen, weil dadurch der Hitzegrad im Arbeitsraum zu sehr gestiegen wäre, und auch nicht ausschließlich Elektrizität, weil liierzu der verfügbare Teil der elektrischen Anlage der Hochschule nicht ausreichte. 166 Giltay: Einiges über Beleuchtung beim Mikroskopieren. XXV, 2. Zuerst bespreche ich die Gaslampe (Fig. 1). Dieselbe kann in unveränderter Form zu gleichzeitigem Gebrauch zweier Laboranten verwendet werden. Bei einer anderen Stellung der Tische und bei geringer Abänderung in der Form wäre übrigens auch eine Lampe für vier Personen verwendbar, und bei zentraler Aufstellung auf rundem Tisch sogar noch für mehr arbeitende. In der Hauptsache besteht die Lampe aus einem gewöhnlichen Auer- brenner. Um jedoch Lichtkegel von genügend großer Öffnung zu erhalten, habe ich verschiedene diffus machende Flächen vor der Flamme versucht. Nur Mattglas jedoch hat gute Resultate gegeben. LTm die Flamme immer bequem sehen und gut regulieren zu können, habe ich es vorgezogen, nicht eine einzige Mattkugel zu ver- wenden, sondern vor der Flamme zwei separate flache Mattscheiben anzubringen, und zwar in solcher Stellung, daß sie, ohne daß der Arbeitende aufzustehen braucht, mit der Hand gefaßt und beiseite geschoben werden können. Es befindet sich weiter an dem Gestell eine dunkle Gardine, damit die Augen nicht unmittelbar das Licht empfangen. Diese Gardine ist etwas weit von der Flamme ange- bracht, damit sie sich nicht zu sehr erwärmt, was von dem Antlitz sehr unangenehm empfunden wird. Weiter ist auch ein Ring sicht- bar, mit dem der Luftzutritt in ähnlicher Weise wie bei dem Bunsen- brenner reguliert wird. Derselbe ist ein sehr wesentlicher Bestand- teil einer Lampe, wenn man eine möglichst ruhige Flamme wünscht. Die Kappe sorgt dafür, daß zugleich auch die Tischfläche gut be- leuchtet wird. — Bei der elektrischen Beleuchtung stellte ich mir zunächst die Frage, mit wie wenig Akkumulatoren es möglich sein würde, ge- nügende Lichtstärke zu bekommen. Es stellte sich diese Zahl als sehr gering heraus , denn mit den neuen OsRAMlampen für nur 4 Volt Spannung (also zu liefern mit nur 2 Akkumulatoren) war ausgezeichnetes Licht zu erzielen. Die Resultate sind sogar, bei ge- eigneter Anwendung, dem besten was ich kenne mindestens voll- kommen gleichwertig. Der Stromverbrauch war dann 0'9 Ampfere. Um möglichst wenig Lichtverlust zu haben, bringe ich die eigent- liche Lampe an die Stelle des Spiegels, welche beiseite geschoben oder weggenommen wird. Das kleine Stativ wird mit einer Schraube, eventuell mit beiden, an den Fuß des Mikroskopes befestigt. Wie die Sache eingerichtet ist, ergibt sich sofort aus den Figuren 2 und 3. Die erstere stellt die Lampe vor bei Verwendung mit einem ein- fachen Hufeisenstativ, in welcher Form wir sie zunächst näher be- 1 XXV, 2. Giltay: Einiges über Beleuclitung beim Mikroskopieren. I67 trachten werden. Dabei ist die erste Frage, wie die Lichtquelle vergrößert wird, denn ohne weiteres würde das elektrische Licht fast ganz unbrauchbar sein. Die Vergrößerung geschieht wiederum am besten mit Mattglas. Um mr)glichst gute Resultate zu erhalten, muß aber dasselbe bei so kleiner Lichtquelle wie einer kleinen elek- trischen Lampe au zwei Stellen angebracht werden, und zwar etwas weit auseinander ; das helle Licht der Lampe erträgt die zweifache Zerstreuung sehr wohl. Praktisch ist es, das Glas der Lampe an der nach oben gewendeten Seite mit Karborundumfeile matt zu feilen, und dann die zweite Mattfläche auf das Diaphragma zu legen. Ich verwende hierzu möglichst dünne Objektgläser, die mit Karborundum- 168 Giltay: Einiges über Beleuchtung beim Mikroskopieren. XXV, 2. pulver oder mit Amaril matt geschlifFeu werden. Ein Stückchen dieses Glases wird also unmittelbar auf das Diaphragma gelegt (Fig. 2, O). Um zu verhindern, daß beim Heben des letzteren die Luft zwischen dem Objekt- und dem Mattglas das Objektglas Aer- schiebt, werden die vier Ecken des Mattglases etwas zusammen- geschmolzen, so daß die Ränder dieser Glasplatte dem Diafragma nicht mehr überall aufliegen und die Luft also leicht passieren kann. Auch empfiehlt es sich, vermittels eines übergeschobenen kleinen Kupferringes (Fig. 2,jBj zu verhindern, daß beim Heben der Diaphragma- röhre die Matttläche selbst gegen das Objektglas stößt. Wegen der geringen Dicke des Glasplättchens kann man diesen Ring einfach an seiner Stelle belassen. Bei Verwendung resp. Ausschaltung der elektrischen Beleuchtung hat man dann außer mit der Manipulation mit der Lampe nur mit dem Auflegen resp. Fortnehmen des Glas- plättchens zu tun. Größe und Entfernung des beleuchteten Teiles dieser Matt- scheibe bedingen die Weite der Beleuchtungskegel. Li der gewöhn- lichen Art, durch Heben oder Senken der Diaphragmaröhre, wird für jeden Fall die geeignetste Beleuchtung aufgesucht. Will man diese Lampe auch mit größeren Stativen, eventuell mit AßBE-Kondensor verwenden, dann muß die zweite Mattfläche unter der Kondensorlinse angebracht werden. Bei größereu Zeiss- Stativen wird das Mattgläschen unmittelbar unter das Diaphragma, auf den hier vorhandenen Ring gelegt. Figur 3 stellt die Lampe vor, wie sie beim Gebrauch mit größeren Stativen eingerichtet ist. Die seit- liche Verschiebung mittels Kupferstabes K gestattet die Verwendung an Stativen verschiedener Abmessung. Zur Abhaltung von Licht- reflexen ist in dem Exemplar von Figur 3 der untere Teil matt- schwarz gemacht. Öfters jedoch ist dies nicht notwendig, weil dann der Tisch diesen Teil genügend verdeckt. Anderen Einrichtungen gegenüber — dem Tammes - Stativ z. B. — ist die beschriebene Lampe im Nachteil, indem sie etwas weniger schnell bereit ist; man braucht etwa 20 Sekunden zu ihrem Anbringen. Einmal am Platze — was übrigens doch auch hier schnell geschieht — hat sie jedoch den Vorzug, daß sie mit dem Mikroskop, ohne Derangierung der Beleuchtung, beiseite gestellt wird. Natürlich könnte man auch eine Stativform wählen, welche nicht bestimmt ist augeschraubt zu werden (man kann es übrigens auch mit der beschriebenen Form unterlassen), aber dann bekommt man leicht wiederholte Lichtregulierung mit in den Kauf. XXV, 2. Wulff: Gefriermethoden u. Gefrierraikrotome im allgemeinen. 169 St'liließlich erwäliiie ich noch, daß, wer nur selir gelegentlich künstliche Beleuchtung braucht, mit Vorteil auch eine gewöhnliche liadfahrer-Acetylenlaterne verwenden kann. Wenn man liiervor Matt- glas aufstellt, hat man gleichfalls Licht von ausgezeiclineter Qualität. Wer jedoch öfters künstliche Beleuchtung zu verwenden hat , ge- braucht wohl vorteilhafter eine der verschiedenen Einrichtungen ad hoc. In einer Hinsicht jedoch stehen, soviel ich weiß, alle künstlichen Beleuchtungssysteme gegen Tagesbeleuchtung zurück: in bezug auf Farbe des Lichtes. Zur Beurteilung zarter Farbenschattierungen wird die Tagesbeleuchtung durch kein künstliches System bis dahin ersetzt. [Eingegangen am 16. Mai 1908.] Über Gefrierm etil öden und Gefriermikrotome im allgemeinen, sowie über einen neuen Gefriertisch für die Zimmermannschen Mikrotome und über die Behandlung freier Schnitte. Von Dr. Max Wolff, Allteilung für Pflanzenkrankheiten am Kaiser WUhelms- Institut für Landwirtschaft zu Brornberg. Hierzu vier Textabbildungen. Die Wichtigkeit der Gefriertechnik für gewisse liistologische Spezialzwecke, in erster Linie für die neuere Impräguationstechnik der Nervenfibrillen, hat die Vorurteile etwas zurückgedrängt, die vielfach und sehr zu Unrecht der ausgiebigen Verwendung dieser Methodik im Wege standen. BiELscHOWSKY Und ich haben bei unsern Arbeiten über die neuro- fibrillären Strukturen des Neurons fast ausschließlich die Kohlensäure- Gefriermethode verwendet. Und zwar bedienten wir uns des be- kannten Jung sehen Studentenmikrotomes. Icli bin neuerdings sowohl von der Verwendung der Kohlensäure, wie des Jung sehen Instru- 170 Wulff: Gefrierraethoden u. Gefriermikrotome im allgemeinen. XXY, 2. mentes ganz abgekommen. Ich habe die Erfahrung gemacht, daß die Kohlensäure teurer ist im Gebrauch, als es an und für sich nötig wäre, weil die Ventile der Bomben sehr wenig exakt funktio- nieren. Die Folge davon ist, daß sich das Ausströmen der Kohlen- säure nicht immer so regulieren läßt, wie es zu wünschen wäre und nötig ist, um bei starkem Strömen ein Zufrieren des Metallrohres zu verhindern. Dazu muß ich jedoch zweierlei bemerken, was meine abfällige Beurteilung der Anwendung Hüssiger Kohlensäure zu Ge- frierzwecken erklärlich erscheinen lassen wird. Erstens haben so- wolil BiELscHOwsKY wie ich immer relativ große Blöcke zu verar- beiten gehabt, die einen längeren Kohlensäurestrom erforderten, wo- bei die Mängel der Ventile sich besonders bemerkbar machen konnten. Und dann habe ich bis heute nicht Gelegenheit gehabt, die von Jung (zum Preise von 25 Mk. etwa 10 kg haltend), ferner von Leitz, Sartorius und anderen Firmen eigens für Gefrierzwecke hergestellten Bomben kennen zu lernen. Vielleicht arbeiten sie exakter, als die gewöhnlichen Bomben. Jedenfalls ist in Betracht zu ziehen, daß dann die Mehrkosten bei der Anschaffung und die Umständlichkeit der Füllung immer noch eine Rolle spielen. So meine ich denn, daß das Gefrieren mit dem Äthylchlorid-Spray bequemer und auch aus anderen Gründen dem Arbeiten mit flüssiger Kohlensäure vorzuziehen ist, — gar nicht zu reden von dem höchst unerquicklichen Arbeiten mit dem entschieden vera4teten Ather-Spray. Bei meinen Arbeiten mit Äthylchlorid als Gefriermittel kam mir der Gedanke, den Spray, anstatt auf die für Äthylchlorid berechnete Gefrierkammer des bekannten Jung sehen Studeutenmikrotoms (Neues Modell B), auf die sehr massiv gearbeiteten Metalltischchen des Minot- ZiMMERMANN sehen Mikrotomes (Fig. 1) wirken zu lassen. Ich verwen- dete eines dieser (eigentlich zum Aufkitten der Paraffinblöcke be- stimmten) Tischchen von mittlerer Größe. Um wenigstens während des Gefrierprozesses die Wärmeleitung auszuschalten, setzte ich das Tischchen mit seinem Fuße in einen durchbohrten Kork ein und um- gab zum Überfluß die Unterseite der Metallplatte mit etwas locker auf- gezupfter Watte, um ein Herabtropfen des Äthylchlorids zu verhindern. Bei meinen Schneidversuchen wählte ich als Objekt 8 mm hohe Blöcke eines frisch in Formol (lOprozentig) fixierten An- gioms, die eine 2 qcm große Schnittfläche liatten. Das Durchfrieren und Festfrieren der Objekte gelang vorzüglich, trotz der hohen Zimmertemperatur von 19*^ C. Der Verbrauch von Äthylchlorid be- trug bei diesen Versuchen durchschnittlich 5*5 g zum Preise von etwa XXV, *2. Wulff: (»ofiieimetlioden u. Gefiiermikrotorae im allgemeinen. 171 15 Pfg. Dazu habe ich nocli zu bemerken, daß icli nach beende- tem Durchgefrieren des Objektes den Tisch schnell aus dem Kork nahm und in den Objekthalter einspannte. Ich vermochte mit dem vorzüglichen Zimmermann sehen Modell dann meist in einer Minute soviel Schnitte (Schnittdicke 9 und 12 /t) herunterzuhobeln, daß nur ein Blockrest von 1 mm Höhe stehen blieb. Ich hätte es früher nicht für möglich gehalten, daß die Wärmeleitung immerliin eine volle Minute brauchen würde, um bis zur Tischplatte vorzudringen. Übrigens wurde das drohende Abtauen des Blockes (da dieser selbst als schlechter Wärmeleiter meist noch gefroren ist, wenn er von 1. der Unterlage abtaut, ist es natürlich wünschenswert, — zur Vermeidung von Materialverlusten und eventueller Beschädigung des Messers, — daß man sich vom Abtauen des Wassers nicht überraschen läßt) sehr präzise durch das vorrückende Abtauen der Bereifung des Objekttischfußes und der Unterseite der Tischplatte signalisiert. An und für sich ist es also recht gut möglich, auf dem Minot- ZiMMERMANN sehen Mikrotom mit Hilfe des Athylchlorid-Sprays und unter Verwendung eines ganz gewöhnlichen einfachen Paraffiutisch- chens selbst größere Blöcke in Gefrierschnitte zu zerlegen. Immerhin erschien es wünschenswert, den Äthylchloridverbrauch durch geeignete Isolierung der Objekttischplatte zu verringern und dadurch gleichzeitig die Möglichkeit zu gewinnen, auf das Schneiden 172 Wolff: Gefriermethoden u. Gefriermikrotorae im allgemeinen, XXY, 2. des Objektes iiacli Belieben auch mehr Zeit als eine Minute ver- wenden zu dürfen. Das Anfertigen einer so großen Zahl von Gefrierschnitten in kürzester Zeit, wie ich sie bei meinen erwähnten ersten Versuchen erhielt, ist ja meines Erachtens überhaupt nur bei einem in so hohem Maße durch Schnelligkeit und Präzision des Arbeitens ausge- zeichneten Mikrotom, wie es das MiKOT-ZiiiMERMANNSche darstellt, möglich. Und bei aller selbstverständlichen Wertschätzung des genial erdachten Jung sehen Modelles (das in seiner neuen Form durch Wohlfeilheit und universelle Verwendbarkeit sich gewiß aufs beste jedem über nur geringe Geldmittel verfügenden Mikroskopiker emp- fiehlt und, für Paraffin-, Celloidin- und Gefrierschnitte eingerichtet, tatsächlich für jeden zu erschwingen ist) meine ich daher jetzt doch, für universale Verwendung vor allen anderen Instrumenten die Zimmermann sehen empfehlen zu müssen, Avenn man überliaupt die Anschaffung eines teureren Instrumentes beabsichtigt. Eines be- sonderen Gefriermikrotomes kann man auf jeden Fall alsdann ent- raten. Aber überhaupt ist es ein großer Vorzug dieser Instrumente, daß sie durch rotierende Bewegung (eines Schwungrades) betätigt werden, da das längere Arbeiten so bei weitem nicht in dem Maße ermüdet, wie dies infolge der anders gearteten Betriebsweise bei anderen Instrumenten (z. B. dem Jung sehen Studentenmikrotom) der Fall ist. Speziell für die oft recht empfindlichen Gefrierschnitte ist es ferner sehr wichtig, daß die Schnitte sofort nach ihrer Bildung auf einer feststehenden, nicht auf einer sich mehr oder weniger rasch stoßweise hin und her bewegenden Unterlage, der Messerfiäche, abgelegt werden. Das erste geschieht beim Zimmermann sehen Mikrotom, dessen Messer ja feststeht, das letzte ist dagegen, leider, bei allen mehr oder weniger speziell für Gefrierzwecke konstruierten Mikrotomen der Fall. Daß bei den Gefriermikrotomen das Messer hin und her be- wegt wird, ist praktisch jedenfalls ein Fehler der Konstruktion. Ob theoretische technische Erwägungen bei jenen Instrumenten zu diesem Konstruktionstyp geführt haben , vermag ich niclit zu beurteilen. Aber icli kann versichern, daß bei den ZniMERMANNSchen Modellen der gegensätzliche Konstruktionstypus absolut keine Mißstände (etwa ein Abweichen, Durchbiegen des Objekthalters) gezeitigt hat, wie ich besonders ganz allgemein gegenüber Mayers abfälliger Beurteilung hervorheben möchte. ^ *) Ich habe vor Jahren in Jena lange Zeit ein Zimmermann sches Mikro- XXV, 2. Wolff: Gefricrmothoden u. (Jefrieniiiki-otuuie im ullgeiueinen. 173 MAi'ER sagt, daß das von Minot angegebene Instrument an Genauigkeit der Ausführung liinter dem Scbaukelraikrotom zurück- zustehen scheine, und daß er übrigens (wenn man auf das Schneiden gerader {"lachen Wert legt) nicht das Zimmermann sehe Modell, „weil es trotz des hohen Preises nicht exakt genug arbeitet", sondern die Form, in der Becker das Mikrotom liefert , empfiehlt. Mindestens für die Instrumente, die ich kennen gelernt habe, ja ich glaube sagen zu dürfen : für die jetzt von den betreffenden Firmen ge- lieferten Instrumente (ob früher einmal die einen weniger exakt und die anderen besser gearbeitet wurden, entzieht sich natürlich meiner Beurteilung) gilt das, was Mayer sagt, nicht und ist in dieser apodik- tischen P^orm ein ganz und gar ungerechtes Urteil. Ich machte die Erfahrung, daß in den Händen der Praktikanten das Rockiug-Mikrotom schnell in Unordnung geriet, — meist lockerten sich Schrauben des Einstellapparates, was bei schnellem Arbeiten infolge des raschen Hin- und Herbewegens des Hebels, der Mikrometerschraube und Objektarm bewegt, ganz natürlicher Weise leicht eintreten kann. Dagegen passierte an dem ebenfalls von Praktikanten sehr stark benützten Zimmermann sehen Mikrotom nie das geringste. Ich bestreite absolut nicht die Brauchbarkeit und Preiswürdigkeit des Kocking-Mikrotoms, — aber wenn man Leistung und Präzision im Betriebe von beiden Instrumenten vergleichen will, so kommt man jetzt gerade zu dem entgegengesetzten Resultat wie Mayer. Die BECKERSchen Instrumente (Minot- Modelle) kenne ich nicht, aber mehr wie exakt arbeiten und sehr widerstandsfähig bei starkem Gebrauch sich erweisen, — mehr werden die Becker sehen Mikrotome auch heute nicht leisten können. Ich glaube, daß diese Abschweifung zu dem Thema Mikrotome nicht ganz überflüssig ist, um so mehr, als es sich hier ja um deren Verwendung zu Gefrierzwecken handelt, die von meinen engeren Fachgenossen ohnehin etwas zu wenig beachtet wird. Jedenfalls möchte ich nach dem Gesagten noch ausdrücklich auf die prinzipielle Brauchbarkeit der Zimmermann sehen Mikrotome für das Zerlegen (in Gefrierschnitte) der doch meist diffizileren Objekte des Zoologen hin- tom neben einem Jung sehen Rocking Mikrotom benützt. In meinem hiesi- gen Laboratorium veiwende ich ausschließlich ein Zimmermann sches Modell. Nach meinen, sich nun über 8 Jahre erstreckenden Erfahrungen mit den Zimmermann sehen Modellen muß ich bei aller aufriciitigen Achtung seiner außerordentlichen Autorität den Ausführungen P. Mayers in der zweiten Auflage der „Grundzüge der mikroskopischen Technik" (p. 79) mit aller Entschiedenheit widersprechen. 174 ^Volff: Gefrieriuethoden u. Gefriermikrotorae im allgemeinen. XXV, 2. gewiesen haben. Die Vorteile des feststehenden Messers hatten wir schon behandelt. Sehr wichtig jedoch ist es weiter, daß hier der Messerrücken nach unten steht. Hält man eine kleine Schale mit Wasser bereit, die direkt unter dem Messerrücken zwischen den beiden Säulen des Messerhalters Aufstellung finden mag, so kann man die Schnitte — eventuell läßt man etwas Wasser auftropfen — sehr bequem von der Schneide zum Rücken und von da in die Schale fließen lassen. Es gelingt so, Objekte, die sich nach der Meinung der meisten Untersucher gewiß nicht für die Zerlegung in Gefrierschnitte eignen würden (und auch bei Anwendung anderer Gefriermikrotome wirklich sich nicht dafür eignen), in durchaus befrie- digender AVeise zu schneiden, z. B. Annelliden , Insektenlarven usw. Über die Weiterbehandlung solcher Schnitte soll am Schlüsse noch einiges mitgeteilt werden. Um nicht, wie oben erwähnt, gezwungen zu sein , die ganzen Schnitte, die man zu erhalten wünscht , in einer bis höchstens auderthalber Minute herunterzuho- beln, wandte ich mich mit Vor- schlägen zwecks Konstruktion einer für Äthylchlorid geeigneten Gefrier- kammer an die Firma E. Zimmer- mann in Leipzig, die meiner An- 2. regung in entgegenkommenderweise entsprach und jetzt die in folgen- dem kurz beschriebene Gefrierkammer zu dem sehr niedrig bemes- senen Preise von 12 M. liefert (Fig. 2). Die Gefrierplatte ist hier, im Gegensatz zu den Platten der Paraffintische, mit konzentrischen Riefen versehen. Da sie an ihrer, dem Innenraum des Apparates zugekehrten Unterseite zylindrisch ausgebohrt ist, so hat sie etwa die Form eines Kapsel- oder Dosen- deckels. Die Unterseite ist mit einem grobfaserigen Stotfstück belegt , das den Äthylcliloridüberschuß , der sonst abtropfen würde, aufnimmt. Diese Gefrierplatte ist nun auf einen Hartgummiring auf- geschraubt, der seinerseits durch feste Verschraubung mit dem eigent- lichen Tischteil (der gewöhnlichen Tischchen) verbunden ist, an dem ! XXV, 2. AVolff: Gefriermethoden u. Gefriennikrotorae im allgemeinen. 175 das zum Einklemmen in den ObjektLalter dienende Fußstück sich befindet. Der Hartgummiring trägt 15 genügend weite Durchbohrungen, durch die man den Strahl des Äthylchlorid-Sprays bei jeder Stellung der Kammer gegen die Unterseite der Gefrierplatte richten kann. Ich lasse die in lOprozentigem Formol fixierten Objekte zum Auswaschen des Fixierungsmittels 2 Stunden in fließendem Wasser und bringe sie dann, mit destilliertem Wasser genügend benetzt, auf die Gefrierplatte. Bei einer (absichtlich so hoch gehaltenenj Zimmer- temperatur von 21^ C blieben die Blöcke (ebenfalls von der oben angegebenen Größe, also 3X10X20 mm) 5 Minuten lang gefroren. Das vom Flechtwerk an der Unterseite der Gefrierplatte zurückge- haltene Athylchlorid bewirkt also ein sehr ausgiebiges Nachgefrieren. Die Isolierung gegen Wärmeleitung vom Mikrotom her ist natürlich eine sehr vollkommene. Zur Erzielung einer so langdauernden Ver- eisung hatten 4 g Äthylchlorid genügt, die in maximo 12 Pfennige kosten. Übrigens müssen in diesem Falle irgendwelche ungünstige Faktoren mit im Spiele gewesen sein, die sich bei größerer Acht- samkeit vielleicht stets werden ausschalten lassen (ich vermute, daß bei ungeeigneter Richtung der Äthylchloridstrahles unnötig viel von der Gefrierplatte abtropfen konnte, wenn z. B. der Strahl den Winkel zwischen Kapseldecke und Seitenwand, oder gar den Hartgummiring selbst traf), denn später habe ich bei derselben Zimmertemperatur und derselben Blockgröße und meist auch mit einer gleichen Nach- gefrierzeit, oft nur 2*5 oder 2 g Äthylchlorid verbraucht. Im Durch- schnitt wird also bei einer recht hohen Lufttemperatur (21^ C und einer ziemlich ansehnlichen Blockgröße (3X10X20 mm) der Äthyl- chloridverbrauch nicht mehr als 3 g zum Preise von 9 Pfennigen be- tragen, wenn man den Block in aller Ruhe bis auf ein Reststück von 1 mm in Schnitte zerlegen will. Gleichzeitig glaube ich auch den Beweis erbracht zu haben, daß man mit der Äthylchloridmethode selbst in den wärmeren Klimaten sehr gut und ohne besonderen Kostenaufwand — infolge zu starken Verbrauchs von Äthylchlorid — wird arbeiten können. Mir lag daran, dies festzustellen, da es vielfach, auch von P. Mayer, in Ab- rede gestellt wird, — für die Ätherspray-Gefriermethode entschieden mit Recht. Diese ist sogar in unserer Breite während der Sommer- monate einfach unbrauchbar. Ich meine nach alledem, es müßte das kompendiöse Zimmer- mann sehe Instrument (in seinem Kasten verpackt nimmt es nicht 176 Wulff: Gefriermethoden u. Gefriermikrotome im allgemeinen. XXV, 2. mehr Kaum weg, als das Jung sehe Studentenmikrotom) — in voll- kommener Weise für Paraffinschnitte geeignet und durch Unterbringung der kleinen Gefrierkammer und einiger Äthylchloridtlaschen in dem dazu gehörigen Kasten (die ohne weiteres darin Platz finden) als das brauchbarste Gefriermikrotom ausgerüstet, das ich kenne — der unentbehrliche Begleiter jedes Zoologen sein, der den Wunsch hat, an Ort und Stelle , bei längerem Aufenthalt seine Untersuchungen auszuführen. Die tatsächlich bestehende Abneigung der meisten Zoologen gegen die Gefriermethode läßt sich nur damit entschuldigen, daß es allerdings sehr umständlich sein würde, zwei Mikrotome mitzuschleppen. Die Athermethode ist auf Reisen in wärmeren Kliraaten natürlich ganz unbrauchbar. Kohlensäureboraben können für den einsam irgendwo hausenden Forscher ebensowenig als praktisch in Frage kommen. Anders steht das mit dem Äthylchlorid. Nur können auch hier wieder, meiner Erfahrung nach und vor allem für wärmere Gegenden, nur schnell arbeitende Instrumente, z. B. nicht die bei aller Exaktheit viel zu langsam arbeitenden Schlittenmikrotome (für die es ja auch Äthylchloridgefriertische gibt), Verwendung finden. Es ist aber zweifellos die Bedeutung der Gefriermethode an sich gei'ade für feinere histologische Methoden eine ganz außerordent- liche und kann gar nicht überschätzt werden. Daß ein frisch und gut — etwa in lOprozentigem Formol — fixiertes Objekt nach seiner Zerlegung in Gefriersclmitte stärkere arteficielle Veränderungen aufwies, als ein in Paraffin oder in Celloi'din eingebettetes, wie von mancher Seite behauptet worden ist, bestreite ich ganz entschieden. Das ist wirklich eine völlig haltlose Legende. Die Gefriermethode schafft bei achtsamer Handhabung die geringsten Veränderungen in der Struktur des Objektes, — von allen Methoden gibt uns der Ge- frierschnitt die Strukturverhältnisse noch am meisten der vitalen Struktur genähert wieder. In weitem Abstände erst folgen jene Methoden, bei denen das Objekt eine Alkoholpassage über sich er- gehen lassen muß. Das gilt nun nicht nur von den gröberen und feineren Struk- turen, wenn es auch, diese anlangend, sehr in die Augen fällt, wie ich mich bei meinen Studien über die Kontinuität der Neurofibrillen und des Neuroplasmas und über die feineren Lagebeziehungen der Fibrillen zur plasmatischen Wabenstruktur immer wieder überzeugt habe. Die Erhaltung der Affinität gewisser Strukturen der lebenden und der frisch fixierten Zelle — auf deren teils chemischen, teils 1 XXV', 2. Wulff: Ciefriermethoden u. Gefrierinikiotome im allgemeinen. 177 physikalischen Besonderheiten beruhend - — ist bei der Gefrierraethode eine so vorzügliche, geht dagegen bei den üblichen, eine sorgfältige Entwässerung in Alkohol verlangenden Methoden oft in gar nicht berechenbarer Weise verloren, daß allein aus diesem Grunde die Gefriermethode bei feineren histologischen Arbeiten nicht so ver- nachlässigt werden sollte, wie es doch zweifellos meistens geschieht. Ich selbst habe mich noch vor 3 Jahren bei weitem nicht so enthusiastisch über die Gefrierraetliode geäußert (vergl. Biol. Zen- tralbl. Bd. XXV, p. 679—687, 691—702, 729—741) und habe empfohlen, gewöhnliche mit Wasser aufgeklebte Paraffinscbnitte mit der Methode Bielschowskys zu behandeln (Anat. Anz. Bd. XXVI, 1905, p. 136). Ich suchte dadurch hauptsächlich den sehr unan- genehmen Verletzungen aus dem Wege zu gehen, die die Präparate nur zu leicht erleiden, wenn man die Gefrierschnitte durch die Alkoholreihe, ctr. transportiert. Aus diesem Grunde hauptsächlich hat sich auch Rosenzweig bei seinen Untersuchungen über die Sub- stantia Rolandi des von mir angegebenen Kunstgriffes bedient. Wenn ich also seiner Zeit davon sprach, daß ich im Gegensatz zu BiELSCHOwsKY die „rohe Gefriermethode" durchaus nicht für technisch einwandsfrei hielt, „besonders bei fast allen Wirbellosen nicht", so war von vornherein damit nicht etwa eine Bemängelung des Erhaltungszustandes der feineren histologischen Strukturen be- absichtigt, sondern nur die oft recht ungünstige Bewahrung oder mindestens außerordentlich erschwerte Erhaltung der normalen Lage- beziehungen gemeint. Was den gewöhnlichen Modus procedendi an- geht: zu Recht, — sage ich auch heute noch. Aber ich liabe gefunden, daß vermittelst eines sehr einfachen und eigentlich kaum neu zu nennenden Kunstgriffes sich der be- mängelte gewöhnliche Modus procedendi gerade in bezug auf den eigentlich kritischen Teil umgehen und somit die Fehler der Methode vermeiden lassen. Mit alledem möchte ich übrigens in keiner Weise meine frühere Angabe modifizieren, daß die BiELscHOwsKv-Methode von allen Fibrillenmethoden noch am ehesten an alten, nicht vorschriftsmäßig vorbehandeltem Material, (das z. B. mit Boraxkarmin durchgefärbt und längere Zeit mit Alkohol behandelt, oder mit anderen Fixier- mitteln, als Formol, fixiert worden war) gute Resultate gibt. Grund- bedingung für das Gelingen ist bei solchem Material natürlich erst recht: peinliche Sauberkeit! Aber es läßt sich auch dann freilich, wie schon erw^ähnt, der Erfolg recht oft nicht voraussagen. Manchmal Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXV, 2. 12 178 Wolff: Gefriermethoden u. Gefiiermikrotome im allgemeinen. XXY, 2. hat eben die Erhaltung gewisser Affinitätsqualitäten der Fibrillen — meistens übrigens nur der Neurofibrillen, nicht der fibrillären Strukturen des Bindegewebes — durch die betreffende Vorbehand- lung keinen Schaden erlitten, manchmal aber ist es trotz der schein- bar völlig gleichen Vorbehandlung doch der Fall gewesen, ohne daß sich die Sache recht erklären läßt. Ebenso bestreite ich keinen Augenblick, daß bei Objekten, deren gröberes Gefüge nur sehr zarten, losen Zusammenhalt hat — wie sie also allerdings der Zoologe öfter, als der Anatom zu bear- beiten haben wird — die Paraffin- und Celloidinmethode nicht vom Gefrierschnitt ersetzt werden können. Was da die Bielschowsky- Methode anlangt, so halte ich durchaus an meinem früher geäußerten Bedenken gegenüber einer Überschätzung der Gefriermethode fest. Ich kann auch meinen früheren Angaben , die direkte Versilberung aufgeklebter Paraffinschnitte betreffend, eine neue hinzufügen, daß ich nämliche befriedigende Imprägnationen der Neurofibrillen mittels der BiELSCHOWSKY sehen Methode auch dann erhielt, wenn ich Schnitte von Material, das in Celloidin oder Gelatine eingebettet war, ganz wie gewöhnliche Gefrierschnitte behandelte. Über meine Erfahrungen mit Gelatineschnitten will ich gesondert später eingehendere Mitteilungen machen. Ich habe bis jetzt die t'berzeugung gewonnen, daß die Einbettung in Gelatine bei Wirbel- losen von großem Vorteil sein kann, wenn man die Alkoholpassage aus irgendwelchen Gründen vermeiden möchte. Vor allem lassen sich die Gelatineblöcke bequem in Gefrierschnitte zerlegen. Dadurch werden Objekte der Gefriermethode zugänglich, die sonst aus ver- schiedenen Gründen ihr nicht geringe Schwierigkeiten bereiten würden. Ich habe auf diese Weise z. B. Enchytraeiden und Anguilluliden be- quem in Gefrierschnitte zerlegen können. Das wäre sonst entweder überhaupt nicht möglich gewesen, oder die AVeiterbehandlung der winzigen Schnitte würde sich zum mindesten außerordentlich schwierig gestaltet haben. Gewölmliche Gefrierschnitte, wie Celloidinschnitte und Gelatine- schnitte, behandele ich jetzt in folgender Weise und mit folgenden, meiner Ansicht nach technisch wesentlichen Vorteilen. Deckgläser wie Objektträger werden nach der Zettnow sehen Methode auf das sorgfältigste gesäubert. Besonders wichtig ist es, daß die Objektträger absolut entfettet sind, damit sie das Wasser völlig gleichmäßig aufnehmen. Man kann natürlich auch so verfahren, wie ich es jetzt ausschließlich tue, daß man nämlich ständig einen Vor- XXV, 2. Wolff: Gefriermethoden u. Gefriermikrotome im allgemeinen. 179 rat Objektträger und Deckgläser in einem Gemisch konzentrierter Lösungen von doppeltchromsaurem Kali und Schwefelsäure (Vorsicht beim Mischen!) aufbewahrt. Man braucht dann die zu entfettenden Gläser nicht in der Flüssigkeit zu kochen. Sobald ich meinen Vor- rat von gebrauchsfertig in Alkohol aufbewahrten Gläsern erschöpft habe, nehme ich die im Kali-Schwefelsäuregemisch liegenden Gläser aus der Flüssigkeit heraus, in der sie mindestens 2 bis 3 Wochen gelegen haben, und spüle sie zunächst gut mit destilliertem (oder abgekochten) Wasser ab, wasche sie dann einige Minuten in gewöhn- lichem Leitungswasser und bringe sie dann wieder durch destilliertes Wasser in starken Alkohol. Gleichzeitig wird das Kali -Schwefel- säuregemisch mit einem frischen Gläservorrat beschickt. So behandeltes Glas gab völlig einwandsfreie Präparate auch mit den empfindlichsten Geißelmethoden. Was für unseren Zweck aber die Hauptsache ist: das Wasser breitet sich auf ihm auf das gleichmäßigste und in dünnster Schicht aus, — es benetzt das Glas, ohne beim Herausziehen des Objektträgers wieder herunterzurollen. Das ist nun für das Auffischen aller zarteren Schnitte von größter Wichtigkeit. Der Leser wird gewiß, wenn er Schnitte, wie die oben genannten, verarbeitet hat, bemerkt haben, daß es nicht nur sehr schwer hält, die Schnitte einigermaßen prompt auf Spatel, Glasstäbe oder Objektträger zu bringen, wenn diese sich nicht ganz gleich- mäßig vom Wasser benetzen lassen, sondern daß die Schnitte selbst dann, wenn man die zum Herausfangen verwandten Gerätschaften vorher ganz sauber mit einem Tuch abgerieben hatte, häufig an den betreffenden Instrumenten ganz oder teilweise hängen bleiben beim Versuche, sie in der nächsten Flüssigkeit (auch wenn dies ein stär- kerer Alkohol ist) abzuschwemmen. Das hält beim Arbeiten stets sehr auf, zum mindesten! Empfindlichere Schnitte, und zwar nicht bloß dünne, sondern auch alle solche von komplizierterem Gefüge, werden dabei sogar meistens mehr oder weniger lädiert oder in Un- ordnung gebracht. Ich bemerkte, daß das einzige Mittel, diesen Übelstand zu beseitigen, die oben geschilderte Behandlung der be- treffenden Gerätschaften ist. Vielleicht kommen noch andere Eigen- schaften des Materials (Glas) in Betracht, als bloß ein minimaler Fettüberzug, die dann in günstigem, die totale Benetzbarkeit herbei- führenden Sinne verändert werden. Jedenfalls genügt auch Abreiben mit Alkohol oder Äther, ja selbst Absengen in der Bunsenflamme nicht, um dasselbe Ergebnis oder dies wenigstens auch nur an- nähernd mit der gleichen Vollkommenheit zu erreichen. 12* 180 Wolff: Gefrieimethoden u. Gefriermikrotorae im allgemeinen. XXV, 2. Mit derartig präparierten Objektträgern fange ich die Schnitte einzeln heraus. Zum Halten des Objektträgers leistet eine kräftige KtJHXESche Pinzette mir die besten Dienste. Den Objektträger trockne ich nun bis auf eine kleine Zone rings um den Schnitt schnell, aber sorgfältig ab. Dies geschieht, damit die Wachsfüßchen eines etwas reichlich großen Deckgläschens, mit dem der Objektträger nunmehr zu beschicken ist, gut auch auf ihm, von unten her, ange- schmolzen werden können. Das Deckgläschen, an dem die drei Wachsfüßchen vorher angeschmolzen worden sind, wird nun aufgelegt und, indem ein kleiner erhitzter Spatel von unten her an die be- treffenden Stellen des Objektträgers gebracht wird, auf seinen Wachs- füßchen durch Herabschmelzen soweit auf den Schnitt nieder ge- senkt, daß dieser eben gerade noch nicht vom Deckglas berührt wird. 3. 4. Die Figuren 3 und 4 veranschauUchen das Gesagte zur Genüge. Die Methode bereitet nicht die geringsten Schwierigkeiten und ist an sich auch keineswegs neu. Neu ist meines Wissens nur das eine, daß ich die ganze Zusammenstellung, die etwa an ein Schau- DiNNSches Mikroaquarium erinnert, benutzte, um die genannten Arten freier Schnitte unter ihrem Schutze durch Färbflüssigkeiten, Ent- wässerungs-, Aufhellungsmedien usw. zu führen und sogar, wenn es sich um besonders empfindliche Schnitte handelte, einem komplizier- teren Imprägnationsverfahren zu unterziehen. Bisher ist es doch, meines Wissens wenigstens, ganz allgemein üblich gewesen, die Schnitte mit Hilfe von Siebschalen oder ähnlichen Apparaten (für feinere Arbeiten übrigens sämtlich in gleicher Weise unbrauchbar), oder aber mit Glas-, Hörn- und Metallspateln von einer Flüssigkeit in die andere zu befördern, wobei eben sehr leicht die feinen und XXV, 2. Wolff: Gefrienuethodcn u. Gefrieriuikrotome im allgemeinen. 181 zerreißlichen Schnitte bescliiidigt werden und — last not least — der Verbrauch an Reagentien ein erheblich größerer ist. Da das Deckglas den Schnitt nicht gerade berührt, sondern ihm nur sehr genähert ist, so können Flüssigkeiten, die ich den schmalen Spalt zwischen Objektträger und Deckglas passieren lasse, auf den Schnitt mindestens ebenso gleichmäßig einwirken, wie auf einen in gewöhnlicher Weise aufgeklebten Paratfinschnitt, als ob der Schnitt von einem Deckglas überhaupt nicht überlagert wäre. In Wirklichkeit und im Gegensatz zum aufgeklebten Schnitt, wird der Schnitt natürlich aucli durch einen kapillaren Spaltraum zwischen ihm selbst und dem Objektträger, auf dem er liegt, vollständig ge- nügend an dieser seiner Unterseite mit der Flüssigkeit zwischen Ob- jektträger und Deckglas in Berührung kommen. Der Schnitt wird also von allen Seiten von den Reagentien, die man unter das Deckglas bringt, bespült, was — wie man sich bei Färbungen ohne weiteres leicht überzeugen kann — bei dem gewöhnlichen „Färben unter dem Deckglase", d. h. bei direkt auf den Schnitt gelegtem Deckglase nie geschieht (wenigstens besteht dann, wenn man soviel von der Flüssigkeit zusetzt, daß das Deck- glas „schwimmt", die Gefahr, daß Deckglas und Schnitt verrutschen, und daß das Arbeiten überhaupt ein unsauberes wird). Dazu kommt nun noch ein anderer prinzipieller Vorteil : In dem Augenblicke, wo die etwa unter dem Deckglase zu rasch hinströmende Flüssigkeit den Schnitt mit sich reißen will, bildet der Schnitt eine leichte Welle oder Falte, die dann das Deckglas berührt. Diese Be- rührung genügt vollkommen, um die Bewegung des Schnittes in statu nascendi zu bremsen: fließt die Flüssigkeit unter dem Deckglase zu schnell, so verankert der Schnitt sich automatisch durch Wellenbildung. Die Schnitte verhalten sich also beim Durchtränken mit den verschiedenen zur Anwendung gelangenden Reagentien wie freie Schnitte, indem sie allseitig umspült werden. Dem Angriff der Stromkraft gegenüber aber verhalten sie sich gleichzeitig wie auf- geklebte Schnitte, denn sie rühren sich nicht von der Stelle. In- folgedessen bekommt man z. B. Gefrierschnitte auch von wenig zu- sammenhängend gebauten Organen (z. B. Schnitte durch die Cutis) in außerordentlich befriedigender Weise in den Balsam. Nach den anderen Methoden sind Falten- und Wellenbildungen im fertigen Balsampräparat vielfach gar nicht zu vermeiden. Hier dagegen fehlen sie völlig. Meine (Hämalaun van Gieson gefärbten) 2 qc großen und 9 /< dicken Gefrierschnitte durch das schon oben 182 Wolff: Gefriermethoden u. Gefriermikrotome im allgemeinen. XXV, 2. erwähnte Hämangiom liegen als fertige , in Balsam eingeschlossene Präparate so glatt unter dem Deckglase, als ob es mit Wasser auf- geklebte, tadellos geglättete Paraffinschnitte wären. Ich führe dieses günstige Ergebnis darauf zurück, daß die außerordentlich flachen Falten, die den Schnitt verankern, mit Leichtigkeit durch das Deck- glas glatt gedrückt worden, wenn dessen Füße von Aufhellungs- medien (Xylol, Karbolxylol usw.; übrigens kann mau das Weglösen der Wachsfüßchen durch einen warmen Spatel wesentlich beschleu- nigen) weggelöst sind — daß stärkere Faltungen aber während der ganzen Prozedur nie stattfinden können. Wenn man so, wie es bisher allgemein üblich ist, verfährt, d. h. die freien Schnitte mit Spateln, ctr. von einem Medium ins andere überführt, so lassen sich stärkere Faltungen bei den meisten Objekten — wenn es sich nicht etwa ge- rade um besonders günstige handelt — kaum vermeiden. Und dabei handelt es sich fast ausschließlich um tiefe, fast nie um flache Falten (der Schnitt klappt zusammen, z. B., und ähnliches). Werden solche Falten, die ohnehin bei der Alkoholpassage besonders gern sich einstellen, nun im Alkohol noch gehärtet, so kann es nicht weiter wundernehmen, daß ihre Spuren sich im fertigen Präparat nie ganz beseitigen lassen und, wenn man den Schnitt im Balsam überhaupt hatte wieder ganz ausbreiten können, als leichte Wellungen im fer- tigen Präparat dauernd persistieren. Das ist aber besonders beim mikrophotographischen Verarbeiten der Präparate höchst störend, macht die Aufnahme fehlerfreier Übersichtsbilder sogar unmöglich. Bei meiner Methode, die freien Schnitte unter dem Deckglas, das auf Wachsfüßchen fest ruht, zu behandeln, erhält man mühelos auch von schwierigen Objekten Präparate, die bei jeder Vergrößerung die Anfertigung gleichmäßig scharfer Photogramme erlauben, weil sie eben völlig gestreckt bleiben. Es ist nur noch wenig über die Behandlung solcher Präparate zu sagen. Das meiste ergibt sich aus den verfolgten Sonderzwecken für jeden, der sich etwa der Methode bedienen sollte, von selbst. Selbstverständlich muß man die Objektträger, wenn man die Schnitte sehr langsam mit dünnen Farblösungen färben oder etwa mit Silber imprägnieren will, in einer feuchten Kammer unterbringen. Man kann ferner den Austausch der Flüssigkeiten nach Belieben langsamer oder schneller vollziehen. Je nachdem gibt man, indem man gleichzeitig den Objektträger etwas schräg hält oder aufstellt (ev. genügt eine ganz minimale Neigung), die Flüssigkeit reichlicher oder sparsamer von der einen Seite des Deckglases her zu oder XXV, 2. Wolff: Gefriermethoden u. Gefrierraikrotoiue im allgemeinen. 183 läßt sie durch einen Wollfaden oder Fließpapierstreifen, der als Heber wirkt, aus einem etwas höher stehenden Schälchen von der einen Seite zu-, auf der anderen ebenso in ein tiefer stehendes ab- fließen. Z, B. läßt sich das Fixiernatron aus vergoldeten Schnitten auf die eine wie auf die andere Weise ganz vorzüglich auswaschen. Daß man die Alkoholpassage mühelos und ohne den sonst nötigen großen Schaleuaufwand zu einer sehr allmählichen unter dem Deckglase machen kann, ist eine bekannte Tatsache, die natürlich für die nach der angegebenen Weise verankerten Schnitte ebenso, wenn nicht in noch höherem Grade , als für die Schnitte gilt , die nach der herkömmlichen Weise unter dem Deckglase behandelt werden, wo also das Deckglas dem Schnitte unmittelbar aufliegt. Sehr wesentlich scheint mir endlich noch ein Vorteil. Eine ge- nügend geräumige feuchte Kammer ist leicht und mit geringen Mitteln herzustellen. Bedient man sich einer solchen und arbeitet beim Herstellen der Gefrierschnitte entsprechend langsam, so kann man die Gefriermethode benützen, um ein Objekt in geordnete Serien von Schnitten zu zerlegen. Man fängt dann je 3 oder 4 auf- einanderfolgende Schnitte aus destilliertem Wasser mit dem nume- rierten Objektträger auf. Diesen bearbeitet man zunächst nicht weiter, sondern sclineidet das Objekt fertig, indem man immer je 3 oder 4 Schnitte auf einem Objektträger auffängt. Ist die Luft im Laboratorium sehr trocken, oder will man überhaupt schneller arbeiten, so mag ein Assistent das Auffangen der Schnitte imd die Versorgung der Objektträger (Einbringen in die feuchte Kammer) übernehmen. Daß man also, ohne einen riesigen Schalenapparat anwenden zu müssen (oder die ganz unpraktischen Porzellanplatten, die für solche Zwecke angegeben worden sind) freie Schnitte, in einer Serie geordnet, behandeln kann und dabei doch nur minimale Quantitäten von Reagentien braucht, ist für die meisten Imprägnationsmethoden zweifellos von einiger Bedeutung. Stückversilberungen (mit nach- heriger Einbettung in Paraffin) sind eben immer eine riskante Sache. Der Erfolg bleibt da stets ungewiß^ selbst bei Objekten, von denen jeder Gefrierschnitt ohne weiteres und mit absoluter Sicherheit eine gute Imprägnation zuläßt. Daß auch die von mir empfohlene Ver- silberung gewöhnlicher aufgeklebter Paraffinschnitte nicht immer so gute Resultate gibt und nicht so sicher ist, wie die von Gefrier- schnitten, sagte ich schon. Rosexzweig nahm zu dieser Methode seine Zuflucht, weil er Serien brauchte, und weil sie immerhin zu- 184 Hahn: Apparat zur Einbettung in Paraffin. XXV, 2. verlässiger als die Bloekversilbening war. Jetzt würde ich aber doch raten, in allen Fällen, wo ein Objekt an und für sich der Ge- friermethode zugänglich ist, für Fibrillenversilberung von Serum- schnitten die geschilderte Gefrierschnittserienniethode anzuwenden. Man ist keineswegs gezwungen, die Objektträger sofort weiter zu verarbeiten. Ich verwende zum Feuchthalten der Kammer Subli- matlösungen, dem Wasser, aus dem ich die Schnitte auffange, setze ich etwas Thyraol oder Formol zu. So sind die Schnitte auf Wochen vor dem Verderben geschützt und können solange ruhig in der feuchten Kammer aufbewahrt werden. Die Deckglasbedeckung wie die übrigen Prozeduren brauchen erst vorgenommen zu werden, wenn man die genügende Muße zum Verarbeiten des geschnittenen Materiales besitzt. [Eingegangen am 16. Juli 1908.] Apparat zur Einbettung in Paraffin. Von Dr. H. Hahn, Prosektor am Anat. Institut in München. Hierzu zwei Textabbildungen. Um Objekte, deren Orientierung eine besondere Sorgfalt und Vorsicht erfordert, mit möglichster Genauigkeit und Ruhe in Paraflin einbetten zu können, habe ich einen einfachen Apparat anfertigen lassen, der seinem Zwecke recht gut entspricht. In der Hauptsache besteht die Vorrichtung aus einem Metall- kästchen, dessen Oberfläche durch abwechselnde Heiß- oder Kalt- wasserzuführung bald als Heizplatte wirkt und so ein beUebig langes Flüssigerhalten des Paraffins im Einbettungsrahmen gestattet, bald als Kühlplatte verwendet werden kann, um das Paraffin zum Erstarren zu bringen. Dabei erfolgt die Umschaltung des Warm- bzw. Kalt- wasserzuflusses nicht durch einen Handgriff, sondern wird durch einen Fußhebel ausgelöst. So behält man stets beide Hände frei XXV, 2. Hahn: Apparat zur Einbettung in Paraffin. 185 und kann das zu orientierende Objekt mit Nadel oder Pinzette nötigen- i'alls so lange festhalten, bis dessen Fixierung durch den Beginn der Paraftinerstarrung genügend gesichert ist. Im einzelnen ergibt sich die Konstruktion des Einbettungs- apparates und seine Gebrauchsweise aus den beigegebenen Skizzen. Auf einer 120 cm über dem Fußboden befindlichen — um ein bequemes Arbeiten im Stehen zu ermöglichen — , durch Konsolträger an der Wand festgeschraubten Tischplatte von 70 cm Breite und 186 Hahn: Apparat zur Einbettung in Paraffin. XXV, 2. 40 cm Tiefe ist linkerseits das aus Kupferblech gefertigte Kästchen Figur 1, a angebracht. Es ist 3"5 cm hoch, seine obere Platte mißt 20:15 cm. Diese letztere ist aus besonders dickem Kupferblech gearbeitet, um jede Erschütterung durch den Druck des einströmen- den Wassers auszuschalten. Dies wird noch weiter dadurch ver- 2. hütet, daß die eng gehaltene Düse für das Zuleitungsrohr (Fig. 1, h) im Inneren des Kästchen gebogen ist und so den Wasserstrahl zu- nächst bodenwärts sendet (Fig. 2). Um eine ganz gleichmäßige Temperaturänderuug der Oberfläche zu erzielen, wird das zugeleitete Wasser im Inneren des Kästchens durch eingelötete vertikale Me- tallwände gezwungen, den aus Figur 2 a b e ersichtlichen Weg zum Abflußrohr (Fig. 1, c) zu nehmen. Bei d (Fig. 1) ist ein Dreiweg-Hahn angebracht, der mittelst XXV, 2. Hahn: Apparat zur Einbettung in Paraffin. 187 des Fußliebels F umgeschaltet wird und je nach seiner Stellung ent- weder nur dem Heiß- oder nur dem Kaltwasserstrom den Zutritt gestattet. Steht im Gebäude keine Heißwasserleitung zur Verfügung, so läßt sich durch Vorlage eines gewöhnlichen kleinen Gas- oder Spiritus- Heizkörpers das warme Wasser leicht in genügender Menge gewinnen. Will man nun den Apparat benutzen, so öffnet man zunächst die beiden Sperrhähne für die Warm- (f) und Kalt- {g) Wasserleitung unterhalb des Dreiweghahnes, stellt den letzteren durch Niedertreten des Fußhebels nach vorne auf die Zuführung des Heißwassers, bringt hierauf den auf einer dünnen Metall- oder Glasunterlage befindlichen Einbettungsrahmen auf die Platte des Kästchens und läßt denselben hier sich etwas anwärmen. Dann gießt man das Paraffin ein und überträgt das Präparat. Ist die gewünschte Orientierung erreicht, so tritt mau mit dem beim Stehen als Spielbein zu benützenden rechten Fuß, der auf dem Tritthebel ruht, den letzteren nach rück- wärts herunter, wodurch die Warmwasserzufuhr momentan abge- schnitten wird und durch das zuströmende kalte Wasser die Ab- kühlung eintritt. In 20 Sekunden ist die Temperatur der vorher auf 80*^ C erwärmten Tischplatte auf 10 bis 12^ heruntergegangen. Ist die nun sofort am Boden des Einbettungsrahmens beginnende Er- starrung des Paraffins genügend, um das Präparat zu fixieren, so überträgt man den Rahmen mit seiner Unterlage in das rechterseits im Tisch eingelassene Becken mit Kaltwasserzufluß und Standrohr, und läßt dort die Erstarrung des Blockes sich vollenden. Um jeden Stoß des zufließenden Wassers sowie einen eventuellen Ablaufrückstoß im Moment des Umschaltens auszuschließen, ist es zweckmäßig, das Zu- und Ablaufrohr zwischen Dreiweghalm und Metallkästchen nicht aus starren Metallrohren, sondern aus starken Gummischläuchen herzustellen. Die Ausführung der Vorrichtung übernimmt der Spengler Otto Reinig, München, Schillerstr. 21a I. [Eingegangen am 28. Juni 1908.] 188 Heimstädt: Spiegelkondensor und Paraboloid. XXV, 2. Spiegelkondensor und Paraboloid. Von Oskar Heimslädt. Hierzu eine Textabbildung. In dem 4. Heft des Bandes XXIV dieser Zeitschrift hat Herr Dr. H. Siedentopf einen Artikel: „Die Vorgeschichte der Spiegel- kondensoren" veröffentlicht, welcher von selten der Firma C. Reichert nicht ohne Entgegnung bleiben kann, da sein Inhalt geeignet ist, irrige Vorstellungen über die Wirkungsweise und Leistungsfähigkeit der Spiegelkondensoren dieser Firma zu erwecken. Vor allem beeinträchtigt es den Wert und auch die Neuheit dieser Dunkelfeldbeleuchtung nicht im geringsten, daß dabei längst vergessene Methoden älterer englischer Optiker wieder ver- wendet wurden. Noch vor einem halben Jahre scheint Dr. Siedentopf derselben Ansicht gewesen zu sein. Er beschrieb den Paraboloid- Kondensor unter der Überschrift : Paraboloid-Kondensor, eine neue Methoden, s. f. (1). Und im Text: „Von Wenham und Stephenson ist bereits noch viel früher ein solches Paraboloid angegeben worden. Die Wirkung wurde aber nicht recht erkannt, indem fälschlich an- genommen wurde, daß durch Totalreflexion am Deckglase eine Be- leuchtung von oben her stattfände und hierdurch das Objekt sichtbar würde. Zu jenen Zeiten war eben von Beugung des Lichtes an mikroskopischen und ultramikroskopischen Objekten noch nichts bekannt." Auch die Druckschrift der Firma Carl Zeiss: „Paraboloid-Kondensor nach Siedentopf" (nicht nach Wenham) betont die Neuheit dieser Anordnung. Mit noch größerem Recht als die Firma Zeiss konnte die Firma C. Reichert ihre Spiegelkondensoren als „neu" bezeichnen. Denn diese Instrumente waren früher als das Paraboloid von Zeiss im öffentlichen Gebrauche, ganz abgesehen davon, daß dieses optische Hilfsmittel der Spiegellinse an Ehrwürdigkeit nicht nachsteht. Nichts- destoweniger wird selbst in Wien die Version zu verbreiten gesucht, XXV, "2. He im Stadt: Spiegelkondensur und Paraboloid. jgg Reichert hätte den Spiegelkondensor, nach dem Muster des Para- boloides, der Firma Zeiss „nachgemacht". Selbst wenn dieser Firma der Nachweis gelingen würde, daß ihre Paraboloide vor dem Natur- forschertage in Stuttgart (September 1906) außerhalb der Zeiss- sclien Laboratorien und mit Erfolg im Gebrauche waren, steht der Firma C. Reichert das Recht auf die Anerkennung zu, auf diesem Gebiet unabhängig von Zeiss vorgegangen zu sein. — So- lange dieser Nachweis nicht erbracht ist, muß die Firma C. Reichert mit Entschiedenheit auf ihrem Staudpunkte beharren, als erste mit dieser neuen „alten Dunkelfeldbeleuchtung" hervor- getreten zu sein. Die „Wiederentdecker" der Spiegelkondensoren, Cotton und MouTON, ScARPA (diese haben ihre Apparate immer als Ultramikro- skope bezeichnet) und meine bescheidene Person, befinden sich eigent- lich in einer guten Gesellschaft, in der eines — Abbe, welcher doch nach dem Zeugnis des Herrn Dr. Siedentopf (2) die Anregung zu der Konstruktion des Paraboloid -Kondensors gegeben hat. Es hat den Anschein, als hätten die Versuche in dieser Richtung zu Fehlschlägen geführt und wären sie erst nach dem Bekanntwerden des Spiegel- kondensors wieder mit Erfolg aufgenommen worden. Daß auch die Ver- suche anderer mit dem Wenham sehen Paraboloid zu ungenügenden Resul- taten geführt haben, bezeugen Cotton und Mouton (3): „De son cote, M. Izarn nous avait propose cette Solution et M. Jobin nous avait construit un semblable appareil. A l'essai, il n'a pas donne de resultats bien satisfaisants. Cela tient surtout a ce qu'un miroir parabolique tres ouvert, ne peut, comme on le voit sans difficulte, donner de bonnes Images d'iin objet qui n'est pas reduit a un point situe sur Taxe." Daraus geht hervor, daß Cotton und Mouton ihre Mißerfolge auf die großen Aberrationen des Paraboloides außerhalb der Achse zurückführten. An den ungünstigen Resultaten war aber nur die Wahl des Hilfsmittels, des Wenham sehen Paraboloides, schuld, bei dessen Herstellung große technische Schwierigkeiten überwunden werden mußten. Nicht so sehr Fehler in der Form, als vielmehr Mängel in der Politur des lichtsammelnden Glaskörpers, sei es nun eine Spiegel- linse , ein Paraboloid oder Kegelstumpf, machen ein derartiges In- strument für die u 1 1 r a m i k r o s k o p i s c h e Dunkelfeldbeleuchtung gänzlich unbrauchbar. Um ein weiteres Beispiel anzuführen, sei be- merkt, daß ich bei der Nutzbarmachung des „primitiven Glaskonus" von Nachet zur Dunkelfeldbeleuchtung für ultramikroskopische Zwecke auf größere Schwierigkeiten gestoßen bin, als bei der 190 Heimstädt: Spiegelkondensor und Paraboloid. XXV, 2. Spiegellinse, weil das Schleifen einer Kegelfläclie den Arbeitern nicht geläufig war. Es ist auch möglich, daß die Ansicht des Herrn Dr. Siedentopf, zu welcher er sich am Schlüsse seiner Ausführungen bekannte, „daß die Spiegelkondensoren nur in sehr beschränktem Maße als Ersatz für die vollständigeren P^inrichtungen zur Unter- suchung ultramikroskopischer Teilchen gelten können", hemmend auf die Ausbildung der Paraboloide als ultramikroskopische Behelfe ein- gewirkt hat. Herrn Dr. Siedentopf berührt es sonderbar, daß „in den letzten Jahren die Spiegelkondensoren als sogen. ,neue vereinfachte Ultramikroskope' weite Beachtung fanden, die ihnen als Einrich- tung für Dunkelfeldbeleuchtung nicht in dem gleichen Umfange beschieden war". Dadurch wird die Frage nach der Definition des Ultramikroskopes aufgeworfen. Als Ultramikroskop ist doch wohl jedes Instrument anzusprechen, das submikroskopische Gebilde in das Gebiet der mikroskopischen Wahrnehmung überführt. Das wird ausnahmslos erreicht durch intensive Beleuchtung des Objektes im dunklen Felde. Auch das erste L^tra- mikroskop nach Zsigmondy und Siedentopf realisierte die Sichtbar- machung ultramikroskopischer Teilchen durch Dunkelfeldbeleuchtung. Nach Dr. Siedentopf (2) war die Richtung der beleuchteten Stralilen- bündel zu der Richtung der abbildenden für die Sichtbarmachung von Ultramikronen gleichgültig, und die Beleuchtung mit Strahlen höherer und Beobachtung mit Strahlen niederer Apertur (Paraboloid) wurde von ihm als „physikalisches Prinzip zur Sichtbarmachung ultra- mikroskopischer Teilchen" bezeichnet. So lange die Spiegelkonden- soren ultramikroskopische Teilchen in Flüssigkeiten (Lösungen von Kolloiden, Blut u. s. f.), ferner Geißeln und Geißelstränge von Bak- terien und vor allem die nach Dr. Siedentopf „meist ultramikro- skopische" Spirochaete pallida(l) sichtbar machen, so lange wird man dem damit ausgerüsteten Mikroskope den Charakter eines Ultramikro- skops nicht absprechen können. Vor allen Dingen zeichnen sich die Spiegelkondensoren vor den Einrichtungen der älteren englischen Oi)tiker dadurch aus, daß bei ihnen die Intensität der Beleuchtung höher ist. Damit geht Hand in Hand die vollkommenere mechanische Durchbildung dieser Apparate. Und last not least unterscheiden sich die Spiegelkondensoren von den Einrichtungen für Dunkelfeldbeleuchtuugen nach Wenham und Stephenson hauptsächlich durch die Objekte, welche damit untersucht werden. Zsigmondy, der Entdecker des ultramikrosko- XXV, 2. Heimstädt: Spiegelkondensor und Paraboloid. xQi pisclien Prinzips, nnd Dr. Siedentopf, der Schöpfer der ersten ein- schlägigen Apparate , würden sich entschieden dagegen verwahren, daß die Namen Stephenson und Wenham mit dem Begriff der Ultra- mikroskopie in irgendeinen Zusammenhang gebracht werden. Ihre Dunkelfeldbeleuchtungen können nur als Vorläufer der heutigen Ein- richtungen zur Beleuchtung im dunklen Felde angesehen werden. Allein der Umstand, daß die gewissermaßen auf der Hand liegende Idee der Spiegelkondensoren eine geraume Zeit zu ihrer endgültigen Ausbildung gebraucht hat, illustriert die Stichhaltigkeit dieser Annahme. Herr Dr. Siedentopf behauptet, die Leistungsfähigkeit der Spiegelkondensoren werde durch gewisse ihnen anhaftende Mängel beeinträchtigt. Er schreibt (l) : „Von C. Reichert ist die Paraboloid- fläche durch eine sphärische ersetzt. Infolge des großen Astigma- tismus entsteht dadurch eine große Helligkeitsverminderung gegen- über dem Paraboloide." Und weiter in der Abhandlung „Die Vor- geschichte der Spiegelkondensoren": „Seit dem Jahre 1906 macht ein weiterer Dunkelfeldkondensor von sich reden, der noch im vorher- gehenden Heft dieser Zeitschrift trotz seiner sphärischen Aberrationen ,als das Vollkommenste auf dem Gebiet der Ultra- mikroskopie' angepriesen wird, der Spiegelkondensor von Reichert." Zunächst weise ich darauf hin, daß die Anordnung, auf welche sich in meinem Artikel die betreffende Bezeichnung bezieht, nicht identisch ist mit dem ersten Spiegelkondensor, der seit dem Jahre 1906 von sich reden macht. Sie weicht vielmehr von diesem ganz wesentlich ab, indem sie die Dunkelfeldbeleuchtung nicht durch Totalreflexion am Deckglase, sondern durch Ab- biendung der Beleuchtungsbündel im apoch roma- tischen Immersionsobjektiv realisiert. So lange mir niclits Besseres, insbesondere zur leichten Sichtbarmachung der Spirochaete pallida, gezeigt wird, muß ich es ablehnen, diese „Anpreisung" ein- zuschränken. Ich kann nicht einsehen, in welcher Weise die astigmatischen Deformationen des Bildes, die doch erst bei größerer Neigung der Strahlenbündel gegen die optische Achse sich bemerkbar machen können, imstande sein sollen, die Helligkeit des Spiegelkondensors zu beeinträchtigen. Beträgt doch der Neigungswinkel der beleuch- tenden Büschel gegen die optische Achse bei der Kleinheit des Fel- des, welches bei Beobachtung mit mittelstarken und starken Trocken- objektive in Betracht kommt, je nach Vergrößerung des Mikroskopes und Brennweite des Kondensors ^2 ^'^^ - ^- 192 Heim Stadt: Spiegclkondensor und Paraboloid. XXV, 2. Betreffs der sphärisclien Aberrationen des Spiegelkondensors habe ich schon in meiner ersten Abhandlung (4) bemerkt: „Die un- genügende Strahlenvereinigung tut der Helligkeit keinen wesentlichen Abbruch, da infolge der endlichen Ausdehnung der Lichtquelle jeder Punkt der mittleren Partie des Bildes . . . von Strahlen jeglicher numer. Apertur durchsetzt wird, soweit diese nicht durch Form und Größe der Blende beschränkt wird." Mit Hilfe untenstehender Zeich- nung gedenke ich diese Behauptung zu beweisen. Das optische System AB^ mit bedeutenden sphärischen Aberra- tionen behaftet, bildet eine leuchtende Fläche ab. Es seien durch bh' und cc' die Brennebenen von zwei sehr dünnen, hohlen Strahlen- kegeln bezeichnet, welche die entsprechenden numer. Aperturen x und JC besitzen. M und N mögen zwei beleuchtete Punkte, etwa ultramikroskopische Teilchen, vorstellen, welche in der Brennebene der Strahlen von geringerer Apertur bh' liegen. Die dem Bündel mit dem Hauptstrahl iT TV angehörenden Strahlen höherer Apertur AP und BP treffen wohl das Teilchen N nicht, dafür beleuchten sie aber seitlich von N gelegene Teilchen. So trifft der Strahl BP in seiner Verlängerung das Teilchen il/, dessen Ort mit dem Schnitt- punkt der Strahlen CM und DM zusammenfällt, die einem Bündel mit dem Hauptstrahl KM angehören. Der demselben Bündel an- gehörende Strahl OA trifft verlängert den Punkt iV, welcher somit auch von Strahlen höherer Apertur (X:) getroffen wird. Durch ein anderes Bündel, dessen Hauptstrahl zu 3IK symmetrisch liegt, werden dem Punkt N Strahlen von derselben höheren Apertur, aber ent- XXV, 2. Ileimstädt: Spiegelkondensor und Paraboloid. 193 gegengesetzter Neigung zugeführt. Für jeden Punkt in jeder Ebene zwischen bb' und cc' läßt sich das nämliche beweisen. Es folgt daraus, daß die Beleuchtung irgendeines Objektpunktes nicht durch einen Punkt oder eine punktförmige Fläche der Lichtquelle geschieht, sondern durch eine Fläche von endlicher Ausdehnung, deren Größe von den sphärischen Aberrationen des Systems abhängig ist. Eine Einbuße an Intensität der Bestrahlung hat man nicht. Nur in einem besonderen Falle können die sphärischen Fehler der Spiegellinse die Helligkeit beeinträchtigen, nämlich dann, wenn als Lichtquelle die Sonne ohne Vor Schaltung von Beleuchtungslinsen ge- wählt wird. Wie wenig Wert auf die aberrationsfreie Vereinigung der be- leuchtenden Strahlen selbst von Herrn Dr. Siedentopf gelegt wird, zeigt klar seine Gebrauchsanweisung zum Paraboloid-Kondensor. Nach dieser wird das Bild der Lichtquelle durch eine Schusterkugel von bedeutender Größe auf den Spiegel des Mikroskopes konzentriert. Erstens verlassen bei dieser Anordnung die Lichtbündel die Schuster- kugel mit erheblichen Aberrationen, und zweitens verliert das Paraboloid seine Fähigkeit, einen einzigen auf der Achse gelegenen Punkt scharf abzubilden, infolge der geringen Ent- fernung der Lichtquelle. Als solche muß das von der Schusterkugel auf dem Spiegel des Mikroskopes entworfene Bild gelten. Auch beim Paraboloid-Kondensor findet die Beleuchtung des Ob- jektes unter ähnlichen Verhältnissen statt wie beim Spiegelkondensor. Der erstere liefert ebenfalls kein aberrationsfreies Bild, wenn seine Fehler auch anderer Natur und durch die mangelnde Konstanz der Brennweiten begründet sind. Der dadurch verursachte Fehler ist so enorm, daß man von einer punktförmigen Ab- bildung selbst achsennaher Objekte nicht sprechen kann, worauf Herr Dr. Siedentopf selbst einmal hingewiesen hat (5). Schon äußerlich macht sich diese Abnormität dadurch bemerkbar, daß bei einer Verkleinerung der freien Öffnung des Paraboloids zuerst die Strahlen geringerer, dann die Strahlen höherer Apertur aus- geschaltet werden. Dieses Hilfsmittel kann geradezu als Schulbeispiel eines optischen Systems gelten, das der Abbe-Helmholtz scheu Sinus- bedingung stracks zuwiderläuft. Doch beeinträchtigt dieser Fehler die Wirkung des Paraboloids als ultramikroskopischer Beleuchtungs- apparat nicht , ebensowenig wie den sphärischen Aberrationen des Spiegelkoudensors ein Einfluß auf desseu Wirkungsweise zuzuschreiben ist. Ein experimenteller Vergleich des Paraboloid-Kondensors mit dem Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXV, 2. ;j.3 194 Heimst ä dt: Spiegelkondensor und Paraboloid. XXV, 2. Plattenkondensor, welcher mit Rücksicht auf größte Lichtstärke kon- struiert ist, kann diese Darlegungen leicht bestätigen. Die Spiegelkondensoren sind vor allen Dingen in den Fällen wertvoll, in welchen es sich nicht allein um die Sichtbarmachung ultraraikroskopischer Teilchen handelt, sondern auch mikroskopische Objekte, Bakterien, Blutkörperchen u. s. f. gleichzeitig beobachtet werden sollen. Sie haben ihr Gebiet für sich und sind nicht dazu bestimmt, die älteren Anordnungen, besonders nicht die von Zsigmondy und SiEDENTOpp gemeinsam ausgearbeitete, zu verdrängen, sondern zu ergänzen. Zur quantitativen Bestimmung der ultramikroskopischen Teil- chen in festen Körpern und Flüssigkeiten wird die Methode des „opti- schen Dünnschnittes" immer ihren Vorrang behaupten. Zum Studium von Bewegungsvorgängen in kolloidalen Lösungen eignet sich dagegen besser der Spiegelkondensor, weil er lichtstärker ist und die Anwendung stärkerer Vergrößerungen gestattet. Ich weise darauf hin, daß Cotton und MouTON mit ihrem „primitiven Ultramikroskop", welches dem Spiegelkondcnsor zwar verwandt, aber wegen der einseitigen Beleuch- tung im Nachteile ist, wertvolle Beobachtungen verötfentlicht haben. Der zweiten von Herrn Dr. Siedentopf herrührenden Einrich- tung der Beleuchtung durch den Spezialkondensor und Abbiendung an der Frontlinie des Immersionsobjektivs ist der Spiegelkondensor unbedingt überlegen. Vor allem durch die Fähigkeit, mikrosko- pische und ultramikroskopische Objekte ohne Beugungsringe abzu- bilden. Ich gebe zu, daß es besondere Objekte geben mag, bei deren Beobachtung dieser Fehler zum Vorzug wird. Im allgemeinen wird er aber als Nachteil und sehr störend empfunden. So sagte z. B. Dr. L. Michaelis vor etwa 2^/, Jahren (6) : „Statt einer ein- fachen, kreisförmigen Kontur sehen wir mehrere konzentrische Ringe, die Beugungsringe ; ihr Konturen sind alle wie mit einer Rundschrift- feder gezogen , verdoppelt oder verdreifacht. Zwei sich fast be- rührende Kreise erscheinen im Ultramikroskop wie eine mehrfach konturierte 8-Figur, und andere, nur um weniges kompliziertere Ob- jekte geben infolge der gegenseitigen Überdeckung der Beugungs- ringe unentwirrbare Figuren. Für solche Objekte schafft das Ultra- mikroskop nur Verwirrung, nicht Klarheit." Aus diesen Ausführungen geht hervor, daß die Spiegelkonden- soren sehr wohl als ultramikroskopische Behelfe angesehen werden müssen und daß die Spiegellinse in mindestens demselben Maße wie das Paraboloid als geeignetes Mittel zur Erzielung von Dunkelfeld- beleuchtung gelten kann. XXV, 2. Siedentopf: Über Spiegelkondensoren. I95 Zitierte Literatur. 1) Diese Zeitschr. Bd. XXIV, 1907, H. 2, p. 104. 2) Dr. H. Siedentopf: Über die physikalischen Prinzipien u. s. f. (Berl. klin. Wochenschr. 1904, No. 32). 3) A. CoTTON u. H. Mouton: Les ültramicroscopes. Les Objets ultra- raicroscopiques. Paris 1906. p. 47. 4) Vom Verf.: Spiegelkondensor für ultramikroskopische Beobach- tungen (Zeitschr. f. Chemie u. Industrie d. Kolloide, 1907, H. 9). 5) II. Siedentopf : Dunkelfeldbeleuchtung und Ultramikroskopie (Diese . Zeitschr. Bd. XXIV, 1907, H. 1, p. 13). 6) Dr. L. Michaelis: Über das Ultramikroskop und seine Anwendung in der Chemie (Zeitschr. f. angew. Chemie, Jahrg. XIX, H. 21). [Eingegangen am 21. Mai 1908.] Über Spiegelkondensoren. Erwiderung an Herrn O. Heimstädt^ von H. Siedentopf in Jena. Der Artikel „Spiegelkondensor und Paraboloid" von 0. Heim- STÄDT beschäftigt sich mit meiner Arbeit über die Vorgeschichte der Spiegelkondensoren , welche ich im XXIV. Band dieser Zeitschrift, p. 382 , veröffentlicht habe. Dieser Artikel des Herrn H. enthält mehrere sachliche Irrtümer, von denen ich einige im folgenden richtig stellen möchte. Auf die persönlichen Anspielungen und Vermutungen des Herrn H. einzugehen, lehne ich ab. Die Antithese in der Überschrift des Herrn H. „Spiegelkondensor und Paraboloid" ist geeignet, die unrichtige Meinung zu erwecken, als ob der Paraboloidkondensor kein Spiegelkondensor wäre. Der Spiegelkondensor von Reichert zeichnet sich gegenüber andern durch zwei optische Fehler zu seinem Nachteile aus, näm- 1) Um die Diskussion noch im vorliegenden Heft schließen zu können, sandte ich im Einverständnis mit Herrn 0. Heimstädt die Korrekturbogen seiner Arbeit an Herrn Dr. Siedentopf zur Einsicht. Küster. 13* 19G Siedentopf: Über .Spiegelkondensoren. XXV, 2. lieh durch seinen Astigmatismus und durch seine sphärische Aberra- tion in der Achse. Herr H. versucht den Astigmatismus dadurch unschädlich zu machen, daß er erklärt, der Astigmatismus hänge von den Neigungs- winkeln der beleuchtenden Büschel gegen die Achse ab. Da dieser Winkel klein bleibt, soll es auch mit dem Astigmatismus nichts auf sich haben. Jedoch hängt der Astigmatismus nicht von diesem Winkel ab, sondern von dem Einfallswinkel 93 an der Kugeltläche, welcher beim Spiegelkondensor von R. im Mittel etwa 30 '^ beträgt. Die schiefen Schnittweiten im meridionalen und im sagittalen Schnitt sind nicht annähernd gleich, sondern verhalten sich wie 1 : cos^ 9?. Es re- sultiert also eine ganz merkliche, astigmatische Differenz von etwa einem Drittel der Brennweite des Kondensors für Paraxialstrahlen. Den zweiten Fehler der sphärischen Aberration in der Achse sucht Herr H. dadurch für die Praxis unschädlich zu machen , daß er ausgedehnte Lichtquellen zu Hilfe nimmt und den eintretenden Strahlenverlauf diskutiert. Mit derselben Argumentation kann man aber auch beweisen , daß man überhaupt keine Spiegelkondensoren braucht, sondern mit gewöhnlichen Linsenkondensoren auskommen kann. Denn bei ausgedehnten Lichtquellen können auch die Aberrationen im sogenannten Abbe sehen Kondensor von 1"4 Apertur unschädlich werden. Wenn es nicht auf äußerste Lichtstärke ankommt, kann man durch eine Zentralblende im sogenannten Abbe sehen Kondensor von 1"4 Apertur eine recht brauchbare Dunkelfeldbeleuchtung er- zielen, wie ich schon früher auseinandergesetzt habe (Diese Zeitschr. Bd. XXIV, 1907, p. 13). Herr H. behauptet, daß der Spiegelkondensor von R. gestattet, „ultramikroskopische Objekte ohne Beugungsringe abzubilden". Nach den Gesetzen über die Beugung des Lichtes müssen jedoch die Beugungsscheibchen, in denen die ültramikronen sich abbilden, stets von Beugungsringen umgeben sein. Wenn diese Ringe im Spiegel- kondeusor von R. nicht sichtbar sein sollten , wäre das nur ein Beweis für seine geringere Lichtstärke. Daß diese Beugungsringe bei allen Kondensoren, welche durch Zentralblende das Dunkel- feld verwirklichen, nicht so auffallend deutlich auftreten, wie in- folge der ganz anders wirkenden „Ötfnungsbcnigung" bei der Dunkel- feldbeleuchtung durch Zentralblende im Objektiv, berechtigt doch noch nicht zu der physikalisch unhaltbaren Aussage , „die Spiegel- kondensoren von R. bilden ultramikroskopische Teilchen ohne Beugungsriuge ab". XXV, 2. Siedento])!': Ül)er Spiegelkondensoren. I97 Die Diinkelfeldbilder, wie sie der Spiegelkondensor von R. zeigt, sind nicht diesem allein eigentümlich , sondern waren schon längst bei jeder ^lethode der Zentralblende im Kondensor bekannt (vgl, E. Abbe, Ges. Abh. Bd. I, p. 111). Weshalb die R. sehen Spiegelkondensoren liclitstärker als andere sein sollen, wird von Herrn H. nicht begründet. Der Leser muß sich darauf beschränken, Erklärungen anzunehmen, wie „vor allen Dingen zeichnen sicli die Spiegelkondensoren vor den Einrichtungen der älteren englischen Optiker dadurch aus, daß bei ihnen die Intensität der Beleuchtung höher ist" und der „Plattenkondensor, welcher mit Rücksicht auf größte Lichtstärke konstruiert ist" und „der Spiegelkondensor, weil er lichtstärker ist". Solche nicht weiter bewiesenen Behauptungen können wohl kaum auf allgemeine Aner- kennung rechnen. Noch weniger Beifall wird vermutlich folgende Erklärung des Herrn H. finden : „Last not least unterscheiden sich die Spiegel- kondensoren von den Einrichtungen für Dunkelfeldbeleuchtungen nach Wenham und Stephenson hauptsächlich durch die Objekte, welche damit untersuclit werden." In der Abhandlung über die Vorgeschichte der Spiegelkondensoren habe ich gezeigt, daß der Spiegelkondensor von Stephenson aus dem Jahre 1879 identisch ist mit dem REicHERTSchen. Herr H. unterscheidet also last not least zwei gleiche Apparate auch durch die Objekte , die man damit ansieht. Herrn H. laufen leider einige falsche Zitate unter. In der Ab- handlung dieser Zeitschr. Bd. XXIV, p. 104, soll ich die Spirochaete pallida als „meist ultramikroskopisch" bezeichnet haben , was nicht der Fall ist. Ich habe nicht die ganze Spirochaete so bezeichnet, sondern nur ihre Querdiraension. Ich soll darauf hingewiesen haben, daß man von einer punktförmigen Abbildung selbst achsennaher Objekte beim Paraboloid nicht sprechen könne. Ich habe nur aus- gedrückt, daß das Paraboloid wegen seiner verschieden vergrößern- den Zonen kein so präzises Bild wie ein Mikroskopobjektiv entwirft. Herr IL legt besonderen Nachdruck darauf, die Spiegelkonden- soren für Dunkelfeldbeleuchtung als etwas unbedingt Neues hin- zustellen, und glaubt die älteren englischen Optiker damit abtun zu können , daß er sie für längst vergessen erklärt. Die Verhältnisse liegen so : Das Vollparaboloid von Wenham stammt aus dem Jahre 1856, der Spiegelkondensor von Stephenson aus dem Jahre 1879. Im Jahre 1903 veraulaßte Abbe die Herstellung von Paraboloid- 198 Siedentopf: Über Spiegelkondensoren. XXV, 2. kondensoren für Dunkelfeldbeleuclitung durch Zeiss. Daß er damit nichts Neues anzugeben glaubte , geht daraus hervor , daß er das Paraboloid von Wenham zitiert und die Verhältnisse bei Dunkelfeld- beleuchtung diskutiert (vgl. Ges. Abh. Bd. I, p. 111). Das neu auf- tauchende Bedürfnis der Sichtbarmachung lichtschwacher Bakterien, wie Spirochaete i)allida, veranlaßte Verfasser, für Zeiss ein zweites Herstellungsverfahren für diese Paraboloide auszuarbeiten, das vor allem möglichste Genauigkeit der Form, daneben aber auch eine erhebliche fabrikatorische Verbilligung mit sich brachte, so daß die Paraboloide von Zeiss im Jahre 1907 zum mäßigen Preise in den Handel gebracht werden konnten. Die Firma Zeiss bezeichnete die Paraboloide nach dem Verfasser und nicht nach Wenham, um dieselben von den prak- tisch wenig brauchbaren Wenham sehen Paraboloiden zu unterscheiden und zugleich mit Rücksicht auf das neue Herstellungsverfahren. In der Genauigkeit der Formgebung unterscheiden sich also die Zeiss- schen Paraboloide von denen „nach W^enham". Insofern bedeuten sie einen neuen Fortscliritt gegenüber jenen älteren Paraboloiden. Der Spiegelkondensor von R. ist dagegen in seinen optischen Be- standteilen, insbesondere der spiegelnden Kugelfläche, identisch ge- blieben mit der von Stepiienson angegebenen Form. Herr H. müßte denn behaupten, daß man vor 29 Jahren noch nicht so gute Kugel- flächen herstellen konnte wie heute. Zu Eingang seines Artikels erklärt Herr H. , daß meine Vor- geschichte der Spiegelkondensoren geeignet sei, irrige Vorstellungen über die Wirkungsweise und Leistungsfähigkeit des Spiegelkondensors von R. zu erwecken. In jener 14 Seiten langen Vorgeschichte kommen nur folgende Sätze über den sphärischen Spiegelkondensor von R. vor (loc. cit. p. 392). „Seit dem Jahre 190G macht ein weiterer Dunkelfeldkoiidensor von sich reden , der noch im vorher- gehenden Hefte dieser Zeitschrift trotz seiner sphärischen Aberra- tionen ,als das Vollkommenste auf dem Gebiet der Ultramikroskopie' angepriesen wird, der Spiegelkondensor von Reichert. Auch dieser ist keine originale Eriindung, sondern bereits im Jahre 1879 von Stephenson in genau derselben Form als ,catoptric immersion con- denser' bekannt gegeben." Ich glaube im vorstehenden gezeigt zu haben, daß die Aberrationen des R. sehen Kondensors durch die Diskussionen des Herrn H, nicht beseitigt wurden, und gegen die Tatsache , daß schon vor etwa 30 Jahren J. W. Stepiienson den gleichen Apparat angab, hat Herr H. nichts beibringen können. Es ist also nicht zu sehen, wie aus jenen beiden zitierten Sätzen irrige XXV, 2. llofmann: Zur Injektion mit Serumtusche. I99 Vorstelhingcn über den R. sehen Kondensor erzeugt werden sollen, wie Herr H. behauptet und als Grund für seine Polemik vorgibt. Da es bei der Aufgabe der Sichtbarmachung lichtschwacher Bakterien u. dgl. wesentlich auf die " Lichtstärke der Dunkelfeld- anordnung ankommt, ist es von Interesse, einen objektiven Maßstab für die Lichtstärke verschiedener Kondensoren zu besitzen. In dem nächsten Heft dieser Zeitschrift hotie ich über ein» einfaches Ver- fahren zu berichten , das jedem Laien eine bequeme Kontrolle der 8trahlenkouzeutration in katoptrischen und dioptrischen Kondensoren ermöglicht. Ich denke, daß damit der Streit um die Lichtstärke der Kondensoren auf eine leicht diskutierbare Basis gestellt wird. t3^ Jena, am 1. August 1908. [Eingegangen am 3. August 1908.] Zur Injektion mit Serumtusche. Von Dr. Max Hofmann, Primararzt iu Meran (Tirol), Bezugnehmend auf die Mitteilung von Herrn Prof. J. Hamburger: „Injektionen mit Eiweiß- und Serumtusche zu mikroskopischen Zwecken" in dieser Zeitschrift, Bd. XXV, H. 1, erlaube ich mir mitzuteilen, daß ich die Verwendung von Serum an Stelle von Hühnereiweiß be- reits 1901 in meiner Arbeit: „Zur vergleichenden Anatomie der Gehirn- und Rückenmarksvenen der Vertebraten" , Zeitschrift für Morphologie und Anthropologie, Bd. III, p. 240, empfahl und mit dieser Blutserumtusche die für meine Arbeit notwendigen Injektionen ausgeführt habe. -'o^ [Eingegangen am 20. Juli 1908.] 200 Referate. XXV, 2. Keferate. 1. Präparationsmethoden im allgemeinen. Federici, F., L'ether sulphurique comme liquide inter- media ire pour rinclusion u la paraffine et 1 ' i 11 cl 11 s i 11 mixte a 1 a c e 1 1 o i d i n e et paraffine (Anat. Anz. Bd. XXXI, 1907, No. 21, 22, p. 601—604). Verf. hebt hervor, daß von den beiden Haupteinbettiingsmethoden in Celloidin und in Paraffin jede ihre Vorteile und Nachteile besitze und daß man schon mehrfach den Versuch gemacht habe, beide mit- einander zu verbinden, daß indessen die bisher angegebenen Methoden noch nicht hinreichend praktisch seien. Er fand nun bei seinen Untersuchungen, daß der Äther, der bei gewöhnlicher Temperatur nur Spuren von Paraffin löst, bei steigender Temperatur sehr viel mehr löst, so bei 30^ in dem Verhältnisse von einem Volumen zu einem Volumen, bei 38° in dem Verhältnisse von einem Volumen zu zwei Volumina. Er hat ihn daher an Stelle des von Heidenhain empfohlenen Schwefelkohlenstoffes zur Paraffineinbettung verwendet : nach Entwässerung in absolutem Alkohol kommen die Präparate für einige Stunden in Äther und dann in die erste Ätherparaffinmischung (Äther 5 cc , Paraffin von 50 ^ Schmelzpunkt 4 g) , dann in eine zweite ebensolche Mischung, wobei die Präparate in jeder 3 bis 4 Stunden in einem Ofen von 39 ° verweilen. Man erhält nach Verf. leicht und schnell die Ätherparaffinraischung , wenn man die beiden Substanzen, das Paraffin in Stücken, in einem wohlverschlossenen Glase bei 38 bis 40° in den Ofen bringt. Die Mischung kann mehr- XXV, 2. Referate. 201 mals angewendet werden. Die Gefahr, daß die Ätherdämpfe sicli entzünden, ist g-eringer, wenn man sich hütet, das Gefäß der Flamme zn nähern. Es genügt nun ein Verweilen von einer halben bis einer Stunde in reinem Paraffin von 50^, um eine gute Einbettung zu erhalten. Diese Methode ist auch sehr geeignet, um in sehr hartes Paraffin einzubetten (so im Sommer), denn der Aufenthalt der Präpa- rate in der hohen Temperatur wird auf diese Weise ein möglichst kurzer. Vor dem Schwefelkohlenstoffe hat der Äther den Vorzug, schneller einzudringen und schneller aus dem reinen Paraffiubade zu verdunsten. Da nun der Äther auch ein ausgezeichnetes Lösungs- mittel für Celloidin ist, so hat Verf. versucht, beide Methoden mit- einander zu verbinden, was ihm auf folgende Weise gelungen ist: Aus dem absoluten Alkohol kommen die Präparate für 12 bis 24 Stunden in Äther und dann in eine Lösung von Celloidin in Äther von 3 bis 4 Prozent, dann sofort in die erste Paraffinäther- mischung usw. , wie oben angegeben. Man erhält so sehr feine Bänderschnitte, die man, wie Paraffiupräparate , aufkleben kann; anderseits sind die Schnitte sehr elastisch , und die Form wie die Lagerbeziehungen der Teile werden in ihnen durch das Celloidin erhalten. Man schneidet mit trockenem Messer. Hört man auf, zu schneiden, so ist es allerdings praktisch, die Oberfläche des Blockes mit geschmolzenem Paraffin zu bedecken, um ein Austrocknen der oberflächlichsten Partien zu vermeiden. Die Methode hat dem Verf. ausgezeichnete Resultate , besonders auch für Embryonen , ergeben, da sie ja auch den Vorteil besitzt, daß der größte Teil des Ver- fahrens sich bei einer Temperatur von o9^ vollzieht, während die Durchtränkuug mit reinem Paraffin bei 48 bis 50 ^^ sich während 15 bis 30 Minuten ausführen läßt. Sckiefferdecker {Bo?ni). 2. Präparationsmethoden für besondere Zwecke. A. Niedere Tiere, Duesberg, J. , Sur l'existence de mitochondries dans laiuf et l'embryon d'Apis mellifica (Anat. Anz. Bd. XXXII, 1908, No. 9, 10, p. 261—265 m. 4 Figg.). Die Fixierung der Bieneneier und der Embryonen ist sehr schwierig wegen der Anwesenheit einer Chitinhaut, welche das Ein- 202 Referate. XXV, 2. dringen der Reagentien hindert; auf dieser befindet sich außerdem noch eine fettige Masse, und infolgedessen scliwiiumt das Ei auf der Oberfläche der stark wasserhaltigen Fixierungsflüssigkeiten. Es ist daher zu empfehlen, alkoholische Fixierungsflüssigkeiten anzuwenden, so die Flüssigkeit von Petrunkewitsch , doch ist dies nicht absolut nötig; Verf. hat den größten Teil seines Materials fixiert mit Essig- säuresublimat und den Osmiummischungen: HEUMANxscher, Flemming- scher und Bexda scher Flüssigkeit. Schieffe)xlecker {Bonn). Hotfmaim, R. W., Über die M o r p li o 1 o gi e und die Funktion der Kauwerkzeuge und über das Kopfnerven- system von Tomocerus plumbeus L. 3. Beitrag zur Kenntnis der CoUembolen (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXIX, 1908, p. 598—689 m. 18 Figg. u. 5 Tfln.). Beim Einfangen der Tiere muß auf drei ihrer Eigenschaften besonders Rücksicht genommen werden, nämlich auf ihre leichte Verletzlichkeit, ihre Empfindlichkeit gegen Trockenheit und ihre Licht- scheu. Zum Studium der Kopforgane ist neben der Schnittmethode die Präparation am Totalobjekt unerläßlich. Plattenmodelle wurden mit Vorteil für das Nervensystem und das Tentorium angewandt. Diese Technik bietet indessen viel Schwierigkeiten, da bei der Klein- heit des Objektes sehr starke Vergrößerungen und ziemlich dünne Schnitte angewandt werden müssen, was bei der Rekonstruktion in mangelhafter Genauigkeit des Modelies zum Ausdruck kommt. Für die Herstellung lückenloser Serien ist es nötig, entweder ziemlich junge Tiere oder solche auszuwählen, die sich gerade gehäutet haben. Als Fixierungsflüssigkeit empfiehlt Verf. nach vielen wenig befriedi- genden Versuchen mit den gebräuchlichsten Stoßen eine eigene Mischung, die aus 10 Teilen einer einprozentigen Platinclioridlösung, 5 Teilen konzentrierter wässeriger Sublimatlösung, 5 Teilen absoluten Alkohols und einem Teil Eisessig besteht. Die Objekte werden zur schnellen Fixierung in die auf 60^ C erwärmte Flüssigkeit gebracht und nach einigen Minuten für 2^/2 bis 3 Stunden in die kalte Lösung gebracht, um dann durch die gewöhnlichen Alkoholstufen geführt zu werden. Sollen nur die Chitinteile benutzt werden, genügt einfache Konservierung in TOprozentigem Alkohol. — Zur Färbung der Schnitt- serien diente ausschließlich die Heidenhain sehe Eisenhämatoxylin- Methode. Für die Zergliederung des Objektes in toto ist außer viel Übung eine binoculare Lupe unbedingt erforderlich. Bei der Präpa- ration der Weichteile — besonders des Muskeln — leistet die an- XXV, 2. Referate. 203 gegebene Fixierungsflüssigkeit recht gute Dienste. Sie läßt nämlich die Muskelelemente mit großer Deutlichkeit hervortreten ohne sie brüchig zu machen. Als Farbstoft' für die zur Zergliederung be- stimmten fleischigen Teile ist Alaunkarmin zu empfehlen. Um die Vorteile der binokularen Lupe ganz auszunützen, konstruierte sich Verf. einen kleinen Apparat, der es erlaubt, jede beliebige Seite des Gegenstandes einer gewissen Beleuchtung auszusetzen, ohne Ge- fahr zu laufen, daß durch Strömungen, die in der Flüssigkeit, in der das zu untersuchende und eventuell weiter zu präparierende Ob- jekt liegt, durch die Wärmestrahlen der Beobachtungslampe entstehen, seine Lage verändert wird. Der Apparat besteht aus einem kleinen runden Glasschälchen von etwa 6 cm Durchmesser, in welchem hori- zontal ein dünnes rundes Eisenstäbchen verläuft, das auf der einen Seite durch die Schälchenwand hindurch geht, so daß es von außen bequem in seinem Lager gedreht werden kann. Die Glasdurch- bohrung ist mit einem Lederscheibcheu gedichtet. Auf der Mitte des Stäbchens ist eine plane Fläche angeschliffen, die zur Aufnahme des Objektes dient. Das Aufkleben des letzteren wird auf folgende Weise bewerkstelligt. Man bringt das Objekt zunächst aus Wasser auf ein winziges Tröpfchen dicken Fischleim, das sich auf der ebenen Fläche der Drehachse befindet. Wichtig ist dabei, daß der Leim nur die Stelle benetzen darf, an welcher das Objekt festkleben soll. Es wird dann zunächst flüchtig unter der einfachen Lupe im Trockenen orientiert und dann das Gefäß mit schwachem Alkohol (35- bis öOprozentigj angefüllt. In diesem bleibt der Fischleim noch lange Zeit weich, so daß man genügend Zeit hat, das Objekt unter der binokularen Lupe in die definitive gewünschte Lage zu bringen. Ist dies geschehen, so füllt man starken Alkohol nach. Die Be- festigung ist dann nach einiger Zeit so stark, daß man sogar noch Präparationen vornehmen kann. Als Beleuchtungsquelle für die Lupenuntersuchung benutzt Verf. eine NERXST-Lampe, die in einer Blechhülse steckt, welche im Innern mit einer weißen nicht spiegeln- den Masse gestrichen ist und die nur durch eine kleine runde Öffnung einen Lichtkegel nach außen sendet. Bei der Präparation der chitinigen Mundwerkzeuge ist Färbung notwendig. Die meisten Farben greifen aber selbst bei tagelanger Einwirkung diese Chitin- teile gar nicht an, andere wieder geben nur eine ganz diffuse Fär- bung, die keinerlei Vorteile gewährt. Recht gut geeignet ist für diesen Zweck aber ungereinigter Holzessig. Die Objekte bleiben mindestens 24 Stunden in dieser Flüssigkeit. Oft erweist sich selbst 204 Referate. XXV, 2. ein Aufenthalt von einigen Tagen als wünschenswert. Immer ent- fernte Verf. vor dem Studium der Chitinteile die fleischigen Elemente, und zwar ausschließlich durch Präparation mit Nadeln, da Kalilauge gar nicht selten sogar die gröberen Chitinteile angreift und die feineren oft gänzlich zerstört. E. Schoehel (Neapel). Reichensperger, A., Zur Kenntnis des Genus Ophiopsita. FoRB. (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXIX, 1908, p. 173 — 192 m. 3 Figg. u. 1 Tti.). Da die Entkalkung in Alkohol mit Zusatz von Salpetersäure, ferner auch die in Chromsäure u. a. trotz aller Vorsicht meist nur unbe- friedigende Resultate gab, wandte Verf. mit geringer Abänderung das von Rousseau vorgeschlagene Verfahren (vgl. diese Zeitschr. Bd. XIV, p. 270), nach einer Einbettung in Celloidin rasch zu ent- kalken, an. Er setzte auf 100 Teile Alkohol etwa 20 bis 25 Teile 25prozentiger Salpetersäure zu. Nach dem Auswaschen in 95pro- zentigera Alkohol unter Zugabe von Kalziumkarbonat wurde in abso- luten Alkohol überführt und dann das Celloidin bis auf geringe Spuren entfernt; dann folgte in üblicher Weise Behandlung mit Chloroform, Chloroform-Paraffin, Paraffin. Dieses Verfahren hat die Vorteile sicheren Entkaikens, guter Erhaltung der Gewebe und be- ((uemen Schneidens. Gefärbt wurden die Schnitte vorzugsweise mit Eiseuhämatoxyliu- Rubin und mit Thiuoniu- Eosin. Auch Pikrokarmin und Triacidgemische lieferten je nach der Fixierung mehr oder we- niger günstigere Resultate. E. Schoehel {Neapel). Popoff, M., Eibildung bei Paludina vivipara und Chro- midien bei Paludina und Helix (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LXX, 1907, p. 43—129 m. 1 Fig. u. 5 Tfln.). Es wurden Ovarien von Tieren in verschiedenem Alter und zu verschiedenen Jahreszeiten fixiert , um möglichst alle Stadien der Eieutwicklung zu erhalten. Zur Fixierung wurden hauptsächlich und mit sehr gutem Erfolg die Gemische von Zenker , Petrunkewitsch und Flemming angewandt. Letzteres gab bei Paludina ausgezeichnete Resultate für die Kerne , schwärzte aber wegen des hohen Fett- gehaltes das Plasma; ganz besonders günstig erwies es sich aber bei Helix. Seltener wurde außerdem noch die HERMANNSche Flüssig- keit, konzentrierte wässerige Sublimatlösung, Sublimat- Alkohol u. a. m. angewandt. Zur Färbung diente am häufigsten die Heidenhain sehe Eisenhämatoxylinmethode ; zur Kontrolle wurde aber noch — und XXV, 2. Referate. 205 zwar besonders für die Nukleolusfrage — mitDELAFiELos HämatoxjMin, Hämatoxylin-Eosiu, Häraatoxylin-Säurefuclisin, Flemmings Zweifacli- tinktioii, Berlinerblau, Boraxkarmin, Gentianaviolett ii. a. m. gefärbt. Gute Dienste leisteten auch mit Boraxkarmin gefärbte und in Nelkenöl untersuchte Zupfpräparate. Schließlich behandelte Verf. noch Zwitter- drüse und Gehirn von Helix nach der Osmiumsäuremethode von Kopsch und dem Formol-Osmiumsäureverfahren von Sjövall, wobei sich zeigte, daß sich die Chromidien der Geschlechtszellen genau wie die „Osmium- netze" der Ganglienzellen darstellten. E. Sckoebel (Neapel). Popoff, M., Die Gametenbildung und die Konjugation von Carchesium poIypinumL. (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXIX, 1908, p. 478—524 m. 6 Figg. u. 1 Tfl.). Zur Fixierung diente konzentrierte warme Pikrinsäurelösung. Da es bei der Abtötung von Wichtigkeit ist, daß die Tiere sich nicht an den Stielen zusammenziehen und dadurch die ganze Ko- lonie zu einem unentwirrbaren Klumpen wird , bringt man die zur Fixierung bestimmte Carchesium -Kolonie in ein Uhrschälchen mit wenig Wasser und neigt das Schälchen so, daß man nach erfolgter Streckung der Tiere rasch mit einem kräftigen Guß das Fixatif über- gießen kann. Die Carchesien kommen dadurch plötzlich in reine Fixierungsflüssigkeit und sterben meist vollständig ausgestreckt. Die durch das Übergießen fortgeschwemmten Kolonien sammelt man in einer zu diesem Zweck untergestellten Glasschale. Gefärbt wurde mit Boraxkarmin, und der Einschluß der Objekte erfolgte in toto in Nelkenöl. E. Sckoebel {Neapel). Müller, H., Untersuchungen über Eibildung bei Clado- nemiden und Codoniden (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXIX, 1908, p. 28—80 m. 3 Tfln.). Zur Fixierung des Materials wurde Sublimat, Pikrinschwefelsäure, Pikrinessigsäure, Chromessigsäure und Hermann sehe Flüssigkeit mit Erfolg verwandt. Formol erwies sich wenig brauchbar. Zur Fär- bung wurde meist Eisenhämatoxylin, zum Teil mit den üblichen Vor- und Nachfärbungen benutzt. E. Sckoebel {Neapel). Nusbaiim, J., Weitere Regenerationsstudien an Poly- chäten. Über die Regeneration von Nereis di- versicolor (0. F. MtJLLER) (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXIX, 1908, p. 109 — 163 m. 3 Tfln.). 206 Referate. XXV, 2. Verf. rühmt Nereis als vorzügliches Material für Regenerations- studieu. Erstens sind die Tiere leicht zu beschaifen und zweitens sind sie äußerst kräftig und lebenszäh. Operierte Exemplare leben in kleinen Aquarien sehr gut monatelang zwischen Ulvablätteru und ertragen sogar eine längere Reise. Wesentlich ist ferner noch, daß diese Würmer in der freien Natur oft Verletzungen unterliegen und danach sehr energisch regenerieren, so daß man unter den ge- fangenen Exemplaren zahlreiche Individuen trifft, die mit Regenerations- kegeln von verschiedener Größe versehen sind, man kann also bequem die künstlichen Regenerate mit natürlichen vergleichen. E. Schoebel {Neapel). Merton, H., Über den feineren Bau der Ganglienzellen aus dem Zentralnervensystem von Tethys lepo- rina Cuv. (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXVIII, 1907, p. 327—357 m. 2 Tfln.). Für Übersichtsbilder, speziell bei beabsichtigter Kernfärbung sind zur Fixierung des Materials Sublimatgemische verwendbar, zur Untersuchung der feineren Plasmastruktur aber unbedingt Osmium- säuregemische vorzuziehen. Die besten Resultate wurden in letzter Beziehung mit der Hermann sehen Platinchlorid-Osmium-Essigsäure erzielt. Die schlechte Färbbarkeit derartig fixierter Objekte läßt sich teilweise durch Bleichmittel beseitigen. Während Sublimatessig- säure meist den Kern intakt erhält, den Zelleib aber schrumpfen läßt, ist bei Hermann scher Flüssigkeit das Umgekehrte der Fall. Fixierung in lOprozeutigem Formol gibt vakuolisiertes Plasma. Diese Art der Fixierung wurde deshalb auch nur dann verwandt, wenn die Objekte nach der Bielschowsky sehen Versilberungsmethode behandelt werden sollten. Bei dieser Methode erwies es sich not- wendig, die 2prozentige Silberlösung 3 bis 4 Wochen einwirken zu lassen , wenn eine gute Imprägnation des inneren Netzwerkes er- zielt werden sollte. Nicht so elektive, dafür aber vollständigere Bilder des inneren Netzwerkes wurden mit der Versilberungsmethode von Nabias erzielt, wonach die Schnitte erst mit einer Jod -Jod- kaliumlösung (Jod 1, Jodkalium 2, Wasser 300) bis zur Gelbfärbung behandelt, dann nach Abspülen in destilliertem Wasser in eine einprozentige Goldchloridlösung gebracht und nach abermaligem Ab- spülen in Wasser in Anilinw^asser (1:40 bis 100) reduziert werden. Bei Anwendung von Tannin-Brechweinsteinlösung an Stelle von Jod- Jodkalilösung konnte eine wesentlich deutlichere Färbung des Netz- XXV, 2. Referate. 207 Werkes erreicht werden. Zur Färbung- des Plasmas im allgemeinen und auch des Hüllgewebes wurden Anilinfarben benutzt, und zwar mit dem besten Erfolge Toluidinblau-p]rythrosin nach den Angaben von HoLMGiiEN. Zur Darstellung der chromophilen Bestandteile des Endoplasmas ist die NissLSche Schollenfärbung zu empfehlen, für die fasrigen Elemente unter anderem auch die IlEiDENHAiNSche Elisen- hämatoxylinmethode, zur Kernfärbung Boraxkarmin und Hämalaun. E. Schoebel {Neapel). Wassilieff, A., Die Spermatogenese von Blatta germa- nica (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LXX, 1907, p. 1—42 m. 1 Fig. u. 3 Tfln.). Da die Geschlechtsdrüsen von Blatta das ganze Jahr hindurch funktionieren, sind immer alle Stadien der Entwicklung der Ge- schlechtsprodukte leicht zu haben. Gute Fixierung der Hoden ergab Sublimat, Sublimat-Essigsäure, ferner Flemmings und Hermanns Ge- misch. Unbrauchbare Resultate wurden im vorliegenden Falle mit den Flüssigkeiten von Carnoy, vom Rath und Rabl erhalten. Bei der Färbung ist zu berücksichtigen, daß es unerläßlich ist, mehrere Methoden in Anwendung zu bringen, und die Resultate zu kombi- nieren. Eisenhämatoxylin färbt nach Sublimatlixierung die Centro- somen, nach Flemmings Gemisch dagegen die Mitochondrien vorzüg- lich. Magenta-Iudigokarmin und Pikrinsäure nach Ramon y Cajal ist für das Studium der Chromosomen geeignet. Letztere Farbe färbt auch die Centrosomeu gut, läßt aber die Mitochondrien ganz ungefärbt. E. Schoebel (Neapel). Stei'zinger, J., Ü b e r d a s L e u c h t v e r m ö g e n v o n A m p h i u r a s quam ata Sars (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXVIH, 1907, p. 358—384 m. 2 Tfln.). Als Reizmittel, um das Leuchten hervorzurufen, wurde Süß- wasser, absoluter Alkohol, Essigsäure oder Salzsäure benutzt. Me- chanische Reize, wie Berühren der Tiere, Schütteln des Behälters u. a. erwiesen sich gewöhnlich als unwirksam. Zur Feststellung des Ortes, wo das Licht auftritt, ist unbedingt Beobachtung unter dem Mikroskop notwendig. Um für Präparate die Füßchen gut ausge- streckt zu erhalten, ist Lähmung der Amphiuren vor der Fixierung fast unbedingt notwendig, wozu sich langsames Zugeben von Mag- nesiumsulfat gut eignet. Zur Fixierung selbst wurde 70prozentiger Alkohol oder ^/j prozentige Osmiumsäure benutzt, zur Entkalkung 208 Referate. XXV, 2. essigsaurer Alkohol. Salzsaiirer Alkohol ist hierzu ungeeignet, da der Schleim, der das Leuchten hervorruft, von ihm aufgelöst wird. Zur Färbung der Schnitte und Totopräparate eignet sich sehr gut Thionin in schwacher wässeriger Lösung. Außerdem kam noch Muchämatein, Mucikarmin und Delafields Hämatoxylin zur Ver- wendung, Mazerationsjiräparate lassen sich herstellen, indem man die Tiere 2 bis 3 Minuten in ein Gemisch von gleichen Teilen ^/goprozentiger Osmiumsäure und -^Z- prozentiger Essigsäure und dann 1 bis 2 Tage in ^/j^prozentige Essigsäure bringt. Nach solcher Be- handlung lassen sich durch Klopfen auf das mit Wachsfüßchen ge- stützte Deckglas die Zellen des darunter liegenden Objekts leicht aus ihrem Verbände Jösen. E. Schoebel {Neapel). Lorleberg, 0. Untersuchungen über den feineren Bau des Nervensystems der Ascidien (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXVIII, 1907, p. 212—248 m. 2 Tfln.). Von spezifischen Nervenfärbungen wurde zunächst die GoLtusche Chromsilbermethode angewandt, aber ohne jedes brauchbare Resultat. Bei achttägigem Verweilen der Stücke — es kam ausschließlich Styelopsis grossularia zur Verwendung — im Silberbad trat eine Imprägnation überhaupt nicht ein, bei längerem Verweilen darin manchmal zwar eine solche stellenweis , aber durchaus für Unter- suchszwecke ungenügend. Stücke aber, die 5 Wochen im Silberbad gelegen hatten, waren vollständig mazeriert. Mit der von Kodis beschriebenen Methode mit molybdänsaurem Hämatoxylin und Mallorys phosphormolybdänsaurem Hämatoxylin wurde zwar ein positives Re- sultat erzielt, aber durchaus nicht etwa spezifische P'ärbung der nervösen Elemente. Die gleichmäßig blaugefärbten Präparate ließen nur dann Nervenfasern als solche mit Sicherheit feststellen, wenn ihr Zusammenhang mit dem Gehirn oder den peripheren Nerven nachzuweisen war. Immerhin ergab die Methode recht brauchbare Präparate. Es wurden entweder nach den Angaben von Kodis die frischen Objekte auf 48 Stunden in eine gesättigte Lösung von Quecksilbercyanid gelegt, dann auf 48 Stunden in Formol (1:10) gebracht und schließlich in molybdänsaurem oder phosphormolybdän- saurem Hämatoxylin in der Verdünnung 1 : 20 gefärbt, oder aber es wurde, und zwar mit recht gutem Erfolge in Formol fixiertes Ma- terial ohne vorherige Wässerung, auf 5 Stunden in molybdänsaures Hämatoxylin in der Verdünnung 1 : 5 gebracht , dann direkt in 95prozentigen Alkohol überführt und unter öfterem Wechsel des- XXV, 2. Referate. 209 selben so lange hierin belassen, bis keine Farbabgabe mehr er- folgte. Da das molybdänsaure Hämatoxylin sehr schwer in die Tiefe dringt, müssen die zu färbenden Stücke möglichst klein genommen werden. Zur Färbung des Plasmas der Ganglienzellen erwies sich Hämatoxylin -|- Orange Gr als das geeignetste Mittel. Es empfiehlt sich hierbei mit Orange G recht intensiv zu färben, so daß das Häma- toxylin fast ganz verdeckt wird. Für den gleichen Zweck ist weiter auch Doppelfärbung mit Methylenblau (1 : 100) und Orange G zu empfehlen. Gute Dienste leisteten ferner Osmium-Holzessig-Präparate, Heidenhains Eiseuhämatoxylinfärbung und die Ameisensäure-Gold- methode nach Apathy. Für letztere wurde aber nicht, wie im all- gemeinen verlangt wird, frisches Material verwandt, sondern altes, in Formol (1 : 10) konserviertes. Es kamen die Stücke, bei denen das Gehirn möglichst frei gelegt sein muß, aus dem Formol auf ^1^2 Stunde in einprozentige Ameisensäure, darauf eine Stunde im Dunkeln in eine reichliche Menge von einprozentigem Goldchlorid. Hieraus wurden die Stücke nach Abspülen in einprozentiger Ameisen- säure in eine große Quantität derselben Säure gelegt und hierin 24 Stunden dem diffusen Tageslicht ausgesetzt, um schließlich nach Spülen in destilliertem Wasser auf gewöhnliche Weise zum Schneiden in Paraffin vorbereitet zu werden. — Im Interesse einer guten Fixierung und Färbung ist es immer ratsam, den Tieren die Dorsalseite zu entfernen, um das Ganglion den Flüssigkeiten besser zugänglich zu machen, um hierbei allzu starke Kontraktionen zu vermeiden, ist Narkotisierung der Tiere zu empfehlen. E. Schoebel {Neapel). Weygandt, C, Beiträge zur Ken ntnisd er Spermatogenese bei Plagiostoma Girardi (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXVIII, 1907, p. 249—290 m. 8 Figg. u. 1 Tfl.). Zur Fixierung der der Untersuchung dienenden Turbellarien wurde teils gesättigte Lösung von Sublimat in Seewasser, teils Pikrinschwefelsäure verwandt. Letzteres Reagens gab vielleicht die besseren Resultate. Zur Färbung diente fast ausschließlich Eisen- hämatoxylin mit Eosin-Nachfärbung. E. Schoebel {Neapel). Schepotieif, A., Die Echinoderiden (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXVIII, 1907, p. 291—326 m. 4 Tfln.). Die Konservierung des Materials ist wegen der geringen Durch- lässigkeit des Panzers und der Kleinheit der Tiere äußerst schwierig. Zeitsehr. f. wiss. Mikroskopie. XXV, 2. 14 210 Referate. XXV, 2. Zur Herstellung von brauchbaren Schnitten muß man die Tiere vor dem Einbetten unbedingt quer durchschneiden, da der Panzer für Paraffin undurchlässig ist. Nach längeren Versuchen fand Verf., daß für ganze Tiere nur die Fixierung mit heißem Sublimatalkohol oder mit GiLsoNScher Flüssigkeit (etwa 35*^ C) geeignet ist. Die Tiere sterben darin in ausgestrecktem Zustande. Vor der Über- tragung in Alkohol muß entweder das Endsegment oder der Rüssel abgeschnitten werden. Da die ungefärbten Tiere wegen ihrer ge- ringen Dimensionen in Paraffin geradezu unsichtbar sind, wurden sie in toto sehr stark gefärbt, wozu sich Kleinenbergs Hämatoxy- lin am geeignetsten erwies. E. Schoebel {Neapel). Schepotieff, A., Über den feineren Bau der Gordiuslar- ven (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXIX, 1908, p. 230— 241 m. 1 Tri.). Die Untersuchungen wurden hauptsächlich an möglichst dünnen Schnitten ausgeführt, dickere Schnitte als 3 jx zeigten sich schon als nicht brauchbar. Als beste Färbungsmethoden wurde Toluidin- blau mit Hämatoxylin oder Safranin mit Blochmann schem Gemisch gefunden. E. Schoebel (Neapel). Deineka, D., Das Nervensystem von Ascaris (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXIX, 1908, p. 248—307 m. 7 Figg. u. 9 Tfln.). Trotzdem ,, bisher keine mit der Methylenblaumethode angestellte Arbeit über das Nervensystem der Nematoden vorhanden ist" und trotzdem es dem Verf. gelang, „bei diesem scheinbar ungünstigen Objekt eine volle und intensive Färbung des Nervensystems mit Me- thylenblau zu erzielen", macht er doch so gut wie keine positiven Angaben, wie er seine Resultate erzielte. Er sagt nur: ,,Die Me- thylenblaumethode, welche auf einer chemischen Verwandtschaft des Farbstoffes zur Nervensubstanz beruht", wurde nur unwesentlich ge- ändert. Verf. „kombinierte bloß die Bedingungen für sein Objekt günstig, unter welchen die Verwandtschaft sich oftenbart. . . . Die zu berücksichtigenden Bedingungen sind : Konzentration der Lösung, Temperatur, Dauer der Färbung, die Art des Aufschneidens des Tieres, die Art der Fixierung in molybdänsauren Ammon u. a. m, . . . Eine unumgängliche Bedingung für die Aufnahme der Farbe ist stets das lebende Gewebe." Das ist alles was Verf. von seinem Geheimnis verrät. E. Schoebel (Neapel). XXV, 2. Referate. 211 Ude, J., Beiträge zur Anatomie und Histologie d er S iiß- wassert r icia de n (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXIX, 1908, p. 308 — 370 m. 3 Figg. u. 3 Tfln.). Das Uutersuchsraaterial war teils in Alkohol, teils in Sublimat und teils in Chrom-Osmium-Essigsäure fixiert worden und die Prä- parate wurden meist mit Eisenhämatoxylin oder Häraatoxylin- Eosin tingiert. E. Schocbel {Neapel). Bendel, W. E., Beiträge zur Kenntnis des Genus Rhyn- chodemus (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXIX, 1908, p. 525—554 m. 2 Tfln.). Das zur Verfügung stehende Material war wohl ausschließlich in Alkohol fixiert. Zum Zweck der anatomischen Untersuchung wurden die Objekte in Schnitte von 5 /* Dicke zerlegt und meist mit Ehrlich s Hämatoxylin kombiniert mit Eosin tingiert. Nur für das Studium der Muskulatur der Kopulationsapparate wurde auch noch die Van GiEsoNSche Färbung herangezogen. E. Schoebel (Neapel). Janicki, C. V., Über den Bau von Amphilina liguloidea DiEsiNG (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXIX, 1908, p. 568—597 m. 8 Figg. u. 2 Tfln.). Zur Untersuchung lagen vier in Formol fixierte Tiere vor. War auch bei der angewandten Konservierung der Gesamthabitus gut er- halten, so ließ doch die feinere Struktur der Gewebe manches zu wünschen übrig. Die Färbung der Schnitte erfolgte mit Delafields Hämatoxylin kombiniert, teils mit Bordeauxrot, teils mit Van Gieson- schem Gemisch. E. Schoebel {Neapel). Becher, S., Rhabdomolgus ruber Keferstein und die Stammform der Holothurien (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXVHI, 1907, p. 545—689 m. 12 Figg. u. 5 Tfln.). Das Material war größtenteils in Alkohol konserviert. Dieser Konservierungsart gebührt der Vorzug vor allen anderen, wenn es sich um die Untersuchung der gegenseitigen Lage der Organe han- delt. Alkohol erhält auch die Kalkkörper und gestattet immer eine beliebige Färbung. Außerdem wurde aber noch mit Flemmings und Hermanns Flüssigkeit und mit Sublimat-Eisessig (konzentrierte Subli- matlösung 4 Teile, Eisessig ein Teil) fixiertes Material untersucht. Die beiden erstgenannten Geraische sind für Kernstrukturen und 14* 212 Referate. XXV, 2. Zellformenstudien geeignet, letzteres für sonstige feinere histologische Untersuchungen. Pikrinschwefelsäure und Sublimat-Alkohol-Eisessig leisten bedeutend weniger. — Als Färbungsmittel eignen sich Borax- karmin oder Hämalaun zur Stückfärbung. Dieselbe reicht aber für dünne Schnitte (5 jut und weniger) nicht aus. Zur Schnittfärbung ist daher für Kerne Thionin, Hämatoxylin [welches ?] oder Eisenhämatoxylin zu empfehlen. Thionin kann man in konzentrierter oder verdünnter wässeriger Lösung verwenden. Da derselbe weder in Wasser noch in stärkerem Alkohol (95prozentig) viel ausgezogen wird, so kann man die Schnitte nach dem Färben in Wasser gut abspülen, dann in schwachem Alkohol (TOprozentig) differenzieren und den ge- wünschten Grad der Färbung dann in starkem Alkohol fixieren. Thionin liefert sehr gute Kerntinktion, färbt aber gleichzeitig die Klebdrüsen der Tentakeln und das Bindegewebe (besonders die Grund- substanz) tief rot, Methylgrün ist nicht besonders zu empfehlen, nur zur Hervorhebung der Schlauchdrüsen der Haut leistet es gute Dienste. Thionin läßt sich im allgemeinen nicht gut mit anderen Farbstoffen kombinieren. Nur mit Eosin erhält man eine gute Doppelfärbung. Man kanu zwar auch mit Pikrinsäure gelöst in Xylol nachfärben und erhält damit eine gute Differenzierung der verschiedenen Gewebebestandteile (die Kerne sind tiefblau, das Bindegewebe rot und alles übrige gelb), aber die Pikrinsäure zerstört in sehr kurzer Zeit erst die rote und dann die blaue Färbung des Thionins. Wie Thionin, liefert auch Hämatoxylin neben einer guten Kernfärbung recht brauchbare Bilder vom Bindegewebe, freilich ohne verschiedene Farbtöne. Sehr deutlich treten bei Hämatoxylinfärbung Schlauchdrüsen und Kutikularbildungen hervor. Zur Nachfärbung verwendet man am besten solche Farbstoffe, die von der Muskulatur stark aufgenommen werden, also in erster Linie Eosin und Orange, Während Thionin und Hämatoxylin neben dem Kern auch das Binde- gewebe hervorheben, die Muskeln aber so gut wie ungefärbt lassen, zeigt Eisenhämatoxylin eine starke Neigung zur Muskulatur, während es vom Bindegewebe gar nicht zurückgehalten wird. Zu Doppel- färbungen verwendet man daher bei diesem Farbstoff am zweck- mäßigsten Bindegewebsfarbstoffe, wie Wasserblau und Säurefuchsiu. Handelt es sich um den Nachweis histologisch schwer darstellbarer Strukturen, wie Wimpern, Basalkörner, Stützfaserndes Nervensystems, so empfiehlt es sich mit Pikrinsäure gelöst in Xylol nachzufärben, weil diese die Gewebe außerordentlich durchsichtig läßt, so daß die vom Eisenhämatoxylin tiefschwarz fingierten Elemente um so schärfer XX\ , 2. Referate. 213 hervortreten. Beabsichtigt man nicht in erster Linie die Kerne, sondern das Plasma und seine Produkte färberisch zu differenzieren, so kombiniert man zweckmäßig einen Bindegewebs- und einen Muskel- farbstoff. Sehr günstige Resultate erhält man mit Eosin und Wasser- blau, ersteres in konzentrierter, letzteres in verdünnter wässeriger Lösung und am besten mit einem Zusatz von konzentrierter wässeriger Pikrinsäurelösung im Verhältnis 1 : 5. Wasserblau ist ein Bindege- websfarbstolf, der fast ausschließlich die Bindegewebsfasern, nicht aber die Grundsubstanz färbt. Kombiniert man denselben mit Safra- nin, so kann man leicht die Färbuugsdauer so abmessen, daß das Wasserblau sonst überall verdrängt ist und nur von den Binde- gewebsfasern zurückgehalten wird. Handelt es sich aber um die Untersuchung der Bindegewebsgrundsubstanz, so benutzt man besser Thiouin, Hämatoxylin oder Dahlia. Der letztgenannte Farbstoff ist, seiner außerordentlich kräftigen Wirkung halber , dort mit Vorteil anzuwenden, wo die Anwesenheit oder das Fehlen einer feinen Bindegewebslamelle nachgewiesen werden soll. Säurefuchsin ist zum Studium des Bindegewebes das Holothurien wenig geeignet, wird aber hier wie bei anderen Tiergruppen mit Vorteil zur Untersuchung des Nervensystems angewendet. JE. Sclioebel {Neapel). Dogiel, T., Catenata, eine neue Mesozoengruppe (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXXIX, 1908, p. 417—477 m. 1 Fig. u. 3 Tfln.). Die dem Darm des Wirtstieres entnommenen Parasiten halten sich im Uhrschälchen etwa 5 bis 6 Stunden, auf dem Objektträger unter dem Deckglas dagegen aber nur höchstens eine bis 2 Stunden am Leben. Zum Fixieren kam schwache FLEMMiNGSche Lösung, Sublimat mit Essigsäure und das CARNOvsche Gemisch zur Verwen- dung. Für Totalpräparate erwies sich das erste und letzte P^ixatif als die geeignetsten, da die Gestalt der Parasiten in ihnen am besten erhalten bleibt, für Schnittserien ist aber Sublimat-Essigsäure vorzuziehen, weil nach dieser Fixierungsmethode die Eiseuhämatoxy- linfärbung, die fast ausschließlich benutzt wurde, am besten gelingt. Die mit FLEMJiiNGSchem Gemisch fixierten Totalpräparate wurden meist mit Safraniu, seltener mit Pikrokarmin gefärbt, während nach Carnoys Gemisch Hämalaun die besten Resultate gab. E. Schoebel (Neapel). 214 Referate. XXV, 2. B, Wirheitiere, Herzog, F., Über das Vorkommen von Bliitkörperchen- schatten im Blutstrom und über den Bau der roten Blutkörperchen fArch. f. mikrosk. Anat. Bd. LXXI^ 1908, p. 492—50.3 m. 9 Tfln.). Außer fixierten, mit Giemsa scher Lösung gefärbten Trocken- präparaten untersuchte Verf. unter anderem auch solche, auf denen künstlich die Schatten erzeugt waren. Nach zahlreichen Versuchen fand er im Karbol-Fuchsin, wie er zur Färbung der Tuberkelbazillen gebraucht wird (Fuclisin 4, absoluter Alkohol 40, Karbolsäure 20, destilliertes Wasser 200), eine hierzu geeignete Farbe, indem die- selbe gleichzeitig das Hämoglobin auslaugt und die Zellen fixiert und färbt. Nach möglichst dünnem Ausstrich des Blutes wuirden die Präparate 2 Stunden bei Zimmertemperatur getrocknet und dann ohne vorheriges Fixieren während 24 Stunden in verdünntem Karbol- Fuchsin (1 : 9) gefärbt. Nach Abspülen und Trocknen wurden dann die Präparate in Kanadabalsam eingeschlossen. E. Schochel {Neapel). Butterfield , E. E. , Über die u n g r a n u 1 i e r t e n Vorstufen der M y e 1 c y t e n und ihre Bildung in Milz, Leber und Lymphdrüsen. [Ein Beitrag z